19【毕业设计】鹅血清及卵黄中IgG的测定文档

最适抗原抗体反应时间的确定将抗原抗体分别作用，进行测定。

最适酶标抗体作用时间的确定酶标抗体作用时间分别为，进行测定。

最适底物作用时间的确定底物反应时间分别为，进行测定，观察结果。

阳性判定值的确定检测方法在结果判断上是定性测定，对受检标本分别用阳性阴性表示。

根据国家流行病学调查要求，阳性值应为阴性倍。

检测方法的检验敏感性试验将份成年鹅血清的混合液以牛血清白蛋白的液作倍稀释，按照已建立的进行检测，测定值，确定鹅血清的敏感反应滴度。

重复性试验选取数份鹅血清及鹅卵黄，按建立的进行五次检测，测定其值变化的稳定性和重复性。

包被特异性试验结果将正常小鼠血清倍稀释，免疫将混合鹅血清，分别用牛血清白蛋白的液作倍稀释，每个稀释度加五孔，进行检测并计算出每个稀释度的平均值。

选择值最接近于时被检鹅血清的稀释倍数作为被检鹅血分别包被酶标反应板，对鹅血清倍稀释进行检测。

被检鹅血清的最佳稀释倍数的确定按包被抗原的工作浓度将抗原稀释，包被酶标板，然后自制备参考阴性卵黄的种蛋，分装冻存于冰箱中。

双抗体夹心试验各反应条件的确定包被抗体工作浓度确定用的碳酸盐缓冲液将小鼠抗鹅稀释成，油相水相固相，弃去水相，然后将油相与固相充分混合，室温下挥发掉氯仿，蒸馏水稀释至原体积。

蒸馏水稀释倍，分装冻存与冰箱中。

鹅卵黄参考阳性的制备无菌取卵黄份，充分混合，蒸馏水倍稀释该卵黄取性的制备无菌取卵黄份，充分混合，取此混合液，蒸馏水倍稀释，用稀酸调节至，转分钟离心。

蒸馏水稀释沉淀至卵黄原体积，将卵黄生理盐水氯仿按混合，混匀后臵室温，克离心力离心，分成三相理盐水透析小时，其间换液数次。

最后将提取液浓缩至原体积，重复次。

分装冻存于冰箱。

鹅血清参考阳性的制备取吉林白鹅血清分，混合该血清取自制备参考阴性血清的吉林白鹅，分装冻存于冰箱。

鹅卵黄参考阴白鹅血清份充分混合份，取此混合液，加生理盐水，充分混合，逐滴加入饱和硫酸铵，边加边搅拌，混合均匀后静臵分钟，然后转分钟离心分钟，弃去沉淀，上清装入透析袋，常水流水透析小时，然后生∕液洗脱平衡。

并向其中加入上步中所提取的粗提的样本，以液洗脱，收集第二蛋白洗脱峰，浓缩即为精提。

鹅血清及卵黄参考阴性与参考阳性的选择及制备鹅血清参考阴性的制备取吉林装入透析袋透析除盐，在常水中透析过夜，再在生理盐水中于透析，中间换液数次，直至完全除去或离心去沉淀离心去沉淀去除杂质蛋白上清液即为粗提的将凝胶活化浮选装柱，以，弃去上清于沉淀中加入生理盐水，使之溶解，再加饱和溶液，使成溶液，充分混合后，静臵离心，弃去上清，以除去白蛋白，重复次用生理盐水溶解沉淀，入饱和溶液，使成为溶液，充分混合后，静臵离心，弃沉淀在上清液中再加饱和溶液，使成溶液，充分混合，静臵离心磁力搅拌器型磁力加热搅拌器分光光度计型酶联免疫检测仪型孵化器冰箱酸度计板。

实验方法鹅血清的提取取健康吉林白鹅的混合血清，加生理盐水，再逐滴加化物酶分析纯北京鼎国生物有限公司鹅鼠抗鹅抗体兔抗鹅酶标抗体为本实验室自制仪器与设备恒温箱电子天平孔聚苯乙烯酶标反应板台式离心机低速离心机北京医用离心机厂种鹅场主要试剂磷酸氢二钠分析纯北京化工厂磷酸二氢钠分析纯北京化工厂牛白蛋白生化试剂分析纯上海新兴生物有限公司氯化钠分析纯北京化工厂饱和硫酸氨分析纯北京鼎国生物有限公司辣根过氧附剂测定法，简称对鹅血清及卵黄中的含量进行了测定，现将结果报告如下。

材料与方法试验材料试验动物吉林白鹅种蛋购于吉林省。

其中是最主要的免疫球蛋白，约占动物血浆丙种球蛋白的，分子量约万，含糖。

具有提高免疫力增强机体抵抗力等作用。

目前国内尚没有定量检测鹅的相关报道。

本文应用酶联接免疫吸蛋白。

它广泛存在于机体的血清体液及粘膜分泌液中，是构成机体体液免疫的主要物质，免疫球蛋白分为和，。

禽类已确证的免疫球蛋白有三种即和蛋白。

它广泛存在于机体的血清体液及粘膜分泌液中，是构成机体体液免疫的主要物质，免疫球蛋白分为和，。

禽类已确证的免疫球蛋白有三种即和。

其中是最主要的免疫球蛋白，约占动物血浆丙种球蛋白的，分子量约万，含糖。

具有提高免疫力增强机体抵抗力等作用。

目前国内尚没有定量检测鹅的相关报道。

本文应用酶联接免疫吸附剂测定法，简称对鹅血清及卵黄中的含量进行了测定，现将结果报告如下。

材料与方法试验材料试验动物吉林白鹅种蛋购于吉林省种鹅场主要试剂磷酸氢二钠分析纯北京化工厂磷酸二氢钠分析纯北京化工厂牛白蛋白生化试剂分析纯上海新兴生物有限公司氯化钠分析纯北京化工厂饱和硫酸氨分析纯北京鼎国生物有限公司辣根过氧化物酶分析纯北京鼎国生物有限公司鹅鼠抗鹅抗体兔抗鹅酶标抗体为本实验室自制仪器与设备恒温箱电子天平孔聚苯乙烯酶标反应板台式离心机低速离心机北京医用离心机厂磁力搅拌器型磁力加热搅拌器分光光度计型酶联免疫检测仪型孵化器冰箱酸度计板。

实验方法鹅血清的提取取健康吉林白鹅的混合血清，加生理盐水，再逐滴加入饱和溶液，使成为溶液，充分混合后，静臵离心，弃沉淀在上清液中再加饱和溶液，使成溶液，充分混合，静臵离心，弃去上清于沉淀中加入生理盐水，使之溶解，再加饱和溶液，使成溶液，充分混合后，静臵离心，弃去上清，以除去白蛋白，重复次用生理盐水溶解沉淀，装入透析袋透析除盐，在常水中透析过夜，再在生理盐水中于透析，中间换液数次，直至完全除去或离心去沉淀离心去沉淀去除杂质蛋白上清液即为粗提的将凝胶活化浮选装柱，以∕液洗脱平衡。

并向其中加入上步中所提取的粗提的样本，以液洗脱，收集第二蛋白洗脱峰，浓缩即为精提。

鹅血清及卵黄参考阴性与参考阳性的选择及制备鹅血清参考阴性的制备取吉林白鹅血清份充分混合份，取此混合液，加生理盐水，充分混合，逐滴加入饱和硫酸铵，边加边搅拌，混合均匀后静臵分钟，然后转分钟离心分钟，弃去沉淀，上清装入透析袋，常水流水透析小时，然后生理盐水透析小时，其间换液数次。

最后将提取液浓缩至原体积，重复次。

分装冻存于冰箱。

鹅血清参考阳性的制备取吉林白鹅血清分，混合该血清取自制备参考阴性血清的吉林白鹅，分装冻存于冰箱。

鹅卵黄参考阴性的制备无菌取卵黄份，充分混合，取此混合液，蒸馏水倍稀释，用稀酸调节至，转分钟离心。

蒸馏水稀释沉淀至卵黄原体积，将卵黄生理盐水氯仿按混合，混匀后臵室温，克离心力离心，分成三相，油相水相固相，弃去水相，然后将油相与固相充分混合，室温下挥发掉氯仿，蒸馏水稀释至原体积。

蒸馏水稀释倍，分装冻存与冰箱中。

鹅卵黄参考阳性的制备无菌取卵黄份，充分混合，蒸馏水倍稀释该卵黄取自制备参考阴性卵黄的种蛋，分装冻存于冰箱中。

双抗体夹心试验各反应条件的确定包被抗体工作浓度确定用的碳酸盐缓冲液将小鼠抗鹅稀释成分别包被酶标反应板，对鹅血清倍稀释进行检测。

被检鹅血清的最佳稀释倍数的确定按包被抗原的工作浓度将抗原稀释，包被酶标板，然后将混合鹅血清，分别用牛血清白蛋白的液作倍稀释，每个稀释度加五孔，进行检测并计算出每个稀释度的平均值。

选择值最接近于时被检鹅血清的稀释倍数作为被检鹅血清的最佳稀释倍数。

待检鹅卵黄最佳稀释倍数的确定按包被抗原的工作浓度将抗原稀释，包被酶标板，然后将混合鹅卵黄，分别用牛血清白蛋白的液作倍稀释，每个稀释度加五孔，进行检测并计算出每个稀释度的平均值。

选择值最接近于时被检鹅卵黄的稀释倍数作为被检鹅血清的最佳稀释倍数。

按包被抗原的工作浓度将抗原稀释，包被酶标板，然后分别将五份卵黄混合，分别用牛血清白蛋白的液作倍稀释，每个稀释度加五孔，进行检测并计算出每个稀释度的平均值。

选择值最接近于时被检鹅卵黄的稀释倍数作为被检卵黄的最佳稀释倍数。

最适抗原包被时间的确定分别将小鼠抗鹅包被后于过夜后过夜，进行测定，观察结果。

最适抗原抗体反应时间的确定将抗原抗体分别作用，进行测定。

最适酶标抗体作用时间的确定酶标抗体作用时间分别为，进行测定。

最适底物作用时间的确定底物反应时间分别为，进行测定，观察结果。

阳性判定值的确定检测方法在结果判断上是定性测定，对受检标本分别用阳性阴性表示。

根据国家流行病学调查要求，阳性值应为阴性倍。

检测方法的检验敏感性试验将份成年鹅血清的混合液以牛血清白蛋白的液作倍稀释，按照已建立的进行检测，测定值，确定鹅血清的敏感反应滴度。

重复性试验选取数份鹅血清及鹅卵黄，按建立的进行五次检测，测定其值变化的稳定性和重复性。

包被特异性试验结果将正常小鼠血清倍稀释，免疫过鹅的小鼠血清按倍稀释，进行比较，结果表明正常小鼠血清与免疫的小鼠血清值差异显著。

表包被抗体特异性实验结果孔号小鼠血清免疫鹅的小鼠血清稀释倍数平均值蛋白标准含量曲线检测结果双抗体夹心值与卵黄含量的标准曲线双抗体夹心值与卵黄含量通过做图看出它们之间成幂函数关系，故求得回归方程为表双抗体夹心值与鹅卵黄含量值鹅卵黄含量标准曲线值蛋白含量系列对数系列图双抗体夹心值与鹅卵黄含量双抗体夹心值与血清含量的标准曲线双抗体夹心值与血清含量通过做图看出它们之间成幂函数关系，故求得回归方程为表双抗体夹心值与血清含量值血清含量标准曲线值蛋白含量系列乘幂系列图双抗体夹心值与含量鹅血清中含量与鹅卵黄中含量变化的比较表天和天鹅胚血清中含量与鹅卵黄含量的比较有日龄卵黄含量血清含量图由图可见，鹅胚血清中抗体从日龄升高到日龄出壳天，差异显著鹅卵黄中抗体从日龄鹅血清中含量与鹅卵黄中含量变化的比较天天含量卵黄含量血清含量到日龄出壳后降至，差异显著。

整个阶段鹅血清中抗体含量总体呈现上升的趋势而鹅卵黄抗体含量总体呈现下降的趋势但是血清中抗体含量浓度的最高值也未超过卵黄抗体浓度的最低值，卵黄中抗体浓度远高于血清中抗体浓度。

讨论双抗体夹心法近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以