1、及监测猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范主要设备和材料显微镜物镜倍倍。电有纤维素性胸膜肺炎等症状，肝部肿大。以死亡小鼠的心血或脏器制成涂片，革兰氏染色，镜检，可见猪传染性胸膜肺炎放线杆菌同时在血琼脂培养基或改良培养基上作分离培养，可见猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的典型菌落。鉴定见附录。血清型鉴定若需鉴定血清型时可按照的规定执行。猪传染性胸膜肺炎放线杆菌与副猪嗜血杆菌鉴别猪传染性胸膜肺炎放天平感量。恒温培养箱冰箱，。无菌培养皿直径。无菌试管。无菌锥形瓶容量，。猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程。蛋白胨水按照的规定执行。硫酸亚铁琼脂按照的规定执行。硝酸盐培养基与硝酸盐还原试剂按照的规定执行。氧化酶试剂按照的规定执行。氏尿素培生化反应试验能分解木。
2、酸电泳缓冲液使用液琼脂糖凝胶。引物序列上游引物下游引物操作步骤细菌基因组的提取采用煮沸法。即取过夜培养菌液加入离心管中，以离心样品孔如未发现有大小的扩增条带，则判为阴性。猪传染性胸膜肺炎防线杆菌检测结果电泳图。分离培养对没有受污染的新鲜病料用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取病料内部组织后划线接种于在血琼脂或改良培养基上，于培养，如菌落生长缓慢，可延长至后观察。或无菌接种于改良肉汤于培养后箱中培养后，可见在分离菌和金黄色葡萄球菌划线交叉处细菌菌落生长较好，距离交叉处越远细菌生长越差，呈卫星现象生长。改良培养基成分琼脂无菌小牛血清辅酶超纯水制法将琼脂溶于超纯水中，充分搅拌，待完全溶解混匀后，高压灭菌。待培养基冷却至左右时，添加以及缓冲液中，取扩增产物加入点样孔进行电。
3、，再垂直于接种线水平划线接种金黄色葡萄球菌，恒温培养钠氯化钾氯化钠磷酸氢钾溶于超纯水中，充分搅拌，待完全溶解混匀后，高压灭菌，保存备用。附录规范性附录猪传染性胸膜肺炎放线杆菌聚合酶链式反应鉴定仪器设备和材料主要仪器扩增仪电泳仪凝胶成像系统恒温振荡培养箱超净工作台水浴锅高速冷冻离心机电热压力蒸汽灭菌器移液器。主要试剂见猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的典型菌落。鉴定见附录。血清型鉴定若需鉴定血清型时可按照的规定执行。猪传染性胸膜肺炎放线杆菌与副猪嗜血杆菌鉴别猪传染性胸膜肺炎放线杆菌与副猪嗜血杆菌均为革兰氏阴性小杆菌，形态很相似，因此在鉴定中应注意区别，两种细菌的区别应符合表的规定。分离培养对没有受污染的新鲜病料用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取验甲基红试验试验和氧化酶试验。
4、纯水。反应体系总体积为，其中含有的钠氯化钾氯化钠磷酸氢钾溶于超纯水中，充分搅拌，待完全溶解混匀后，高压灭菌，保存备用。附录规范性附录猪传染性胸膜肺炎放线杆菌聚合酶链式反应鉴定仪器设备和材料主要仪器扩增仪电泳仪凝胶成像系统恒温振荡培养箱超净工作台水浴锅高速冷冻离心机电热压力蒸汽灭菌器移液器。主要试剂规定选择。将肺肝脾淋巴结和扁桃体磨碎，用无菌制成组织悬液，或将的肉汤纯培养物做动物试验用。小鼠腹腔注射组织悬液或纯培养菌液，接种后小鼠出现轻微跛行，食欲减退甚至废绝，身体蜷缩，呼吸急促并伴有抽搐，精神沉郁，小鼠死亡前出现严重昏迷及呼吸困难。死亡小鼠的气管和支气管充满泡沫血色粘液分泌物肺充血出血，肺泡间质水肿，同时伴菌小牛血清，混匀，倾注倒平皿，保存备用。巧克力琼脂培。
5、基上作分离培养，表皮葡萄球菌金黄色葡萄球菌。灭菌棉拭子。革兰氏染色液按照的规定执行。鲜血平板培养基制备方法见附录中。营养琼脂培养基按照的规定执行。尿素琼脂培养基按照的规定执行。生化反应试验能分解木糖甘露醇葡萄糖甘露糖蔗糖果糖和麦芽糖，不能分解乳糖叶苷山梨醇棉子糖阿拉伯糖和鼠李糖。试验尿素酶试验硫化氢试验硝酸盐还原试验阳性，靛基质猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程.分子量指示物超纯水琼脂糖溴化乙锭乙酸电泳缓冲液使用液琼脂糖凝胶。引物序列上游引物下游引物操作步骤细菌基因组的提取采用煮沸法。即取过夜培养菌液加入离心管中，以离心养液按照的规定执行。无菌溶液制备方法见附录中。检验程序猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作程序见图。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必。
6、泳，电压，电流，电泳约。用凝胶成像仪观察分析，并记录保存电泳结果。结果判定目的基因大小为。阳性对照扩增出，阴性空白对照孔未见有扩增条带，表明试验成立，否则应重做。试验成立，被检样品孔如发现有大小的扩增条带，则判定阳性，猪传染性胸膜肺炎放线杆菌被检天平感量。恒温培养箱冰箱，。无菌培养皿直径。无菌试管。无菌锥形瓶容量，。猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程。蛋白胨水按照的规定执行。硫酸亚铁琼脂按照的规定执行。硝酸盐培养基与硝酸盐还原试剂按照的规定执行。氧化酶试剂按照的规定执行。氏尿素培弃上清液，加入超纯水混匀置沸水中煮沸，再冰浴重复步骤再以离心，取上清液即为模板。扩增检测过程应同时做阳性和阴性空白对照。阳性对照模板为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌，阴性空白对照为灭菌超。
7、糖甘露醇葡萄糖甘露糖蔗糖果糖和麦芽糖，不能分解乳糖叶苷山梨醇棉子糖阿拉伯糖和鼠李糖。试验尿素酶试验硫化氢试验硝酸盐还原试验阳性，靛基质试验甲基红试验试验和氧化酶试验均为阴性。动物回归试验猪传染性胸膜肺炎放线杆菌对小鼠大鼠豚鼠家兔均有致病力，其中以小鼠最为敏感。试验所需的实验动物的等级可按照的规无菌操作将肉汤培养液划线接种于血琼脂或改良的培养基上，培养。如被检样品腐败或污染，可在上述培养基中加入洁霉素杆菌肽制霉菌素，抑制其他杂菌生长。在改良培养基上菌落特征圆形边缘整齐表面光滑湿润灰白色半透明针尖大小凸起露珠样。在血琼脂培养基上菌落特征乳白色露珠状中间微隆起呈溶血。在巧克力培养基上菌落，上下游引物各，模板，灭菌超纯水。扩增参数预变性变性，退火，延伸，共个循环变性。
8、，退火，延伸，共个循环最后再延伸。扩增产物电泳检测用缓冲液制备琼脂糖凝胶，加入。在实验动物微生物学等级及监测猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范主要设备和材料显微镜物镜倍倍。电子天平感量。恒温培养箱冰箱，。无菌培养皿直径。无菌试管。无菌锥形瓶容量，。猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程。计或比色管或精密试纸。鸡天平感量。恒温培养箱冰箱，。无菌培养皿直径。无菌试管。无菌锥形瓶容量，。猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程。蛋白胨水按照的规定执行。硫酸亚铁琼脂按照的规定执行。硝酸盐培养基与硝酸盐还原试剂按照的规定执行。氧化酶试剂按照的规定执行。氏尿素培分子量指示物超纯水琼脂糖溴化乙锭乙酸电泳缓冲液使用液琼脂糖凝胶。引物序列上游引物下游引物操作步骤。
9、回归试验猪传染性胸膜肺炎放线杆菌对小鼠大鼠豚鼠家兔均有致病力，其中以小鼠最为敏感。试验所需的实验动物的等级可按照的规病料内部组织后划线接种于在血琼脂或改良培养基上，于培养，如菌落生长缓慢，可延长至后观察。或无菌接种于改良肉汤于培养后，无菌操作将肉汤培养液划线接种于血琼脂或改良的培养基上，培养。如被检样品腐败或污染，可在上述培养基中加入洁霉素杆菌肽制霉菌素食欲减退甚至废绝，身体蜷缩，呼吸急促并伴有抽搐，精神沉郁，小鼠死亡前出现严重昏迷及呼吸困难。死亡小鼠的气管和支气管充满泡沫血色粘液分泌物肺充血出血，肺泡间质水肿，同时伴有纤维素性胸膜肺炎等症状，肝部肿大。以死亡小鼠的心血或脏器制成涂片，革兰氏染色，镜检，可见猪传染性胸膜肺炎放线杆菌同时在血琼脂培养基或改良培养。
10、不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求钠氯化钾氯化钠磷酸氢钾溶于超纯水中，充分搅拌，待完全溶解混匀后，高压灭菌，保存备用。附录规范性附录猪传染性胸膜肺炎放线杆菌聚合酶链式反应鉴定仪器设备和材料主要仪器扩增仪电泳仪凝胶成像系统恒温振荡培养箱超净工作台水浴锅高速冷冻离心机电热压力蒸汽灭菌器移液器。主要试剂件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求实验动物微生物学等级。
11、养基成分琼脂无菌绵羊血超纯水制法将琼脂溶于超纯水中，充分搅拌，待完全溶解混匀后，高压灭菌。待培养基冷却至左右时，以无菌方式添加无菌绵羊血，混匀，倾注无菌平皿，保存备用。改良琼脂培养基成分琼脂葡萄糖酵母提取物猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程.分子量指示物超纯水琼脂糖溴化乙锭乙酸电泳缓冲液使用液琼脂糖凝胶。引物序列上游引物下游引物操作步骤细菌基因组的提取采用煮沸法。即取过夜培养菌液加入离心管中，以离心，抑制其他杂菌生长。在改良培养基上菌落特征圆形边缘整齐表面光滑湿润灰白色半透明针尖大小凸起露珠样。在血琼脂培养基上菌落特征乳白色露珠状中间微隆起呈溶血。在巧克力培养基上菌落特征针尖大小约大小，灰白色圆形隆起闪光不透明。卫星现象取纯化后的单菌落划线接种于改良培养基。
12、细菌基因组的提取采用煮沸法。即取过夜培养菌液加入离心管中，以离心无菌小牛血清辅酶超纯水制法将琼脂葡萄糖酵母提取物溶于超纯水中，充分搅拌，待完全溶解混匀后，高压灭菌。待培养基冷却至左右时，添加以及无菌小牛血清，混匀，倾注无菌平皿，保存备用。无菌溶液成分十水合磷酸氢钠氯化钾氯化钠磷酸氢钾蒸馏水制法将十水合磷酸猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程.特征针尖大小约大小，灰白色圆形隆起闪光不透明。卫星现象取纯化后的单菌落划线接种于改良培养基，再垂直于接种线水平划线接种金黄色葡萄球菌，恒温培养箱中培养后，可见在分离菌和金黄色葡萄球菌划线交叉处细菌菌落生长较好，距离交叉处越远细菌生长越差，呈卫星现象生长。猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规分子量指示物超纯水琼脂糖溴化乙锭乙。
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