1、构成的基本步骤，可作定性或定量分析。法不仅可以用术并借助流式细胞仪敏感的分辨力所建立的方法。该法主要用于细胞内细胞因子和细胞表面粘附分子的检测，通过特异性的荧光抗体染色，能简单快速地进行单个细胞水平的细胞因子或粘附因子的检测，精确判断不同细胞亚群细胞因子和膜分子的表达情况。分离和培养待检细胞细胞固定封闭非特异性结合位点染色与分析基本步骤使用流式细胞分析法，可以区分不同分泌特性的细胞亚群细胞细胞细胞表面的粘附分子或细胞因子受体单克隆抗体技术直接或间接荧光抗体染色无需作细胞固定和非特异性结合位点的封闭待测细胞是新鲜分离或培养的活细胞，保持良好状态三酶联免疫斑点试验或在包被有待测细胞因子抗体的微孔板上，加入可分泌相应细胞因子的待测细胞，经在有或无刺激物存在的条件下培养，待测细胞分泌细胞因子于其周围，并被板上的特异性抗体捕获。后续的反应如同，。
2、子检测可应用于哪些方面的原理用途与的异同是什么思考题在应用流式细胞术分析细胞因子时，需要哪些靶细胞活化剂各自的作用是什么与细胞因子的生物活性测定法相比，免疫测定法的优势是什么如何看待其现有的劣势试推测解决现存的不足和改进方法的可能途径。在临床疾病诊断中，检测细胞因子和粘附分子的意义是什么应用细胞因子检测方法的原则有哪些如何利用细胞因子检测来判断细胞平衡如何从细胞因子检测的角度，了解机体细胞巨噬细胞等细胞的功能细胞因子和粘附分子是构成免疫应答的重要物质基础，检测这些分子可反映机体的免疫状态。细胞因子或粘附分子的检测方法包括生物学测定法和免疫测定法两大类。细胞因子和粘附分子检测的临床意义。对些特定疾病具有诊断价值对细胞因子治疗具有监测和指导用药的意义对机体的免疫状态具有评价作用。小结第十六章细胞因子与细胞粘附因子的测定第节生物学测定方法促进细。
3、样，以已知活性的细胞因子标准品为对照。死活细胞情况可用同位素释放法判断，或应用台盼兰染色死细胞后直接计数。也可通过结晶紫萘酚蓝黑等着染活细胞，再用脱色液脱出染料后酶标仪比色测定吸光值。死细胞数释放量越高或比色测定的吸光值越低，表明待测细胞因子的细胞毒活性则越高。应用系列稀释的细胞因子标准品，制作其活性与剂量关系的标准曲线，以此作为待测品活性的定量测定的基础。本法常用于等的测定二细胞毒活性测定法基本原理人干扰素小鼠干扰素大鼠干扰素多种族的和本法常用于等的测定，可诱导细胞产生抑制病毒和合成的酶，保护细胞不受病毒感染，产生细胞病变效应。及等细胞病变效应倒臵显微镜直接或结晶紫染色观察抑制病毒蚀斑形成或抑制病毒的产量三抗病毒活性测定法常用于检测抗病毒活性的细胞株常用于攻击细胞的病毒检测抗病毒活性的方法经典方法将生长在的培养基的细胞按接。
4、,从而得知样品中细胞因子的活性水平,般以活性单位表示生物活性测定法原理有助于细胞因子检测的活性作用刺激细胞增殖或集落形成的活性维持细胞生长和存活的特性抑制细胞生长或破坏细胞的效应促进细胞趋化或抗病毒作用以细胞因子依赖性细胞株为靶向，通过观察特定的细胞因子刺激或抑制依赖性细胞株增殖来评估细胞因子的活性水平。促进细胞增殖和增殖抑制测定法直接计数法简便直观,但费时主观因素影响大难以标准化和自动化细胞代谢活性测定方法掺入法或等比色法细胞代谢产物测定法代谢产物荧光强度测定法和指示细胞表面标记或可溶性分子测定法细胞增殖检测方法分类通过检测细胞合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。在细胞的增殖过程中，合成的增加使得指示细胞对核苷或碱基的需求增多，若将核苷标记上可以示踪的同位素，通过检测细胞内的同位素含量，则可反映细胞增殖的程度。实验前细胞浓度确定。
5、法将生长在的培养基的细胞按接种孔细胞培养板，每孔体积,株在孔板上贴壁生长过夜至每孔约万个细胞，去除营养液后加入倍梯度稀释的待测样品或干扰素标准品，再培养小时，去除干扰素溶液，用水疱性口炎病毒攻击定时间后至病毒对照孔细胞完全病变，用结晶紫染色指示。用能抑制细胞病变的最高稀释度作为个干扰素单位。结果计算方法距离比例高于细胞病变抑制百分数高于细胞病变抑制百分数低于细胞病变抑制百分数再将高于的细胞病变抑制率的稀释度的对数与距离比例相加，即为该干扰素的细胞病变抑制率的最高稀释度的对数。细胞病变程度分为个等级，即，表示无明显，为，为，为。根据病变程度找出的标本稀释范围，并以此计算出距离比例和确定效价。该法操作复杂影响因素较多，在试验前应对所用的病毒进行滴定。标本稀释度两孔平均细胞病变抑制程度细胞病变抑制积累细胞病变积累细胞病变抑制率细胞病变抑制法结。
6、增殖和抑制细胞增殖测定法二细胞毒活性测定法三抗病毒活性测定法四趋化活性测定法五生物学活性测定方法学评价第二节免疫测定方法方法二流式细胞分析法三酶联免疫斑点试验四免疫学测定方法学评价第三节细胞因子与细胞粘附分子测定的临床应用临床应用原则二特定疾病诊断的辅助指标三评估机体的免疫状态判断治疗效果及预后思考题小结是由活化的免疫细胞及些基质细胞表达并分泌的活性物质，其主要生物学功能是介导和调节免疫应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。细胞因子细胞粘附因子是介导细胞间及细胞与细胞外基质间粘附作用的分子，其化学本质为糖蛋白，可以细胞膜表面表达和可溶性两种形式存在。第节生物学测定方法基于检测的分子生物学测定法扩增法印迹法原位杂交法核酸酶保护分析生物活性测定法生物学测定法分类根据细胞因子特定的生物学活性,应用相应的指示系统,同时与标准品对比测定。
7、在洗去细胞后视用于试验的酶标抗体为抗或二抗，分别作直接或间接法。个斑点代表个细胞因子分泌细胞，斑点的颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关基本原理四免疫学测定方法学评价优点特异性高操作简便快速，无需依赖细胞株影响因素较少且易控制，重复性好，方法容易标准化。缺点所测定的只是细胞因子的蛋白含量，与其生物活性不定呈正比结果与所用的抗体来源及亲和力有很大的关系敏感性相对较低标本中细胞因子的可溶性受体，会影响特异性抗体对细胞因子的结合第三节细胞因子与细胞粘附分子测定的临床应用细胞因子的测定主要应用于特定疾病的辅助诊断机体免疫状态的评估临床疾病治疗效果的监测和指导用药疾病预防临床应用原则细胞因子和粘附分子的异质性功能交叉性和多样性来源的复杂性和组织细胞的非特异性，决定了在进行这些分子检测时，必须对方法选择和结果判断作出综合考虑。细胞因子的。
8、检测方法多种多样，各有利弊。高敏感性方法特异性的降低废弃物难处理活性测定方法定性试验基因分析法利于细胞内定位分析操作烦琐方法的联合应用常用临床标本抗凝全血，并分离获得单个核细胞炎症局部细胞因子的水平局部分泌液细胞因子或粘附分子的细胞内定位检测相应细胞相应细胞因子的基因和表达相应细胞疗效观察和预后判断疾病急性期和恢复期双份标本进行动态观测免疫荧光染色和流式细胞分析注意待检细胞的活性和状态，以保证结果的特异性二标本的适当选取意义细胞因子具有网络调节的状调节的特点级联效应或相互抑制作用的网络系统。有助于提供有效的疾病诊断和机体免疫状态信息举例细胞巨噬细胞和上皮样细胞分泌相应细胞因子的功能和细胞平衡状态和三细胞因子的联合检测二特定疾病诊断的辅助指标许多疾病过程均可出现粘附分子和细胞因子表达的异常改变，高表达低表达或是缺陷。
9、试验时，与细胞增殖或抑制方法样，以已知活性的细胞因子标准品为对照。死活细胞情况可用同位素释放法判断，或应用台盼兰染色死细胞后直接计数。也可通过结晶紫萘酚蓝黑等着染活细胞，再用脱色液脱出染料后酶标仪比色测定吸光值。死细胞数释放量越高或比色测定的吸光值越低，表明待测细胞因子的细胞毒活性则越高。应用系列稀释的细胞因子标准品，制作其活性与剂量关系的标准曲线，以此作为待测品活性的定量测定的基础。本法常用于等的测定二细胞毒活性测定法基本原理人干扰素小鼠干扰素大鼠干扰素多种族的和本法常用于等的测定，可诱导细胞产生抑制病毒和合成的酶，保护细胞不受病毒感染，产生细胞病变效应。及等细胞病变效应倒臵显微镜直接或结晶紫染色观察抑制病毒蚀斑形成或抑制病毒的产量三抗病毒活性测定法常用于检测抗病毒活性的细胞株常用于攻击细胞的病毒检测抗病毒活性的方法经典方。
10、果判断举例结果稀释度介于之间，距离比例为，效价为同法计算标准品的稀释度，将效价换算成国际单位，国际单位样品的稀释度标准品稀释度标准品的单位。趋化性诱导细胞向由趋化因子低浓度出向趋化因子高浓度处作定向移动的特性,可采用琼脂糖和微孔小室趋化试验。化学增活性细胞因子增强细胞的随机运动能力的特性,可采用琼脂糖小滴化学动力学试验检测。趋化因子诱导细胞移动的方式四趋化活性测定法敏感性较高特异性不高操作繁琐易受干扰五生物学活性测定方法学评价第二节免疫学测定法细胞因子或受体与相应的特异性抗体单克隆抗体或多克隆抗体结合，通过同位素荧光或酶等标记技术加以放大和显示，从而定性或定量显示细胞因子或受体的水平。根据抗体性质和特异性不同，夹心法可分为与夹心法与夹心法双夹心法细胞夹心法方法法是应用最为广泛的非均相酶标免疫分析技术，步或多步的抗原抗体反应和步酶促反应。
11、台盼蓝拒染实验结果客观易于自动化适用于大标本量的测定方法的特异性受依赖细胞株影响放射性污染放射性核素掺入法常见细胞因子掺入检测法所需细胞及参考试验条件细胞株所需浓度细胞数前培养时间后培养时间检测细胞因子干细胞因子,特点不使用放射性核素，以细胞代谢变化为增殖指征指示细胞的增殖情况与线粒体琥珀酸脱氢酶代谢活性相关测定步骤类似与同位素掺入法相比掺入物而非反应条件选用的细胞及其浓度培养时间不同比色法四甲基偶氮唑盐比色法细胞株原代细胞细胞终浓度细胞数加入前温育时间加入后检测细胞因子,度小鼠基质细胞细胞增殖或抑制活性检测的比色法常用靶细胞对指示细胞具有破坏作用的细胞因子，若与细胞共育将会导致细胞死亡。因此，待测细胞因子作系列稀释后加至指示细胞培养体系，以检测培养细胞的死细胞数作为判断指标，死细胞数量与细胞因子的活性呈正比。试验时，与细胞增殖或抑制方法。
12、均可与些特定疾病密切关联，同时还可反映疾病的进程细胞因子检测在特定疾病诊断中的意义二粘附分子检测在特定疾病诊断中的意义粘附分子有可溶性和膜结合性两种形式，均与机体的免疫状态和疾病的发生有关，在炎症肿瘤转移和器官移植排斥反应中发挥着重要的作用。相关粘附分子的检测有助于此类疾病的诊断。三评估机体的免疫状态判断治疗效果及预后机体免疫应答的强弱可通过细胞因子或粘附分子的表达水平来反映，其过高或过低表达均系免疫调节异常的结果细胞因子和粘附分子的水平，作为观察治疗效果和判断预后的重要指标接受治疗的患者进行细胞因子水平的监测，对保证治疗效果具有指导意义。细胞因子和细胞粘附分子的特性是什么可分为几类基于促进细胞增殖生物学活性，检测等方法所使用的细胞依赖株与检测原则是什么细胞因子生物活性测定法的种类，各用于哪些细胞因子的检测，主要优缺点法在细胞因子和粘附分。
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【医学PPT课件】第16章_细胞因子与细胞粘附因子的测定