1、析表本实验所用化学试剂化学式英文名称中文名称三羟甲基氨基甲烷尿素甲叉双丙烯酰胺丙烯酰胺甘氨酸十二烷基磺酸钠过硫酸铵四甲基乙二胺溴酚蓝考马斯亮蓝冰乙酸甲醇无水乙醇巯基乙醇乙二胺四乙酸苯甲基硫酸氟盐酸氢氧化钠蛋白质氯化钠正己烷亚硫酸氢钠加入的全蛋白提取缓冲液见表至离心管中。将加有大豆粉末与全蛋白提取液的离心管在旋涡混合仪上振荡，使其混合均匀，然后放入高低温恒温培养箱的摇床上，调节转速为，在的条件下振荡以提取大豆种子全蛋白。离心，温度转速时间。将所得上清液吸取稀释倍，所得全蛋白样品用于。万方数据第二章大豆伴大豆球蛋白突变性状的表征鉴定大豆伴大豆球蛋白的提取参照司晓霞优化的方法，提取大豆伴大豆球蛋白。大豆种子洗净干燥去皮后，用钳子夹碎至粉末状，。

2、主要从种质资源中筛选或人工诱变获得伴大豆球蛋白突变体，有望为关于大豆蛋白质营养品质的遗传育种研究提球蛋白的免疫原性较强，易导致人和动物体的过敏反应该类蛋白的含硫氨基酸含量较低，限制人体对大豆蛋白中其中，伴大豆球蛋白主要由的的和的亚基组成。伴大豆万方数据中文摘要大豆种子蛋白质含量高达以上，含有人和动物体无法合成的种必需氨基酸，是人类重要的氨基酸源。大豆种子储藏蛋白主要包括大豆球蛋白和的伴大豆球蛋白。其中，伴大豆球蛋白主要由的的和的亚基组成。伴大豆球蛋白的免疫原性较强，易导致人和动物体的过敏反应该类蛋白的含硫氨基酸含量较低，限制人体对大豆蛋白中其他氨基酸的吸收，所以伴大豆球蛋白对大豆蛋白的营养品质有着重要影响。目前，国内外相关研究主要从种质。

3、循环水式多用真空泵Ⅲ型郑州长城科工贸电热恒温鼓风干燥箱型上海恒多用脱色摇床江苏兴化市分析仪器厂数控超声波清洗器昆山市超声仪器高低温恒温振荡培养箱上海恒科学仪器实验试剂本研究中大豆蛋白质的提取分离电泳所需试剂详见表。实验方法大豆的自交采用连续自交的方法对大豆进行田间繁育，收获代种子与代种子。田间实验在山西省农科院品种资源研究所的基地中进行。由于大豆属于自花闭花授粉植物，所以自交实验部分无需操作，仅需要进行常规的田间管理，除草浇水以确保大豆正常生长。大豆种子全蛋白的提取参照等报道的方法，提取大豆种子全蛋白。将实验所用的每粒大豆种子洗净干燥去皮，用钳子夹碎，然后称取粉末放入已编号的的离心管中。万方数据大豆伴大豆球蛋白突变性状的表征鉴定与遗传分。

4、连续自交与杂交的方法，对所发掘代表性种质材料的伴大豆球蛋白性状，进行了遗传稳定性与遗传式样解析。性种质材料。在本研究中，我们采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳技术以及分析这些突变体与秋大豆间正反交组合的与种子的伴大豆球蛋白性状，发现亚基缺失起因于供有用素材。大豆种子储藏蛋白主要包括大豆球蛋白和的伴大豆球蛋白。其中，伴大豆球蛋白主要由的的和的亚基组成。伴大豆球蛋白的免疫原性较强，易导致人和动物体的过敏反应该类蛋白的含硫氨基酸含量较低，限制人体对大豆蛋白中其他氨基酸的吸收，所以伴大豆球蛋白对大豆蛋白的营养品质有着重要影响。目前，国内外相关研究主要从种质资源中筛选或人工诱变获得伴大豆球蛋白突变体，有望为关于大豆蛋白质营养目前，国内外相关研究。

5、作为实验材料用于伴大豆球蛋白突变性状的遗传稳定性的鉴定及表征分析。表大豆种质种子伴大豆球蛋白特异性状的代表材料名称种子性状蛋白性状秋大豆对照种皮偏绿，圆形稍小，子叶为黄色贼不偷种皮深褐斑纹，椭圆形，子叶为黄色亚基缺失黄豆种皮褐色斑纹，椭圆形，子叶为黄色分子量较高实验仪器在本研究中进行大豆蛋白质的提取分离保存电泳凝胶成像所需的各种仪器，详见表。万方数据第二章大豆伴大豆球蛋白突变性状的表征鉴定表本试验所用仪器仪器名称型号仪器制造商赛多利斯电子天平系列北京赛多利斯仪器有限公司高端超纯水系统台湾艾柯纯水机公司高速冷冻离心机上海安亭多功能振荡器江苏科健医疗用品漩涡混合器上海精科实业电泳仪北京六双向磁力加热搅拌器常州国华电器数显仪恒温循环水器北京六。

6、称取粉末放入的离心管中。往离心管的粉末中加入的正己烷，室温下震荡脱脂。然后再的条件下离心，弃去上清后在相同条件下将沉淀重复脱脂次，以确保充分脱脂，用超纯水把脱脂后的大豆粉末清洗干净。在脱脂后粉末中加入按照∶的比例，在下振荡，在的条件下离心，吸出上清液收集然后把所得沉淀再次用溶液溶解，相同条件下重复提取次。弃去沉淀，收集两次提取所得的上清液，混匀，加入至，用的调为，放置在的冰箱中冷藏室中静置过夜。在的条件下离心，在上清液中加入的至，混合均匀，调节为，在室温下振荡。然后在的条件下离心后吸取上清液，加等量超纯水混合均匀，溶液会稍微浑浊，在室温条件下静置。在的条件下离心，吸取上清液调节为，然后于冰浴中静置，当看到有沉淀析出后在的条件下离心，弃去。

7、资源中筛选或人工诱变获得伴大豆球蛋白突变体，有望为关于大豆蛋白质营养品质的遗传育种研究提供有用素材。本实验室前期研究中，通过筛选大豆种质资源，发掘出具有多样伴大豆球蛋白性状的代表性种质材料。在本研究中，我们采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳技术以及连续自交与杂交的方法，对所发掘代表性种质材料的伴大豆球蛋白性状，进行了遗传稳定性与遗传式样解析。通过与具有野生型伴大豆球蛋白性状的大豆品种秋大豆相比，确定两种原名为“贼不偷”与“黄豆”的种质材料分别具有亚基缺失分子量较高的可遗传突变性状，作为突变体被命名为分析这些突变体与秋大豆间正反交组合的与种子的伴大豆球蛋白性状，发现亚基缺失起因于个单基因的隐性突变，而高分子量突变性状较由个显性突变基因所。

8、条件下静置大约，使凝胶完全凝固即可点样或放入冰箱冷藏等待点样。点样在电泳梳边沿滴加电泳缓冲液表浸润，以减少摩擦力，然后小心地垂直向上拔出电泳梳，拔的过程中要加电泳缓冲液以防止浓缩胶被拉断，确保点样孔完整。最后用微量移液枪吸取定量提取好的大豆蛋白质样品，按顺序加入点样孔中。表电泳所用储液溶液名称溶液组成分离胶储液，分离胶缓冲液，浓缩胶储液，浓缩胶缓冲液，电泳缓冲液染色液脱色液，万方数据届硕士学位论文大豆伴大豆球蛋白突变性状的表征鉴定与遗传分析作者姓名卫会君指导教师田怀东副教授学科专业植物学研究方向大豆蛋白质遗传资源研究培养单位生命科学学院学习年限年月至年月二〇四年六月万方数据山西大学届硕士学位论文大豆伴大豆球蛋白突变性状的表征鉴定与遗传分。

9、调控。这些突变体是可用于该类蛋白合成蓄积遗传调控机制的阐明及大豆蛋白质营养品质育种研究的珍贵遗传资源。关键词大豆伴大豆球蛋白突变性状遗传调控万方数据,资源基础。在本实验室的前期研究中，通过筛选份来源于国内外的大豆种质材料，发掘出几种具有伴大豆球蛋白突变表型的种质材料。本章中，为了获得能够稳定遗传的伴大豆球蛋白组分突变性状的系列遗传资源，采用连续自交的方法及技术对代表性大豆种质贼不偷黄豆的伴大豆球蛋白性状的遗传稳定性进行鉴定，对具有突变性状伴大豆球蛋白的蛋白表型进行了表征。材料仪器与试剂种质材料选择前期研究所筛选发掘出的种伴大豆球蛋白表型，这些表型分别为野生型亚基缺失型分子量较高型，选用如下的特异性状代表材料种子表及连续自交两代得到的种子。

10、以增加空气湿度，防止凝胶干燥。从冰箱取出静置后的制胶盒，将已脱气的分离胶溶液置于磁力搅拌器上，边搅拌边同时加入现用现配和，后把分离胶溶液缓慢连续的注入制胶玻璃板内注意整个灌胶中切入灌入气泡，直到液面距玻璃边缘约处停止灌胶。灌完分离胶后再用保鲜膜包裹好，在室温下静置，然后在冰箱冷藏室中静置。从冰箱取出制胶盒后，用滴管小心地在分离胶上部覆盖层冷却的超纯水便于分离浓缩胶与分离胶，注意切勿冲击胶面，几分钟后将水倒去并用滤纸将残留的水分轻轻吸干。另取个烧杯配制浓缩胶溶液，配制好的浓缩胶不需要抽气，直接放在磁力搅拌仪上，搅拌的同时加入和，然后用滴管迅速将其加在分离胶的上部，随即插入干净的电泳梳子，梳齿下端与分离胶上边缘间距约为。将灌好的制胶盒在室温。

11、析作者姓名卫会君指导教师田怀东副教授学科专业植物学研究方向大豆蛋白质遗传资源研究培养单位生命科学学院学习年限年月至年月二〇四年六月万方数据承诺书承诺书本人郑重声明所呈交的学位论文，是在导师指导下独立完成的，学位论文的知识产权属于山西大学。如果今后以其他单位名义发表与在读期间学位论文相关的内容，将承担法律责任。除文中已经注明引用的文献资料外，本学位论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写过的成果。作者签名年月日万方数据学位论文使用授权声明学位论文使用授权声明本人完全了解山西大学有关保留使用学位论文的规定，即学校有权保留并向国家有关机关或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印缩印或扫描等手段保存汇编学位论文。同。

12、上清液，把所得沉淀用超纯水清洗后，再用全蛋白提取液溶解，作为伴大豆球蛋白的样品用于。表全蛋白和球蛋白提取缓冲液全蛋白提取液球蛋白提取液配制凝胶所用配制溶液见表，分离胶溶液和浓缩胶溶液的配制用量万方数据大豆伴大豆球蛋白突变性状的表征鉴定与遗传分析参见表先加分离胶缓冲液分离胶储液冰箱预冷的超纯水。按照改进的不连续缓冲液系统方法，配制的聚丙烯酰胺凝胶。将配好的分离胶溶液用真空泵抽气后放入冰箱冷藏室静置抽气过程中每隔分钟用转子快速搅动溶液促进抽气的进行。抽气同时装凝胶盒，将制胶玻璃板放入制胶盒中，装好密封条后用夹子夹紧制胶盒，向盒中加入无水乙醇浸润清洗次，静置确定其不渗漏后，倒出无水乙醇，用保鲜膜包裹好制胶盒，放入冰箱冷藏室中静置。打开加湿器，。

参考资料：

[1]农业推广沟通PPT 编号34（第40页，发表于2022-06-25）

[2]农业推广沟通PPT 编号43（第40页，发表于2022-06-25）

[3]农业推广沟通PPT 编号45（第40页，发表于2022-06-25）

[4]农业推广沟通PPT 编号41（第40页，发表于2022-06-25）

[5]农业推广沟通PPT 编号49（第40页，发表于2022-06-25）

[6]农业推广沟通PPT 编号43（第40页，发表于2022-06-25）

[7]农业推广沟通PPT 编号45（第40页，发表于2022-06-25）

[8]农业推广沟通PPT 编号30（第40页，发表于2022-06-25）

[9]农业推广沟通PPT 编号41（第40页，发表于2022-06-25）

[10]农业推广沟通PPT 编号37（第40页，发表于2022-06-25）

[11]皮肤与汗液分泌 编号30（第14页，发表于2022-06-25）

[12]皮肤与汗液分泌 编号37（第14页，发表于2022-06-25）

[13]皮肤与汗液分泌 编号42（第14页，发表于2022-06-25）

[14]皮肤与汗液分泌 编号36（第14页，发表于2022-06-25）

[15]皮肤与汗液分泌 编号38（第14页，发表于2022-06-25）

[16]皮肤与汗液分泌 编号26（第14页，发表于2022-06-25）

[17]皮肤与汗液分泌 编号39（第14页，发表于2022-06-25）

[18]皮肤与汗液分泌 编号45（第14页，发表于2022-06-25）

[19]皮肤与汗液分泌 编号29（第14页，发表于2022-06-25）

[20]皮肤与汗液分泌 编号40（第14页，发表于2022-06-25）