术水平 目前，人们主要以两中获得该抗菌肽的同 源基因，而不能获得新的抗菌肽基因。在本项目中，我们将前期 工作中获得的抗菌肽基因与载体连接，构建抗菌肽酵母高效表达 体系，以工程菌工业化发酵生产抗菌肽，用这种方法可获得大量 因的表达及其产物的抗菌活性进行分析，也没有开发出基于鱼类 抗菌肽基因的广谱抗菌肽制剂。本项目将开发出具有自主知识产 权的新型抗菌肽制剂。 项目完成时至少可达到国内领先水平。 项目技术方案抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测 定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验 重组表达载体的构建 将我们从淡水鱼中诱导表达的抗菌肽基因与具有高效表达启动 子的表达载体连接，构建重组表达载体。 抗 平上筛选抗菌肽高效达抗菌肽抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测 定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验 重组表达载体的构建 将我们从淡水鱼中诱导表达的抗菌肽基因与具有高效表达启动 子的表达载体连法从转录和翻译两个水 平上筛选抗菌肽高效表达酵母。 抗菌肽的大量表达。 利用筛选到的高效表达酵母菌发酵产生抗菌肽。 抗菌肽的分离纯化。 离心收集表达上清液，采用硫酸铵沉淀 项目技术来源 课题申请人在法国国家农业研究中心分子遗传学实验室工作 期间，参加了欧盟资助的有关微生物抗菌肽在解脂耶氏酵母中表达 的研究课题，掌握了抗菌肽研究的相关技术，为本课题的顺利完成 奠定了技术基础。 项目实验检测条件 申请人所在实验室为江西省生物化学与分子生物学重点实验 室，具有全自动测序仪型 型电转仪高速冷冻离心机超速冷冻离心机超低温 冰箱仪，超纯水系统各种规格的电泳仪杂交仪 紫外分光光度计设施先进的细菌培养室等仪器设备。 上述仪器设备基本上可满足本项目的研究需要。 项目申请单位人才资源情况技术人员总数中高级 技术人员比例 项目申请单位南昌大学是我省唯所省部共建的工程重 点建设大学，人才资源丰富，科研力量雄厚。生命科学学院有专任教 师人，其中正副教授人，讲师人，中高级技术人员比例。 项目组人员专业结构职称结构 项目组科研人员人，主要由生物化学与分子生物学专业微生 物学 鱼类抗菌肽基因，本项目拟通过酵母表达获得抗菌肽，并将抗菌 肽添加到饲料中，为日益严重的鱼类和畜禽病害防治开辟新的途 径。 项目所处技术领域技术发展现状 由于抗菌肽具有独特的抗菌机制，广谱的杀菌作用，高效的 抗菌活性以及靶菌株难以产生抗性等优点，因此有着广阔的开发 应用前景，是目前国际学术研究的活跃领域之。计算机检索表 明，国外的科学家作了大量的工作，对抗菌肽的研究已经取得了 许多进展。法国科学家蒂马克先生于年月创建了 公司，目的是尽可能得到不同类型的抗菌肽分子。迄今国外科学家已在不同生物中发现了多种抗菌肽，我国在抗菌肽的研究方面 起步较晚，仅有少量报道。大量结果显示不同的抗菌肽其抗菌活 性和抗菌谱存在很大的差异，因此继续寻找高效广谱的生物抗菌 肽，是广大生命科学工作者努力的方向。 项目技术先进性，对相关领域技术进步的推动作用 本项目采用的是先进的分子生物学研究技术。用基因克隆技 术将我们从鱼肝脏中分离的抗菌肽基因与具有高效表达启动子的 表达载体连接，构建重组分子。然后用醋酸锂法将重组分 子转入解脂耶氏酵母中，筛选高效表达抗菌肽的工程菌，以工程 菌工业化发酵生产抗菌肽，进而开发出高效广谱的新型抗菌剂。 该项目的实施对相关领域技术进步有定的推动作用。 项目目前进展情况。 我们已进行了前期工作，用引起人畜共患病的多种微生物诱导 鱼，继而采用差异显示技术从经微生物诱导的鱼的肝脏中分 离到了三个特异表达的分子，并使用仅有少量报道。大量结果显示不同的抗菌肽其抗菌活 性和抗菌谱存在很大的差异，因此继续寻找高效广谱的生物抗菌 肽，是广大生命科学工作者努力的方向。 项目技术先进性，对相关领域技术进步的推动作用氏酵母中，筛选高效表达抗菌肽的工程菌，以工程 菌工业化发酵生产抗菌肽，进而开发出高效广谱的新型抗菌剂。 该项目的实施对相关领域技术进步有定的推动作用。 项目目前进展情况。 我们已进行了技术克隆了它们的全长基因。 这些工作为本项目的实施奠定了基础。 二技术方案论述 项目技术关键点或创新点论述，项目完成时达到的技 专业人员组成，专业结构合 第二章背景及必要性 项目提出的背景 县处于浙西南和闽北交界处，面积平方公里，以山地居多，素有九山半水半分 田之称。这里属亚热带季风区，冬少严寒，夏无酷暑，雨量充沛，珍稀野生植物种源多， 食用菌资源极其丰富。香菇是县的支柱产业，县以其人工栽培香菇历史最早产量 最多交易市场最大而著称于世，此外还拥有万亩的竹笋两用基地，近两年来，在政府 部门的大力扶持下，竹笋产量大幅度增长。因此，带动了全县食用菌及笋竹资源的加工及经 营业的迅速发展，但是所开发的产品单调，技术含量低，没有名牌，缺乏精加工产品。如何 利用食用菌资源优势开发新产品，成为继续保持食用菌产品产销优势的关键。 项目建设的必要性 随着人们生活水平的不断提高，城乡居民的消费观念有了较大的改变。人们不再满足于吃饱 穿暖，在吃方面更注重营养和美味，而且随着工业的发展，城市的环境污染日益严重。据报 道杭州市前四位死因是恶性肿瘤呼吸系统疾病脑血管病和心脏病，即有四分之的人 死于癌症。人们的保健意识增强，治病不如防病，药补不如食补，所以绿色保健食品倍受消 费者青睐，极具开发前景。食用菌系列产品以其丰富的营养鲜美的口味和独特的防癌抗 癌作用，非常适合现代人的美食追求。 生活节奏日大而著称于世，此外还拥有万亩的竹笋两用基地，近两年来，在政府 部门的大力扶持下，竹笋产量大幅度增长。因此，带动了全县食用菌及笋竹资源的加工及经 营业的迅速发展，但是所开发的产品单调，技术含量低，没再满足于吃饱 穿暖，在吃方面更注重营养和美味，而且随着工业的发展，城市的环境污染日益严重。据报 道杭州市前四位死因是恶性肿瘤呼吸系统疾病脑血管病和心脏病，即有四分之的人 死于癌症。人们的奏日趋紧张，忙碌的人们懒于动手烧菜，特别是旅游和出差的人，尤为喜爱美味的方 便食品，应运而生的各种各样的方便食品，显得很有生命力，发展很快，但是目前为止，市 场上没有精美的食用菌系列方便食品。有原致好评，认为很有开发前途，该产品获七五星火计划成果博览会银奖具 体见附件。然而该试产成 术水平 目前，人们主要以两中获得该抗菌肽的同 源基因，而不能获得新的抗菌肽基因。在本项目中，我们将前期 工作中获得的抗菌肽基因与载体连接，构建抗菌肽酵母高效表达 体系，以工程菌工业化发酵生产抗菌肽，用这种方法可获得大量 因的表达及其产物的抗菌活性进行分析，也没有开发出基于鱼类 抗菌肽基因的广谱抗菌肽制剂。本项目将开发出具有自主知识产 权的新型抗菌肽制剂。 项目完成时至少可达到国内领先水平。 项目技术方案抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测 定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验 重组表达载体的构建 将我们从淡水鱼中诱导表达的抗菌肽基因与具有高效表达启动 子的表达载体连接，构建重组表达载体。 抗 平上筛选抗菌肽高效达抗菌肽抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测 定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验 重组表达载体的构建 将我们从淡水鱼中诱导表达的抗菌肽基因与具有高效表达启动 子的表达载体连法从转录和翻译两个水 平上筛选抗菌肽高效表达酵母。 抗菌肽的大量表达。 利用筛选到的高效表达酵母菌发酵产生抗菌肽。 抗菌肽的分离纯化。 离心收集表达上清液，采用硫酸铵沉淀 项目技术来源 课题申请人在法国国家农业研究中心分子遗传学实验室工作 期间，参加了欧盟资助的有关微生物抗菌肽在解脂耶氏酵母中表达 的研究课题，掌握了抗菌肽研究的相关技术，为本课题的顺利完成 奠定了技术基础。 项目实验检测条件 申请人所在实验室为江西省生物化学与分子生物学重点实验 室，具有全自动测序仪型 型电转仪高速冷冻离心机超速冷冻离心机超低温 冰箱仪，超纯水系统各种规格的电泳仪杂交仪 紫外分光光度计设施先进的细菌培养室等仪器设备。 上述仪器设备基本上可满足本项目的研究需要。 项目申请单位人才资源情况技术人员总数中高级 技术人员比例 项目申请单位南昌大学是我省唯所省部共建的工程重 点建设大学，人才资源丰富，科研力量雄厚。生命科学学院有专任教 师人，其中正副教授人，讲师人，中高级技术人员比例。 项目组人员专业结构职称结构 项目组科研人员人，主要由生物化学与分子生物学专业微生 物学