【26页】【毕业设计】工业中应用双酶法制取葡萄糖生产工艺及生产应用.doc文档优秀范文

平均分装到三只烧杯中，用溶液以及溶液调整至左右，加入溶液，混匀。

液化最优条件的正交实验按步骤继续配制淀粉浆液瓶。

将烧杯臵于的水浴锅中，持续搅拌至淀粉浆液粘稠成糊状。

立即加入淀粉酶，搅拌均匀。

分别臵于的水浴锅中，温度恒定不同的时间，期间持续搅拌。

时间到后移入水浴分钟，以充分使酶灭活。

冷却后测定其值本实验采取的测定为费林滴定参考自淀粉水解产品还原力和葡萄糖当量测定，这里便不再赘述，以落在内为佳。

具体的实验条件控制如下表液化最优条件正交实验表列号试验号温度液化时间酶用量淀粉糖化研究出最佳液化条件之后，在最佳液化条件重新进行液化。

灭活后料液冷却，调整为，每个烧杯加入糖化酶。

搅拌混匀之后分别臵于的水浴摇床中，震荡反应，取出，测定其值，以值接近为好。

净化糖化液冷却后用四层纱布过滤。

粗略地除去絮凝物后，加入事先干燥好的活性炭分两次添加，第次稍多，。

臵于的水浴摇床中震荡后取出，先用四层纱布过滤，后用布氏漏斗抽滤。

得到无色澄清透明糖液。

浓缩将糖液臵于间歇沸腾的水浴锅蒸发浓缩，至干物质含量达，取出。

冷却至。

在的水浴锅中保温后，降至继续保温。

再降至保温，最后降至保温，取出。

结晶干燥将含晶体的溶液用布氏漏斗抽滤，得到固体。

将固体臵于烘箱中，得到干燥的晶体，即为葡萄糖。

淀粉酶活力的测定配制实验试剂如下标准葡萄糖溶液准确称取葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至，二硝基水杨酸试剂精确称取，二硝基水杨酸，溶于的溶液中，加入蒸馏水，再加入酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至。

盖紧瓶塞，勿使进入。

若溶液浑浊可过滤后使用。

的柠檬酸钠缓冲液液柠檬酸称取，用蒸馏水溶解并定容至液柠檬酸钠称取，用蒸馏水溶解并定容至取液与液混匀，即为的柠檬酸钠缓冲液④淀粉溶液称取淀粉溶于的柠檬酸钠缓冲液中实验步骤如下葡萄糖标准曲线的制作取只干净的试管，编号，按表二加入试剂，做两份平行。

表葡萄糖标准曲线的制作摇匀，臵沸水浴中煮沸。

取出后冷却接近室温，加蒸馏水，即总体积。

以号管作为空白调零点，在波长下比色测定光密度。

以葡萄糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。

酶活力的测定取干净的试管，编号，按表三进行操作。

表酶活力测定取样表试剂管号葡萄糖标准液蒸馏水，二硝基水杨酸将各试管摇匀，显色后进行比色测定光密度，记录测定结果。

糖化酶活力的测定实验采取的方法是次碘酸钠法，即在，温度的情况下每小时催化可溶性淀粉水解生成葡萄糖的酶量为个酶活力单位。

配制实验试剂如下可溶性淀粉称取绝干可溶性淀粉，以少许蒸馏水调匀，倾入左右的沸水中，继续煮沸至透明状。

冷却至室温后，加蒸馏水定容至，醋酸缓冲液用的醋酸溶液与的醋酸钠溶液等体积混合碘液称取碘化钾，溶于蒸馏水中，加入碘，溶解后定容至④氢氧化钠溶液称取，用水溶解后，定容至操作项目淀粉酶活力测定淀粉酶液预保温将各试管和淀粉溶液置于恒温水浴中保温，二硝基水杨酸添加淀粉溶液保温在恒温水浴中准确保温，二硝基水杨酸沸水浴定容加入蒸馏水硫酸溶液量取浓硫酸相对密度，换换倒入适量水中，定容至硫代硫酸钠溶液称取硫代硫酸钠，碳酸钠，溶于煮沸后冷却的蒸馏水中，存于棕色瓶内淀粉指示剂称取可溶性淀粉，用少许水调匀，倾入沸水中，继续煮至透明，冷却后定容至。

具体实验步骤如下吸取可溶性淀粉，加入醋酸缓冲液，混匀后于水浴中预热加入酶液空白实验以煮沸失活的酶液代替，于水浴中反应。

反应结束时，立即于沸水浴中加热使酶失活取上述反应液于碘量瓶，加入碘液及氢氧化钠，摇匀，在暗处放臵，加入硫酸溶液④以可溶性淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失为终点。

记录硫代硫酸钠消耗的毫升数以及空白滴定所消耗的硫代硫酸钠的毫升数计算酶活力。

在上述条件下每小时催化可溶性淀粉生成葡萄糖的酶量定义为个酶活力单位，即酶活力式中加酶液组平均消耗的硫代硫酸钠溶液的量空白组消耗的硫代硫酸钠溶液的量硫代硫酸钠溶液的当量浓度与硫代硫酸钠标准溶液相当的葡萄糖的质量反应液的总体积吸取反应液的体积反应，换算成的酶活力系数。

五实验数据与处理费林混合溶液的标定费林混合溶液的标定是以的葡萄糖标准液进行的，目的是件下进行的液化可以得到较好的重现，最终得到的料液值皆能落在的范围内。

表最优条件验证试验记录表糖化实验记录经过的糖化，料液由粘稠胶体逐渐变稀，最终得到含少许沉淀的淡黄色溶液。

本次实验研究了种不同温度对糖化的影响。

由于实验条件以及时间的限制，本次试验就没有涉及到糖化酶加量以及糖化时间对糖化的影响。

糖化酶的加量是在相关文献的基础上结合实验所用糖化酶的活力计算得出糖化时间是间歇测定糖化液的值直至值达到而得出的。

将糖化实验的结果记录如下表中用于滴定的样品已经过倍的稀释表糖化实验记录表对糖化结果进行数据处理，得到下表表糖化实验数据处理表滴定体积平均值值由实验结果可以看出，本次实验的糖化结果较为接近的预期干物质质量滴定体积平均体积值干物质质量滴定体积值，其中又以得到的糖化值最高。

因此可以推断实验控制的糖化时间应该在左右。

淀粉酶活力的测定以葡萄糖标准溶液绘制标准曲线，测得数据如下表葡萄糖标准曲线测定记录表以葡萄糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线如图。

图葡萄糖标准曲线对实验所用的淀粉酶进行活力测定，得到数据如下表淀粉酶活力测定数据记录表注表中数据为样品稀释倍后得到数值由以上数据，可以得出淀粉酶在实验条件下催化生成的葡萄糖的物质的量葡萄糖可推算出实验用淀粉酶的活力如下管号葡萄糖标准液试管号空白样品平均稀释两倍式中，酶活力的定义在下，转化生成葡萄糖为。

糖化酶活力的测定按照实验步骤测定糖化酶的活力，得到数据如下表糖化酶活力测定数据记录表空白滴定消耗体积由以上数据，有以下的数据处理表糖化酶活力测定数据处理表酶液酶活力固体酶酶活力葡萄糖结晶本次实验中我组采用沸水浴蒸发浓缩的方法，由于时间安排不当以及实验限制，未能将糖液干物质浓度浓缩至。

为达到浓度对比的效果，实验中将第二个烧瓶进行了较为剧烈的直接加热蒸发，最终干物质浓度达到了。

经过阶段降温结晶的处理，可以看到仅第二组的烧杯出现了较多的纯白色结晶，第组和第三组只有在底部有白色颗粒和棱形透明结晶。

实验拟在烘箱中实现葡萄糖晶体的干燥，而事实表明在密闭烘箱中升温将会使葡萄糖重新湿润发潮。

可以认为由于烘箱中较高的温度，使得部分已析出的晶体重新溶解。

对烘箱处理后的晶体称量，得到其质量为。

但由于晶体含水以及在称量中有较多的损失，引入了较多的偏差，在此便不做实验得率的计算。

六实验结果讨论费林混合溶液当天现配现用，对每次重新配制的费林溶液，应该重新对其混合液浓度进行标定。

确保实验结果的可信度。

本实验研究讨论得到的最优糖化条件的前提是在本实验设备以及流程中操作。

对于不同的实验环境与操作流程，本实验的最优条件可能不适合。

实验中采取的容器规格对实验有定的影响，广口容器可能引起料液较大程度的挥发，从而影响到实验数据的精确度。

由于实验室中糖化酶为粗制品，存在有较多的麸皮，因此本实验中糖化酶是在充分研磨之后才加入体系中的。

研磨过程中局部高温可能会对酶的活性有定的影响，因此实验中测定的糖化酶活力是研磨后的酶活。

在晶体生成环节，第组和第三组为得到大量晶体，只看到为数不多的白色颗粒和些棱形透明晶体。

通过对晶体性状的比对，白色颗粒应为结晶葡萄糖，棱形晶体则可能是种盐的结晶。

因此可以判断，实验得到的晶体仍然不够纯。

在结晶操作前应进行葡萄糖液的离子交换，从而去除糖液中的离子成分。

另外，若采取较小瓶口的容器，可以更大程度上的减少水分蒸发，使料液得到较好的保留，便于纯化与抽滤。

在晶体的烘干环节，可以看到烘箱内的晶体在升温过程中伴随着结晶水的重新析出，致使晶体潮湿，并不能达到完全烘干的效果。

考虑到直接的高温加热可能会导致晶体产生氧化反应，因此需要对该步骤实验方案进行改良，可以尝试在通风橱内低温加热装有晶体的蒸发皿烘干的方法。

七实验心得本次的综合实验是我大学以来为期最长的个实验，也是我投入精力最多的个实验。

纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行，诚然，这次的实验让我领悟到课本上学不到的许多知识。

接触课题伊始，我查阅了许多相关的文献，对实验有了比较大概的了解。

我意识到，这个实验的整体流程并不难，繁杂的步骤在于实验各项指标的测定，尤其是值的确定。

文献中提及较多的方法是费林滴定，该法需要在使用时当天混合试剂，并且要在沸腾情况下进行滴定操作。

考虑到这个操作存在定的难度，我们便试图从其他方法入手，对还原端进行测定。

组内有同学提议使用比色的方法，实验同样可以测得还原糖的含量，而且在操作上更为可行而且简便，于是我们便事先尝试了比色法的可行性。

实验的操作步骤是先用定浓度梯度的葡萄糖溶液绘制比色的标准曲线，而后用已知浓度的葡萄糖进行比色，分析数据的偏差，从而判断实验方案的精确度。

通过实验的比较，可以得出在葡萄糖溶液的比对上，比色的实验方案数据较为可信。

但是，在将这个方案应用与实验样品的时候，便遇到了困难。

在文献推荐的操作条件下，我组的比色法测得的值数值非常小，这不禁使我怀疑这种方法在处理样品时存在原理上的问题。

首先，实验处理得到的样品为偏黄色的胶体，在处理后，溶液浑浊。

根据朗伯比尔定律当束平行单色光通过均匀的非散射样品时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚度成正比。

试验样品本身不符合均匀非散射的前提，分光光度法已不适用。

其次，实验样品中有许多还原端成分并不是以还原糖的形式存在，比色分析的方法也不再适合。

在比色法的尝试