1、及其混用的近源种进行样本采集，研究其化学成分的组成，主要活性成分总皂苷的含量，运用指纹图谱明确各品种化学成分的异同，同时对其进行分子鉴定，从基源上鉴别不同近似种。找到区分不同源竹节参的特异性条带。为中药竹节参的优选提供参考。方法采集不同产地竹节参。通过萃取，大孔吸附树脂，正向硅胶，反向硅胶及制备高效液相等手段，实现对各种竹节参主要化学成分的分离鉴定。运用香草醛高氯酸显色法测定竹节参各近似种的总皂苷含量。采用流动相为乙腈磷酸水溶液梯度洗脱，研究不同来源竹节参指纹图谱的区别，作相似度分析，并通过对照品对其主要色谱峰进行确认。运用法提取各品种竹节参总。对总进行多态性分析，找出不同来源，不同品种竹节参的分子差异。结果样品采集显示，不同产地存在竹节参狭叶竹节参羽叶竹节参以及过渡品种。分离出人参皂苷竹节参皂苷Ⅴ竹节参皂苷Ⅳ竹节参皂苷Ⅳ，竹节参皂苷这五个主要的化学成分。通过香草醛高氯酸显色法测定出竹节参各近似种的皂苷含量，结果显示，竹节参各近似种皂苷含量差异不大，均在至之间。建立不同竹节参近似种的高效液相指纹图谱，标定了其主要色谱峰，初步明确近似种间主要差异化学成分。通过分析，找到了不同源竹节参的特异性条带。结论竹节参存在竹节参狭叶竹节参羽叶竹节参以及过渡品种的分布，其化学成分主要有人参皂苷竹节参皂苷Ⅴ竹节参皂苷Ⅳ竹节参皂苷Ⅳ，竹节参皂苷五种，含量在左右。不同产地竹节参在基因形态已经出现了衍化差异，但差异不大，未发现特异性。关键词竹节参化学成分指纹图谱分子鉴定万方数据三峡大学硕士学位论文Ⅴ，Ⅳ，。

2、余引物虽有明显的扩增条带，但不能够表现出足够的多态性，染色。引物的筛选通过查阅文献，我们将在多个引物中筛选出多态性最多的条，用以竹节参鉴定用。所用模板均为湖北大叶竹节参。仅用以筛选出能扩增出足够多条带的引物。引物扩增如图图引物扩增该实验发现仅引物扩增出了较多条带，但不能够表现出足够的多态性，其余引物均表现出单条带扩增或无扩增，引物有痕迹量的多态性扩增。引物扩增如图图引物扩增本实验发现引物已能扩增出足够多的条带，用以进行多态性的分析，其余引物虽有明显的扩增条带，但不能够表现出足够的多态性。引物在不同模板条件下的扩增如图万方数据三峡大学硕士学位论文图引物在不同模板条件下的扩增由图可看出引物在各个模板中已表现出足够的多态性，同时可看出云南羽叶与云南狭叶竹节参已表现出对引物的差异，但其它组竹节参仍旧不能通过引物进行更特异的区分。电泳结果中每条带均代表了引物与模板互补的对结合位点，可记为个分子标记，根据分子量标准对照反应产物在凝胶上的相应位置，估计扩增产物的分子量大小。分子量与它的电泳迁移有下列关系式其中是分子量和为常数，为斜率，是电泳迁移率，实际使用的是相对迁移率。如果用几种标准分子量的对数作纵坐标，用各自的相对迁移率作横坐标，即可画出条斜率为负的标准曲线，然后，从标准曲线上就可求出此未知的分子量。扩增反应重复次，选取可重复的带记录，有带的记为，无带的记为，形成矩阵图的原始数据输入计算机。由于琼脂糖凝胶电泳是根据分子量大小来分离片段的，不能分离核苷酸序列有差异但长度相同的片段，所以存在共迁。

3、好，符合相关要求。重复性试验取样品份，依供试品溶液的制备方法操作，进样，图谱通过中药色谱指纹图谱相似度评价软件检测，计算主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差，结果各色谱峰的相对保留时间的在，相对峰面积的在，均小于，符合有关要求。稳定性试验样品进样后，分别在，检测指纹图谱，图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统检测，计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差。结果各色谱峰相对保留时间的在，相对峰面积的在，均小于，表明样品在内基本稳定，符合有关要求。指纹图谱分析标准品与混合标准品指纹图谱的建立将人参皂苷人参皂苷竹节参皂苷竹节参皂苷Ⅴ竹节参皂苷Ⅳ竹节参皂苷Ⅳ按照项色谱条件进样，得如图，然后根据各标准品色谱峰面积选择合适量的标准品混合为混合标准品如图。万方数据三峡大学硕士学位论文表对照品及在图中编号标准品人参皂苷人参皂苷竹节参皂苷Ⅴ竹节参皂苷竹节参皂苷Ⅳ竹节参皂苷Ⅳ混合标准品图各标准品及混合标准品指纹图谱叠加图不同产地不同品种竹节参指纹图谱的建立根据已建立的指纹图谱方法，依项色谱条件将不同产地相对应的不同品种竹节参个样品进样分析，以中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行多点校正及自动匹配后，与混合标准品对照，得到竹节参各品种与混合标准品指纹图谱叠加图。如图万方数据三峡大学硕士学位论文表竹节参各样品与混合标准品在图中编号图竹节参各品种与混合标准品指纹图谱叠加图竹节参各近似品种指纹图谱相似度评价通过中国药典委员会指纹图谱相似度评价软件对竹节参各品种指纹图谱进行相似度的分析。以。

4、现象，同时也因其自身扩增时的低严谨性，使得结果重现性不高。所以我们即使用同样的引物同样的模板进行多次扩增后，条带仍有差异。所以对于引物的优选我们只能通过其所扩增出条带的多寡来进行选择。我们对于竹节参的分析还处于摸索阶段，对于扩增出的条带，其特异性，种属内同源异源性以及碱基序列的分析，还有待于同门的进步研究和探索。万方数据分类号密级公开硕士学位论文不同来源竹节参化学成分及其的分析学位申请人毛帅学科专业药理学指导教师袁丁教授二四年五月万方数据，万方数据三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名日期三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的切法津和经济后果。学位论文作者签名日期万方数据三峡大学硕士学位论文内容摘要目的对不同来源竹节。

5、成分峰面积进样品峰面积竹节参皂苷Ⅴ竹节参皂苷Ⅳ竹节参皂苷Ⅳ湖北大叶湖北羽叶湖北狭叶云南大叶云南羽叶云南狭叶四川大叶四川羽叶不同产地不同品种竹节参的分析总的提取及纯化万方数据三峡大学硕士学位论文取各地不同品种竹节参共份。样品选取部位湖北大叶新鲜根茎湖北羽叶新鲜根茎湖北狭叶新鲜根茎云南大叶新鲜根茎云南羽叶新鲜根茎云南狭叶新鲜根茎四川大叶新鲜根茎四川羽叶新鲜根茎将各样品液氮处理，迅速粉碎研磨成粉状或者糊状。分别取，液氮研磨成粉末，移入含有缓冲液的管中震荡混合后，置于冰上。离心，弃上清，加入预热的提取缓冲液和，然后加入，水浴，期间不断颠倒混匀。稍冷却后，加入无水乙醇，轻微混匀再加入的氯仿异戊醇轻微混匀后，离心，取上清重复次。取上清，加入体积的醋酸钠和倍体积的的无水乙醇，沉淀。离心，弃上清，乙醇洗涤沉淀次，风干后溶于去离子水中，并加入适量的，消化。加入提取缓冲液调至，水浴，稍冷却后再加入等体积的氯仿异戊醇，轻微混匀后，离心。取上清，加入体积的醋酸钠和倍体积的的无水乙醇，沉淀，离心，。弃上清，乙醇洗涤沉淀次，风干后溶于中。琼脂糖凝胶电泳检测提取效果。蛋白核酸检测仪测定总浓度及纯度。均在以上。电泳结果如图图竹节参各品种总的制备琼脂糖凝胶电泳图万方数据三峡大学硕士学位论文由琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白浓度检测仪数据可看出，竹节参个品种的总提取结果，已到达检测标准。分析结果不同品种竹节参各取模板在扩增体系中进行。体系中含有缓冲液，引物和聚合酶，本实验发现引物已能扩增出足够多的条带，用以进行多态性的分析，。

6、重现性试验结果平均值加样回收率试验称取皂苷含量的竹节参药材粉末份，分别加入人参皂苷对照品溶液适量，按照项下方法制备样品溶液，按精密度试验法进行测定，计算得竹节参中总皂苷平均加样回收率为，为。竹节参各近似种皂苷含量测定结果见表表各品种竹节参皂苷含量品种总皂苷含量大叶竹节参羽叶竹节参狭叶竹节参第三部分竹节参各品种指纹图谱研究色谱条件色谱柱柱，粒径流动相乙腈相水相洗脱方式梯度洗脱，流动相系统配比见下表检测波长进样量流速。如表万方数据三峡大学硕士学位论文表梯度条件时间流速有机相水相方法学考察结果精密度试验取制备样品，连续进样次，以中药色谱指纹图谱相似度评价软件，对主要色谱峰的相对保留时间及相对峰面积进行统计，相对保留时间在之间，峰面积为，仪器精密度良好，符合相关要求。重复性试验取样品份，依供试品溶液的制备方法操作，进样，图谱通过中药色谱指纹图谱相似度评价软件检测，计算主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差，结果各色谱峰的相对保留时间的在，相对峰面积的在，均小于，符合有关要求。稳定性试验样品进样后，分别在，检测指纹图谱，图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统检测，计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差。结果各色谱峰相对保留时间的在，相对峰面积的在，均小于，表明样品在内基本稳定，符合有关要求。指纹图谱分析标准品与混合标准品指纹图谱的建立将人参皂苷人参皂苷竹节参皂苷竹节参皂苷Ⅴ竹节参皂苷Ⅳ竹节参皂苷Ⅳ按照项色谱条件进样，得如图，然后根据各标准品色谱峰面积选择合适量的标准品。

参考资料：

[1]绘本故事《世界上最好的爸爸》（优） 编号18060（第13页，发表于2022-06-24 19:24）

[2]绘本故事《世界上最好的爸爸》（优） 编号18060（第13页，发表于2022-06-24 19:24）

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