87页药典附录无菌检查和微生物(完稿)

供试液制备若需加温时，可采用其他经验证方法，但应均匀加热，且温度不应超过。

新增贴剂供试液制备供试液制备经验证方法制备成供试液在无菌环境进行。

避免粘贴面粘合在起。

置于含有表面活性剂如聚山梨酯或卵磷脂稀释剂中，制成供试液。

充分振摇。

也可采用以其他适宜方法制备成供试液。

具抑菌活性供试品增修订内容删除应消除供试液抑菌活性修改为当供试品具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便快速方法，应避免损伤供试品中污染微生物。

在供试品溶液性状允许情况下，应尽量选用薄膜过滤法。

离心沉淀集菌法两次离心修改为次离心转分离心，不超过分钟，取全部上清液用于检查。

影响因素供试品污染菌特性适用范围⒈仅使用于微生物限度检查供试液制备。

⒉尽量避免使用，不可使用快速离心。

细菌霉菌及酵母菌计数增修订内容⒈新增计数培养基适用性检查菌种大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉增加了菌悬液制备及保存条件。

菌悬液制备后在室温下放置应在小时内使用，若保存在可以在小时内使用。

黑曲霉孢子悬液可保存在，在验证过贮存期内使用，每株试验菌平行制备个平皿，混匀，凝固，按规定条件培养计数，同时用相应对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

增加了对照培养。

新增常见干扰物中和剂和灭活方法参见表常见干扰物中和剂或灭活方法供试品检查增修订内容平皿法删去采用平皿法进行菌数测定时，连续个稀释级供试液。

修改为按计数方法验证试验确认程序进行供试液制备。

培养时间修改内容除另有规定外，细菌培养小时改为天，霉菌酵母菌培养小时改为天，必要时，可适当延长培养时间至天进行菌落计数并报告。

菌数报告规则增修订内容⒈若同稀释级两个平板菌落平均数不小于，则两个平板菌落数不能相差倍或以上。

⒉细菌酵母菌和霉菌平均菌落数在之间稀释级修改为选取菌落数小于和稀释级作为菌数报告依据。

薄膜过滤法增修订内容新增内容采用其它直径滤膜，冲洗量应相应进行调整如使用膜直径增大冲洗液量也应相应增加，可保证冲洗液覆盖整个滤膜。

删去每片滤膜总过滤量不宜过大，修改为总冲洗量不得超过。

控制菌检查增修订增加控制菌检查用培养基适用性检查检查项目包括促生长抑制及指示能力检查参照表新增培养基适用性检查方法液体培养基促生长能力检查。

固体培养基促生长能力检查。

培养基抑制能力检查。

液体培养基指示能力检查。

固体培养基指示能力检查。

试验结果与对照培养基比较控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用培养基促生长抑制及指示能力检查控制菌检查培养基特性试验菌株大肠埃希菌胆盐乳糖促生长能力大肠埃希菌抑制能力金黄色葡萄球菌促生长能力指示能力大肠埃希菌曙红亚甲蓝或麦康凯促生长能力指示能力大肠埃希菌大肠菌群乳糖胆盐促生长能力大肠埃希菌抑制能力金黄色葡萄球菌乳糖发酵促生长能力指示能力大肠埃希菌曙红亚甲蓝或麦康凯促生长能力指示能力大肠埃希菌沙门菌营养肉汤促生长能力乙型付伤寒沙门菌四硫磺酸钠亮绿促生长能力乙型付伤寒沙门菌抑制能力金黄色葡萄球菌胆盐硫乳琼脂或沙门志贺氏属琼脂培养基促生长能力指示能力乙型付伤寒沙门菌曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂培养基促生长能力指示能力乙型付伤寒沙门菌三糖铁琼脂培养基指示能力乙型付伤寒沙门菌铜绿假单胆盐乳糖促生长能力铜绿假单胞菌胞菌抑制能力金黄色葡萄球菌溴化十六烷基三促生长能力铜绿假单胞菌甲铵琼脂抑制能力大肠埃希菌绿脓菌素测定用培养基促生长能力指示能力铜绿假单胞菌金黄色葡亚碲酸盐肉汤促生长能力金黄色葡萄球菌萄球菌抑制能力大肠埃希菌卵黄氯化钠琼脂促生长能力指示能力金黄色葡萄球菌或甘露醇盐琼脂抑制能力大肠埃希菌梭菌梭菌增菌培养基促生长能力生孢梭菌哥伦比亚琼脂促生长能力生孢梭菌白色念沙氏葡萄糖肉汤促生长能力白色念珠菌珠菌沙氏葡萄糖琼脂促生长能力指示能力白色念珠菌念珠菌显色培养基促生长能力指示能力白色念珠菌吐温玉米琼脂促生长能力指示能力白色念珠菌控制菌检查法增修订内容疑似致病菌确证微生物控制菌检查中没有规定进步确证疑似致病菌方法。

选择已被认可菌种鉴定方法。

如伯杰氏细菌鉴定手。

控制菌检查方法验证删去阴性菌对照组。

大肠菌群检查用胆盐乳糖培养基改为乳糖胆盐。

改梭菌检查用庖肉培养基为梭菌增菌培养基。

改梭菌培养时间小时为小时。

增加了白色念珠菌检验方法增菌培养沙氏葡萄糖肉汤培养基。

分离培养划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。

鉴定试验典型菌落⒈沙氏葡萄糖琼脂培养基菌落呈乳白色偶见淡黄色，表面光滑有浓酵母气味，时间稍久则菌落增大，颜色变深质地变硬或有皱摺。

⒉念珠菌显色培养基菌落呈绿色或翠绿色菌落生长。

⒋确认试验取吐温玉米琼脂培养基培养物进行染色，镜检及芽管试验。

结果判断非革兰阳性菌，显微镜下未见厚膜孢子假菌丝芽管判未检出白色念珠菌。

新增微生物限度检查法指导原则抑菌剂效力检查法指导原则二药品微生物检验替代方法验证指导原则三微生物限度检查法应用指导原则四药品微生物实验室规范指导原则抑菌剂效力检查法指导原则⒈指导原则目是为测定灭菌非灭菌制剂中抑菌剂活性，以评价最终产品抑菌效力及生产企业在制剂研发阶段抑菌剂确定提供指导。

为防止药品由于微生物污染而引起变质，对服用者造成不良反应，在药品生产过程中加入定剂量抑菌剂。

抑菌剂不能用于替代药品生产确证没有规定进步确证疑似致病菌方法。

仅规定若供试品检出疑似致病菌，确证方法应选择已被认可菌种鉴定方法。

⒍微生物限度标准该指导原则对标准执行中存在问题进行了分析和指导明确了微生物限度标准使用范围标准执行必检项目原则性要求丸剂口服片剂胶囊剂颗粒剂，应对其被微生物污染风险进行评估。

用于手术烧伤及严重创伤局部给药制剂应符合无菌检查法要求。

用于创伤程度难以判断局部给药制剂，若没有证据证明药品不存在安全性风险则应符合无菌检查法要求。

眼用制剂应符合无菌检查法要求。

含动物类原药材粉口服中药制剂要求不得检出沙门菌。

其中动物类原药材粉是指除蜂蜜王浆动物角阿胶外所有动物类原药材粉，如牡蛎珍珠等贝类，海蜇冬虫夏草人工牛黄等。

制定合理安全和严格微生物限度标准四药品微生物实验室规范指导原则⒈目该指导原则用于指导药品微生物检验实验室质量控制。

⒉药品微生物检验对象具特殊性活生物分布不均匀重现性差必须使用经验证检测方法并严格按照药品微生物实验室规范要求进行试验。

⒊药品微生物实验室规范包括以下几个方面人员培养基菌种实验室布局和运行设备文件实验记录结果判断等。

人员从事药品微生物试验工作人员应具备微生物学或相近专业知识教育背景检验人员和管理人员培训进行岗前培训检验人员技能培训熟悉相关检测方法程序检测目和结果评价。

管理人员其专业技能和经验水平应与他们职责范围相符。

不断接受系统教育与职责范围相关培训。

客观评估检验人员能力，必要时对其进行再培训并重新评估。

⒉培养基培养基是微生物试验基础，直接影响微生物试验结果。

适宜培养基制备方法贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基保证。

该指导原则对培养基制备储存灭菌及质量控制进行了指导。

⒊菌种实验室菌种处理和保藏程序应标准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性改变。

按统操作程序制备菌株是微生物试验结果致性重要保证。

该指导原则对菌种来源菌种保藏菌种传代和使用菌种管理进行了详细说明和指导。

菌种保藏原则标准储备菌株可用于制备每月或每周次转种工作菌株冷冻菌株旦解冻转种制备工作菌株后，不得重新冷冻或再次使用。

工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株商业衍生物仅可用作工作菌株。

菌种传代和使用工作菌种传代次数应严格控制，不得超过代防止过度传代造成菌种变异，工作菌株不可代替标准菌株任何亚培养形式均被认为是转种或传代次。

实验室应对工作菌株特性和纯度进行确认。

⒋菌种管理严格程序化管理实验室必须建立菌种保存和使用文件程序管理制度⒌实验室布局和运行实验室布局设计基本原则具有检测所需适宜充分设施条件。

合理布局与设计，具有实验室辅助区域各区域应有明确标识。

建立控制程序和标准操作规程。

⒍建立合理控制程序和标准操作规范对进出洁净区域人和物建立控制程序和标准操作规程。

消毒剂配制应按标准操作规程配制，对所用消毒剂种类应定期更换，使用消毒剂应无菌。

建立检样品传递储存处置和识别管理程序。

建立带菌培养物溢出意外事件制定处理规程。

建立合理取样控制程序和标准操作规范。

⒎设备实验室应配备与检验能力和工作量相适应仪器设备，其类型测量范围和准确度等级应满足检验所采用标准要求，设备安装和布局应便于操作，易于维护清洁和校准。

使用消毒剂应无菌。

建立相应操作和维护和保养标准操作规程。

⒏文件文件应当充分表明试验是在实验室里按可控检查法进行，般包括以下方面质量管理文件程序文件技术操作文件。

⒐实验记录保存实验结果可靠性依赖于试验严格按照标准操作规程进行，包括正确试验操作实验记录所有关键实验细节，以便确认数据完整性。

⒑结果判断由于微生物试验特殊性，在实验结果分析时，应从各个可能方面去考虑，不但要假设被污染，而且要考虑微生物在原料辅料或试验环境中存活可能性。

此外，还应考虑微生物生长特性。

对实验结果应进行充分和全面评价。

实验结果不符合药典各论要求或另外建立质量标准，应进行原因调查。

异常结果分析时，应充分考虑实验室环境抽样区防护条件样品在该检验条件下以往检验情况，样品本身具有使微生物存活或繁殖特性等情况。

如果依据分析调查结果发现试验有错误而判实验结果无效，那么这种情况必须记录。

实验室也必须认可复试程序，如果需要，可按相关规定重新抽样，但抽样方法不能影响不符合规定结果分析调查。

年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容起草的指导思想以科学发展观为统领，服务于资源节约型社会环境友好型社会的要求落实科学监管理念，着力解决发展中的问题。

二与时俱进，广泛吸纳先进技术与成果坚持自主与创新积极推进药品标准化战略，提高我国药品标准总体水平，着力提升中国药典在国际社会中的地位和作用，提高综合竞争力，促进医药产业的健康发展，为构建社会主义和谐社会作出贡献。

注明其中用于阳性对照。

供试液制备增修订内容供试品检查时使用表面活性剂应证明其对微生物生长和存活无影响修改为无毒性。

供试液制备若需加温时，可采用其他经验证方法，但应均匀加热，且温度不应超过。

新增贴剂供试液制备供试液制备经验证方法制备成供试液在无菌环境进行。

避免粘贴面粘合在起。

置于含有表面活性剂如聚山梨酯或卵磷脂稀释剂中，制成供试液。

充分振摇。

也可采用以其他适宜方法制备成供试液。

具抑菌活性供试品增修订内容删除应消除供试液抑菌活性修改为当供试品具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便快速方法，应避免损伤供试品中污染微生物。

在供试品溶液性状允许情况下，应尽量选用薄膜过滤法。

离心沉淀集菌法两次离心修改为次离心转分离心，不超过分钟，取全部上清液用于检查。

影响因素供试品污染菌特性适用范围⒈仅使用于微生物限度检查供试液制备。

⒉尽量避免使用，不可使用快速离心。

细菌霉菌年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容起草指导思想以科学发展观为