达，标记细胞核为蓝色荧光，各组均未见表达。

胶质细胞源性神经营养因子骨髓间充质干细胞是近年来发现的种神经营养因子，广泛分布于脊髓，是轴突再生的种重要神经营养因子，对细胞产生动作电位后轴突发生突触囊泡活动，可见红色荧光逐渐衰减，同条件下转染组及未转染组细胞未见荧光标记的突触囊泡活动结果表明，胶质细胞神经营养因子持续诱导作用可促进骨髓间充质干细胞分化为具备突触循环功能的成熟神经元，该作用可能是通过经典的信号通路进行的。

关键词因子干细胞神经元突触细胞学轴突通路骨髓骨髓间充质干细胞文章快速阅读文章特点探讨骨髓间充质干细胞在胶质细胞神经营养因子诱导下向成熟神经元分化的可行性观察分化后细胞神经元轴突特异性蛋白表达并以追踪分化后细胞突触囊泡的胞吞胞吐及循环过程探索骨髓间充质干细胞向神经元分化与信号通路的相关性。

文题释义以其亲脂尾部插入脂膜外叶，给予高刺激触发递质释放后部分可随突触囊泡的内吞作用成为突触囊泡膜的部分并进入神经末梢，此时的荧光强度显著增强，残留在膜外叶的该实验仅初步发现信号传导通路与作用下骨髓间充质干细胞分化为功能性成熟神经元的相关性，仍需进步实验证明该信号通路的阻断与激活是否显著影响对骨髓间充质干细胞的诱导分化作用。

摘要背景胶质细胞神经营养因子在诱导骨髓间充质干细胞体外定向分化及促进神经元轴突再生过程中起到重要作用。

目的观察过表达胶质细胞神经营养因子基因诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化情况，检测分化后细胞突触功能及信号通路组分表达，初步探索骨髓间充质干细胞向成熟神经元分化机制。

方法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，分为重组腺病毒载胶质细胞神经营养因子基因转染组腺病毒转染对照组及未转染对照组。

检测各组骨髓间充质干细胞中胶质细胞神经营养因子基因相对表达量，免疫荧光技术检测各组细胞中及表达。

高探索骨髓间充质干细胞向成熟神经元分化机制细胞学论文荧光为转染组细胞在再次刺激内同视野中红色荧光逐渐衰减。

胶质细胞源性神经营养因子骨髓间充质干细胞信号通路可通过复杂的信号传导通路控制胚胎早期的发育，决定细胞分化增殖及生长的调节。

是由基因编码的类分泌型糖蛋白，为信号通路中的配体蛋白分子，通过自分泌或旁分泌与位于细胞膜上的受体相结合，最终激活细胞内相关靶基因表达，。

在细胞内的通路分为经典的信号通路非经典通路包括通路和通路。

经典的信号传导通路是条相对保守的信号通路，该信号通路激活后可引起胞质内未被磷酸化的游离大量积聚转位进入核内与转录因子形成异聚体调控核内靶基因表达，调控间充质干细胞向神经元，该组内细胞胞体皱缩明显，胞体周围可见神经元典型单级或双极轴突样结构，而转染组及未转染组细胞未见表达。

免疫荧光结果表明在无外源性诱导剂情况下过表达基因的骨髓间充质干细胞可自行向成熟神经元分化并实现满意的分化效率。

已有研究证实是成熟神经元的标志蛋白之，广泛存在于胞浆和轴突，不仅为细胞的结构完整与功能正常运行提供重要保障，并且可以在定程度上反映轴突活性。

实验结果表明在基因持续高表达作用下骨髓间充质干细胞分化过程中表达的同时细胞胞体逐渐皱缩并产生神经元轴突样结构，具备了成熟神经元的结构特点及功能性蛋白组成基础。

图体外培养各组骨髓间充质干细胞表达神经元特异性蛋白及信号通路组分蛋白免疫荧光染色，标尺为图注图中为转染组骨髓间充质干细胞表达，呈红色荧光，标记细胞核为蓝色荧光，细胞胞体皱缩，胞体出现对高钾离子刺激后无变化。

结果说明在持续诱导作用下骨髓间充质干细胞分化后细胞呈现典型的单级或双极轴突样结构并表达轴突功能性蛋白，在对高钾离子刺激后神经样细胞胞体突起轴突可发生去极化反应且展现轴突囊泡运输活性，定程度上反映了骨髓间充质干细胞分化后神经样细胞为具备囊泡运输功能的成熟神经元。

探索骨髓间充质干细胞向成熟神经元分化机制细胞学论文。

图体外培养各组骨髓间充质干细胞表达神经元特异性蛋白及信号通路组分蛋白免疫荧光染色，标尺为图注图中为转染组骨髓间充质干细胞表达，红色荧光，标记细胞核为蓝色荧光，胞体皱缩，见部分细胞周围出现轴突样结构分别为转染组未转染组，仅见细胞核蓝色荧光，未见红色荧光表达为转染组骨髓间充质干细胞表达，绿色荧光，标记细胞核为蓝色荧光基于骨髓间充质干细胞的多向分化潜能，近年来不断有研究结果肯定了骨髓间充质干细胞移植治疗脑脊髓损伤动物的可行性及有效性，并通过免疫荧光技术在脑脊髓损伤局部发现由间充质干细胞分化而来的神经元及轴突再生迹象，但再生神经元的电生理功能以及再生轴突的突触功能重建目前仍缺乏足够的研究说明更鲜有研究报道作用下骨髓间充质干细胞分化后神经生理功能变化，然而新生神经元的电生理功能对替代损伤神经元以及重建轴突突触功能性连接具有重要作用，因此研究骨髓间充质干细胞分化后细胞是否为具有功能性成熟神经元特征对骨髓间充质干细胞移植治疗神经系统疾病具有重要意义。

苯乙烯类染料等作为种活动依赖性的荧光染料可特异性地标记突触囊泡，是观察成熟神经元突触囊泡循环及递质转运功能的重要工具，与细胞膜片钳检测技术相比，在体现神经细胞电生理功能基础上进步突出反映功能性神经细胞胞体及轴突的突触活性，。

胞爬片次，加入染色工作液及含高钾离子的缓冲液诱发细胞发生动作电位，臵于恒温箱中孵育后更换缓冲液含漂洗次，荧光显微镜观察各组细胞红色荧光表达情况，然后再次加入含高钾离子缓冲液诱导动作电位，荧光显微镜追踪观察分化后细胞突触胞吐作用情况下红色荧光强度变化同视野每摄片。

材料实验动物周龄大鼠只用于骨髓间充质干细胞原代细胞培养，雌雄不限，体质量，由扬州大学比较医学中心实验动物中心提供，许可证号为苏。

实验试剂培养基胎牛血清胰蛋白酶加拿大公司美国公司兔抗鼠抗体美国公司兔抗鼠抗体美国公司中国达文生物公司型的单级或双极轴突样结构并表达轴突功能性蛋白，在对高钾离子刺激后神经样细胞胞体突起轴突可发生去极化反应且展现轴突囊泡运输活性，定程度上反映了骨髓间充质干细胞分化后神经样细胞为具备囊泡运输功能的成熟神经元。

荧光定量检测骨髓间充质干细胞中基因相对表达量取第代骨髓间充质干细胞，以孔细胞密度接种于孔板，随机分为转染组转染组及未转染对照组。

以感染复数为，和转染，加入含体积分数为胎牛血清的培养液终止转染，空白对照组只加入含体积分数为胎牛血清的培养液，于体积分数培养箱培养。

培养依据试剂盒提取各组细胞总，采用试剂盒方法进行反转录为，以为内参，进步以法行实时荧光定量扩增，对比检测各组细脑脊髓损伤动物的可行性及有效性，并通过免疫荧光技术在脑脊髓损伤局部发现由间充质干细胞分化而来的神经元及轴突再生迹象，但再生神经元的电生理功能以及再生轴突的突触功能重建目前仍缺乏足够的研究说明更鲜有研究报道作用下骨髓间充质干细胞分化后神经生理功能变化，然而新生神经元的电生理功能对替代损伤神经元以及重建轴突突触功能性连接具有重要作用，因此研究骨髓间充质干细胞分化后细胞是否为具有功能性成熟神经元特征对骨髓间充质干细胞移植治疗神经系统疾病具有重要意义。

苯乙烯类染料等作为种活动依赖性的荧光染料可特异性地标记突触囊泡，是观察成熟神经元突触囊泡循环及递质转运功能的重要工具，与细胞膜片钳检测技术相比，在体现神经细胞电生理功能基础上进步突出反映功能性神经细胞胞体及轴突的突触活性，。

等在研究中发现可标记海马锥体神经元胞体及突触前膜，给予高钾离子刺激诱发去极化反应促旁分泌与位于细胞膜上的受体相结合，最终激活细胞内相关靶基因表达，。

在细胞内的通路分为经典的信号通路非经典通路包括通路和通路。

经典的信号传导通路是条相对保守的信号通路，该信号通路激活后可引起胞质内未被磷酸化的游离大量积聚转位进入核内与转录因子形成异聚体调控核内靶基因表达，调控间充质干细胞向神经元分化，。

等报道红景天苷通过激活信号通路进而促使骨髓间充质干细胞表达神经元特异性蛋白并维持其分化状态，亦有研究采用特异性阻断信号通路后神经干细胞向神经元分化受到明显抑制，可见信号通路与间充质干细胞向神经元分化密切相关。

尽管如此，国内外研究鲜有报道诱导骨髓间充质干细胞分化为功能性神探索骨髓间充质干细胞向成熟神经元分化机制细胞学论文试剂盒试剂盒美国公司苯乙烯细胞膜染料美国公司缓冲液中国碧云天生物公司。

实验仪器恒温细胞培养箱美国公司流式细胞仪美国公司扩增仪美国公司酶标仪美国公司倒臵荧光显微镜日本公司。

实验方法大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定依据课题组前期实验方法从大鼠股骨骨髓中分离提取骨髓冲洗液，通过连续半换液法去除悬浮细胞杂质，取第代贴壁生长细胞，加入含的胰酶消化，条件下离心，清洗细胞次后转入流式管，各管依次加入单克隆抗体，避光冰上孵育，含洗涤细胞次，含重悬细胞，流式细胞仪检测分析。

探索骨髓间充质干细胞向成熟神经元分化机制细胞学论文培养时取出细胞爬片，洗涤次，多聚甲醛固定，洗涤次，作用，洗涤次，山羊封闭血清室温孵育，冲洗细胞爬片，分别加入兔抗鼠及抗，避光湿盒中孵育过夜，洗涤次，分别加入生物素标记羊抗兔红色荧光抗及绿色荧光抗∶，工作液室温孵育，洗涤次，加入染色，封固倒臵荧光显微镜观察各组细胞及的表达。

各组细胞体外培养时采用相同方法检测及的表达。

检测分化后细胞突触活性将第代骨髓间充质干细胞以孔密度接种于预先臵有细胞爬片的孔板中，实验分组及转染培养方法同前，参考等等实验染色方法，以缓冲液∶稀释制备染色工作液备用。

体外培养后取出各组细胞爬片，缓冲液冲洗细供重要保障，并且可以在定程度上反映轴突活性。

实验结果表明在基因持续高表达作