从开蓝色花矮牵牛基因文库中获取基因利用聚合酶将基因与质粒连接后导入玫瑰细胞将基因直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞解析获取目基因，可先提取矮牵牛蓝色花，经逆转录获得互补，再经技术扩增，正确基因文库构建时是将目基因与载体连接起来，形成重组载体，再导入受体菌中储存和扩增，提取目基因时不需使用限制酶，错误连接目基因与质粒酶是连接酶，错误将目基因导入植物细胞，常用农杆菌转化法，不使用大肠杆菌，错误。答案江苏单科小鼠杂交瘤细胞表达单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体可变区基因目基因后再重组表达。下列相关叙述正确是多选设计扩增目基因引物时不必考虑表达载体序列用方法扩增目基因时不必知道基因全部序列体系中定要添加从受体细胞中提取聚合酶定要根据目基因编码产物特性选择合适受体细胞解析设计引物时应当与表达载体两端序列进行互补配对，错误法扩增目基因只需要知道基因两端序列设计合适引物即可，而不必知道其全部序列，正确中应用耐高温聚合酶，错误子杂交鉴定目基因是否已导入受体细胞解析过程是以为模板合成过程，即逆转录过程，需要逆转录酶催化，故正确过程表示利用扩增目基因，在过程中，不需要解旋酶，是通过控制温度来达到基因工程技术生产羧酸酯酶制剂流程如图所示，下列叙述正确是多选过程需使用逆转录酶过程需使用解旋酶和获取目基因过程使用感受态细胞可用溶液制备过程可利用分最关键步，在体外进行。命题预测基因工程基本操作程序是近几年高考高频考点，分值比重较大，与其他工程结合考查情况较常见，考查形式既有非选择题又有选择题。考向预测基因工程基本操作技术广东卷利用成熟红细胞，原因是它无细胞核，不能合成蛋白质。还应注意问题有基因表达载体中，启动子片段起始密码子终止子片段终止密码子。基因表达载体构建是最核心动物受精卵般不用体细胞微生物大肠杆菌酵母菌等。要合成糖蛋白有生物活性胰岛素则必须用真核生物酵母菌需内质网高尔基体加工分泌般不用支原体，原因是它营寄生生活定不能用哺乳动物悉标记基因种类和作用标记基因作用筛选检测目基因是否导入受体细胞，常见有抗生素抗性基因发光基因表达产物为带颜色物质等。对受体细胞模糊不清受体细胞常用植物受精卵或体细胞经组织培养酶分别切割质粒和目基因，这样可避免质粒和质粒之间目基因和目基因之间连接。目基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达过程，称为转化。转化实质是目基因整合到受体细胞染色体基因组中。不熟二步存在黏性末端连接现象，第四步检测存在分子水平杂交方法。原核生物作为受体细胞优点繁殖快多为单细胞遗传物质相对较少。般情况下，用同种限制酶切割质粒和含有目基因片段，但有时可用两种限制因插入位点不是随意基因表达需要启动子与终止子调控，所以目基因应插入到启动子与终止子之间部位。基因工程操作过程中只有第三步将目基因导入受体细胞没有碱基互补配对现象第步存在逆转录法获得，第蛋白质抗原抗体杂交杂交带个体水平检测包括做抗虫抗病接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度对基因工程产品与天然产品功能进行活性比较，以确定功能活性是否相同等易混易错基因工程操作个易错点目基定类型检测内容方法结果显示分子检测导入检测目基因是否进入受体细胞分子杂交和之间杂交带转录检测目基因是否转录出分子杂交和之间杂交带翻译检测目基因是否翻译成上表达将含有目基因表达载体提纯取卵受精卵显微注射受精卵发育获得具有新性状动物处理细胞感受态细胞重组表达载体分子与感受态细胞混合感受态细胞吸收分子目基因检测与鉴体细胞转化生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目基因插入质粒上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞破基因表达载体构建警示插入目基因表达需要调控序列，因而用作载体质粒插入基因部位之前需有启动子，之后需有终止子。两次使用限制酶为同种酶，这样形成黏性末端碱基之间互补，便于连接。将目基因导入受有物种中分离出来，如从基因文库或文库中获取人工合成目基因常用方法有反转录法和化学合成法利用技术扩增目基因通过技术可对已获取目基因进行扩增，以获取大量目基因。核心突个末端是平末端当Ⅰ切割质粒时，氨苄青霉素抗性基因已受到破坏，因此，在筛选时，应将受体细胞置于含有四环素培养基上培养。答案考点二基因工程操作程序分析目基因获取途径从自然界中已Ⅰ才能完整地切下该抗病基因个质粒被限制酶ⅠⅠⅠ同时切割后可得到个片段，产生个末端，从表格信息可知，ⅠⅠ切割产生个末端是黏性末端，而Ⅰ切割产生个Ⅰ才能完整地切下该抗病基因个质粒被限制酶ⅠⅠⅠ同时切割后可得到个片段，产生个末端，从表格信息可知，ⅠⅠ切割产生个末端是黏性末端，而Ⅰ切割产生个末端是平末端当Ⅰ切割质粒时，氨苄青霉素抗性基因已受到破坏，因此，在筛选时，应将受体细胞置于含有四环素培养基上培养。答案考点二基因工程操作程序分析目基因获取途径从自然界中已有物种中分离出来，如从基因文库或文库中获取人工合成目基因常用方法有反转录法和化学合成法利用技术扩增目基因通过技术可对已获取目基因进行扩增，以获取大量目基因。核心突破基因表达载体构建警示插入目基因表达需要调控序列，因而用作载体质粒插入基因部位之前需有启动子，之后需有终止子。两次使用限制酶为同种酶，这样形成黏性末端碱基之间互补，便于连接。将目基因导入受体细胞转化生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目基因插入质粒上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞上表达将含有目基因表达载体提纯取卵受精卵显微注射受精卵发育获得具有新性状动物处理细胞感受态细胞重组表达载体分子与感受态细胞混合感受态细胞吸收分子目基因检测与鉴定类型检测内容方法结果显示分子检测导入检测目基因是否进入受体细胞分子杂交和之间杂交带转录检测目基因是否转录出分子杂交和之间杂交带翻译检测目基因是否翻译成蛋白质抗原抗体杂交杂交带个体水平检测包括做抗虫抗病接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度对基因工程产品与天然产品功能进行活性比较，以确定功能活性是否相同等易混易错基因工程操作个易错点目基因插入位点不是随意基因表达需要启动子与终止子调控，所以目基因应插入到启动子与终止子之间部位。基因工程操作过程中只有第三步将目基因导入受体细胞没有碱基互补配对现象第步存在逆转录法获得，第二步存在黏性末端连接现象，第四步检测存在分子水平杂交方法。原核生物作为受体细胞优点繁殖快多为单细胞遗传物质相对较少。般情况下，用同种限制酶切割质粒和含有目基因片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目基因，这样可避免质粒和质粒之间目基因和目基因之间连接。目基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达过程，称为转化。转化实质是目基因整合到受体细胞染色体基因组中。不熟悉标记基因种类和作用标记基因作用筛选检测目基因是否导入受体细胞，常见有抗生素抗性基因发光基因表达产物为带颜色物质等。对受体细胞模糊不清受体细胞常用植物受精卵或体细胞经组织培养动物受精卵般不用体细胞微生物大肠杆菌酵母菌等。要合成糖蛋白有生物活性胰岛素则必须用真核生物酵母菌需内质网高尔基体加工分泌般不用支原体，原因是它营寄生生活定不能用哺乳动物成熟红细胞，原因是它无细胞核，不能合成蛋白质。还应注意问题有基因表达载体中，启动子片段起始密码子终止子片段终止密码子。基因表达载体构建是最核心最关键步，在体外进行。命题预测基因工程基本操作程序是近几年高考高频考点，分值比重较大，与其他工程结合考查情况较常见，考查形式既有非选择题又有选择题。考向预测基因工程基本操作技术广东卷利用基因工程技术生产羧酸酯酶制剂流程如图所示，下列叙述正确是多选过程需使用逆转录酶过程需使用解旋酶和获取目基因过程使用感受态细胞可用溶液制备过程可利用分子杂交鉴定目基因是否已导入受体细胞解析过程是以为模板合成过程，即逆转录过程，需要逆转录酶催化，故正确过程表示利用扩增目基因，在过程中，不需要解旋酶，是通过控制温度来达到解旋目，故错利用氯化钙处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，故错检测目基因是否成功导入受体细胞染色体中，可以采用分子杂交技术，故正确。答案考向预测二基因工程与其他工程联系山东卷人组织纤溶酶原激活物是种重要药用蛋白，可在转基因母羊羊乳中获得。流程如下基因与载体用切割后，通过连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目基因是否已插入受体细胞，可采用技术。为获取更多卵母细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其。采集精子需要经过，才具备受精能力。将重组表达载体导入受精卵常用方法是。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目基因胚胎进行。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞。若在转基因母羊羊乳中检测到，说明目基因成功表达。解析用同种限制酶切割质粒和含有基因片段可产生相同黏性末端，便于构建基因表达载体通常采用分子杂交技术来检测目基因是否已插入受体细胞。为获得更多卵母细胞，通常对供体母羊注射促性腺激素使其超数排卵采集精子需要经过获能处理才具备受精能力。通常用显微注射法将重组表达载体导入动物受精卵为了获得母羊，移植前需要对已成功转入目基因胚胎进行性别鉴定早期胚胎细胞具有全能性，可利用胚胎分割和胚胎移植技术获得多个转基因个体。基因表达产物为人组织纤溶酶原激活物，若在转基因母羊羊乳中检测到人组织纤溶酶原激活物，说明目基因成功表达。答案同种限制性核酸内切酶或同种限制酶分子杂交或核酸探针超数排卵获能处理显微注射法性别鉴定全能性或人组织纤溶酶原激活物考点三基因工程应用和蛋白质工程乳腺生物反应器与工程菌生产药物比较核心突破比较项目乳腺生物反应器工程菌基因结构动物基因结构与人类基因结构基本相同细菌或酵母菌等生物基因结构与人类基因结构有较大差异基因表达合成药物蛋白与天然蛋白质相同细菌细胞内没有内质网高尔基体等，产生药物蛋白可能没有活性受体细胞哺乳动物受精卵微生物细胞生产条件不需严格灭菌，温度等条件对其影响不大需严格灭菌，需严格控制工程菌所需外界条件药物提取从动物乳汁中提取从微生物细胞中提取基因治疗与基因诊断原理操作过程进展基因治疗基因表达把正常基因导入有基因缺陷细胞中，以表达出正常性状来治疗临床实验基因诊断碱基互补配对制作特定探针与病人样品混合，分析杂交带情况临床应用基因工程与蛋白质工程比较项目区别与联系蛋白质工程基因工程区别过程预期蛋白质功能设计预期蛋白质结构推测应有氨基酸序列找到相对应脱氧核苷酸序列获取目基因构建基因表达载体将目基因导入受体细胞目基因检测与鉴定实质定向改造或生产人类所需蛋白质定向改造生物遗传特性，以获得人类所需生物类型或生物产品结果可生产自然界没有蛋白质只能生产自然界已有蛋白质联系蛋白质工程是在基因工程基础上，延伸出来第二代基因工程基因工程中所利用些酶需要通过蛋白质工程