个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离技性能不受影响。柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度填料般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液色谱柱内，经冲洗后，即可备用。柱体为直型不锈钢管，发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。高效分离柱作用用来连续监测经色谱柱分离后流出物组成和含量变化装置。在液相色谱中，有两种基本类型检测器。类是溶质性检测器，它仅对被分离组分物理或化学特性有响应，属于这类检测器有紫外荧光电化学检测器等。检测系统另类是总体检测器，它对试样和洗脱液总物理或化学性质有响应，属于这类检测器有示差折光，电导检测器等。现将常用检测器介绍如下目前最常用检测器主要有紫外可见检测器荧光检测器电化学检测器蒸发光散射检测器质谱检测器紫外可见检测器检测室光源光栅二极管阵列检测器紫外光度检测器最小检测量，对流量和温度波动不敏感，可用于梯度洗脱。荧光检测器许多有机化合物，特别是芳香族化合物被定强度和波长紫外光照射后，发射出较激发光波长要长荧光。特点有非常高灵敏度和良好选择性，灵敏度要比紫外检测法高个数量级，特别适合于药物和生物化学样品分析。荧光检测器结构示意图光源检测器滤光片检测室蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器适合于无紫外吸收无电活性和不发荧光样品检测。电化学检测器以电导检测器为例电导仪电极电极问题电导检测器怎样消除流动相电导干扰例如，采用阳离子交换色谱分离碱金属离子时，通常用作为流动相。示差折光率检测器几乎所有物质都有各自不同折射率，因此差示折光检测器是种通用型检测器。灵敏度可达。主要缺点是对温度变化敏感，并且不能用于梯度淋洗。附属系统它包括脱气梯度淋洗恒温自动进样馏分收集以及数据处理等装置。其中梯度淋洗装置是高压液相色谱仪中尤为重要附属装置。梯度洗脱装置梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性溶剂按定程序连续改变它们之间比例，从而使流动相强度极性值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间目。梯度洗脱装置分为两类类是外梯度装置又称低压梯度，流动相在常温常压下混合，用高压泵压至柱系统，仅需台泵即可。另类是内梯度装置又称高压梯度，将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设置程序，注入梯度混合室混合，再输至柱系统。梯度洗脱实质是通过不断地变化流动相强度，来调整混合样品中各组分值，使所有谱带都以最佳平均值通过色谱柱。它在液相色谱中所起作用相当于气相色谱中程序升温。所不同是，在梯度洗脱中溶质值变化是通过溶质极性值和离子强度来实现，而不是借改变温度温度程序来达到。在线脱气装置在线脱气装置用于脱去流动相中溶解气体，流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。除在线脱气装置外，目前也采用超声脱气真空脱气等方式。脱气不好时有气泡，导致流动相流速不稳定，造成基线飘移，噪音增加。在高效液相色谱中,速率方程中分子扩散项较小，可以忽略不计，而只有两项，即故液相色谱曲线与气相色谱形状不同，如图所示影响分离主要因素有流动相流量性质和极性。三影响分离因素流速流速大于时,曲线是段斜率不大直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是个调整分离度和出峰时间重要可选择参数。影响分离因素固定相及分离柱气相色谱中固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱样。但在高效液相色谱中，分离柱制备是项技术要求非常高工作，般很少自行制备。高效液相色谱固定相和流动相固定相高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅为基质，可承受高压，可制成直径形状孔隙度不同颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团，就是键合固定相，可扩大应用范围，它是目前最广泛使用种固定相。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为。固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。表面多孔型固定相它基体是实心玻璃珠，在玻璃球外面覆盖层多孔活性材料，如硅胶氧化铝离子交换剂分子筛聚酸胺等。表面活性材料为氧化铝固定相，这类固定相多孔层厚度小孔浅，相对死体积小，出峰迅速柱效亦高颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达平衡，较适合做常规分析。由于多孔层厚度薄，最大允许量受限制。全多孔型固定相它由直径为硅胶微粒凝聚而成。也可由氧化铝微粒凝聚成全多孔型固定相，这类固定相由于颗粒很细，孔仍然较浅，传质速率快，易实现高效高速。特别适合复杂混合物分离及痕量分析。流动相及流动相极性可显著改变组分分离状况流动相选择在液相色谱中显得特别重要。液相色谱流动相又称为淋洗液，洗脱剂。亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相极性小于固定相极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。若流动相极性大于固定液极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上出峰顺序相反。流动相组成流动相按组成不同可分为单组分和多组分按极性可分为极性弱极性非极性按使用方式有固定组成淋洗和梯度淋洗。常用溶剂烷四氯化碳甲苯乙酸乙酯乙醇乙腈水。采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。二流动相由于高效液相色谱中流动相是液体，。根据分子结构选择样品溶于水离子与非离子反相离子对色谱相对分子质量相对分子质量溶于水排阻色谱，水为流动相不溶于水排阻色谱，非水流动相不溶于水溶于水不离解溶于水可离解同系物分配色谱异构体吸附色谱分子大小差异排阻色谱反相液液色谱排阻色谱，水为流动相碱阳离子交换色谱酸阴离子交换色谱液相色谱分离类型选择参考表思考题现需分离分析氨基酸试样，拟采用哪种色谱提高液相色谱中柱效最有效途径是什么何谓反相液相色谱何谓正相液相色谱在液相色谱法中，梯度淋洗适用于分离何种试样在液相色谱中，范氏方程中哪项对柱效能影响可以忽略不计对下列试样，用液相色谱分析，应采用何种检测器长链饱和烷烃混合物水源中多环芳烃化合物。对聚苯乙烯相对分子质量进行分级分析，应采用哪种液相色谱法什么是化学键合固定相它突出优点是什么什么叫梯度洗脱它与气相色谱中程序升温有何异同指出下列各种色谱法，最适宜分离物质。气液色谱正相色谱反相色谱离子交换色谱凝胶色谱气固色谱液固色谱。•两组分在同固定相上分离可能性与哪个因素无关•检测器灵敏度高低•选择性大小•分配次数多少•分配系数之差大小•涉及色谱过程热力学和动力学两方面因素是•保留值•分离度•相对保留值•峰面积•在柱温定时，要使相对保留值增加，可以采取•更细载体•最佳线速•高选择性固定相•增加柱长•在液相色谱中,空间排阻色谱分离机理是根据被测组分在多孔凝胶中对孔•渗透或被孔排斥不同而分离•离子交换或亲合能力不同而分离•吸附或被孔解吸不同而分离•毛细管扩散或被孔溶解不同而分离•在其它色谱条件不变时，若使理论塔板数增加倍，对两个十分接近峰分离度是•增加倍•增加倍•增加倍•增加倍•应用新热导池检测器后，发现噪音水平是老检测器半，而灵敏度加倍，与老检测器相比，应用新检测器后使有机物检测限是•减少为原来•减少为原来•基本不变•增加原来•在气液色谱法中,首先流出色谱柱组分是•吸附能力小•吸附能力大•溶解能力大•溶解能力小•欲使分配比减小,采用方法是减小流动相速度增加固定相量增加柱温增加柱长•当载气线速较小,范氏方程中分子扩散项起控制作用时,采用下列哪种气体作载气对提高柱效有利•氢气•氮气•氧气•氦气•欲使流速分布比较均匀,柱效也较高,应控制柱前压力与出口压力比值为•••••在环境保护中,常常要监测水源中多环芳烃,宜采用下述哪种检测器•电子捕获检测器•示差折光检测器•荧光检测器•电化学检测器•在气固色谱分析中,色谱柱内装入固定相为•般固体物质•载体•载体固定液•固体吸附剂•分配比是指在定温度压力下,组分在气液两相间达到分配平衡时,•分配在液相中质量与分配在气相中质量之比•组分在液相中与组分在流动相中浓度比•气相所占据体积与液相所占据体积比•组分在气相中停留时间与组分在液相中停留时间之比•分离有机胺时，最好选用色谱柱为•非极性固定液柱•低沸点固定液柱•空间排阻色谱柱•氢键型固定液柱•分析甜菜萃取液中痕量含氯农药宜采用•热导池检测器•氢火焰离子化检测器•电子捕获检测器•火焰离子化检测器•标准偏差与峰底宽度之间关系式为•••••在液相色谱中,范氏方程中哪项对柱效能影响可以忽略不计•涡流扩散项•分子扩散项•固定相传质阻力项•流动相中传质阻力•在气相色谱分析中,相邻两组分分离度与下列哪些参数无关•塔板高度•塔板数•固定相量•检测器灵敏度•当进样量定时,测得检测器峰高在定范围内与载气流速呈正比,而峰面积与流速无关,这种检测器是•质量型检测器•浓度型检测器•热导池检测器•电子捕获检测器•高效液相色谱仪安培检测器是根据•经分离后组分在电解池电极表面所产生氧化还原反应所产生电流与待测组•分浓度成比例关系。•原理检测色•谱柱后流出组分。•色谱法按分离原理分类,可分为和。吸附色谱分配色谱排阻色谱离子交换色谱径较大，可达以上。分离系统色谱柱般在分离前备有个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离技性能不受影响。柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度填料般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液色谱柱内，经冲洗后，即可备用。柱体为直型不锈钢管，发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。高效分离柱作用用来连续监测经色谱柱分离后流出物组成和含量变化装置。在液相色谱中，有两种基本类型检测器。类是溶质性检测器，它仅对被分离组分物理或化学特性有响应，属于这类检测器有紫外荧光电化学检测器等。检测系统另类是总体检测器，它对试样和洗脱液总物理或化学性质有响应，属于这类检测器有示差折光，电导检测器等。现将常用检测器介绍如下目前最常用检测器第十六章高效液相色谱法高效液相色谱法特点二流程及主要部件三影响分离因素四高效液相色谱法主要分离类型概述高效液相色谱法是世纪年代末年代初发展起来种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛化学分离分析重要手段。液相色谱分离原理及分类和气相色谱样，液相色谱分离系统也由两相固定相和流动相组成。液相色谱固定相可以是吸附剂化学键合固定相或在惰性载体表面涂上层液膜离子交换树脂或多孔性凝胶流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中吸附能力分配系数离子交换作用或分子尺寸大小差异进行分离。色谱分离实质是样品分子以下称溶质与溶剂即流动相或洗脱液以及固定相分子间作用，作用力大小，决定色谱过程保留行为。根据分离机制不同，液相色谱可分为液固吸附色谱液液分