流出的脓液阴道分泌物粪便等因含大量的正常菌群，故不宜作厌氧菌培养。

采集方法采取深部的组织标本需经碘酒消毒皮肤后，用注射器插入病变部位深部，抽取数毫升后，弃去滴于酒精棉球上。

尿道膀胱穿刺不同部位标本采集法标本来源收集方法封闭性脓肿针管抽取妇女生殖道后窟窿穿刺抽取下呼吸道分泌物肺穿刺术胸腔胸腔穿刺术窦道子宫腔深部创伤用静脉注射的塑料导管穿入感染部位抽取组织无菌外科切开二标本的运送与处理注意尽快送检，避免干燥，避免接触空气。

针筒运送法适宜液体标本。

标本抽取后排尽空气，并将针头插入无菌橡皮塞中即可送检。

无氧小瓶运送法常用于少量脓液标本的运送。

用无菌青霉素小瓶，瓶内装入的心脑浸液含有的刃天青氧化还原指示剂，加橡皮塞后，铝盖密封，真空泵抽出瓶中空气，充入，连续充抽次，最后充以，高压灭菌备用。

如有氧渗入小瓶，培养基则显粉红色，应弃去。

运送时挑选无色小瓶，将标本用无菌注射器注入瓶中即可。

标本充盈法送检适宜于大量液体标本运送。

将液体标本装满标本瓶，加盖密封，可驱除瓶中空气。

组织块运送法将组织块放在密封的厌氧罐中运送。

罐内放入经酸化硫酸铜浸泡过的钢丝绒，其表面即有金属铜，具强还原性，能迅速吸氧，造成厌氧罐中无氧状态。

厌氧袋运送法棉拭运送法略应在内处理完毕，最迟不超过，防止标本中兼性厌氧菌过度生长，抑制厌氧菌的生长。

如不能及时接种，应将标本保存于室温因冷藏对厌氧菌有害。

二检验程序气液相色谱临床标本肉眼观察及有无气味直接涂片染色镜检分离培养接种非选择性及选择性培养基增菌培养接种液体培养基厌氧培养确定厌氧菌每个平板挑个以上菌落每个菌落接种两个平板经培养需氧培养厌氧培养生长兼性厌氧菌无生长专性厌氧菌菌种保存分类鉴定药物敏感试验形态与染色菌落生化反应药敏性鉴定生长三检验方法肉眼观察应观察标本的性状，如是否为脓性带血，有无黑色坏死组织或黑色分泌物，有无硫磺样颗粒或恶臭气味等。

这些有助于厌氧菌的鉴定和培养基的选择。

二直接镜检在接种前除血液外，各种临床标本均需直接涂片染色镜检，以了解标本中细菌的数量形态及染色性，便于选择合适的培养基和培养方法，还可验证培养结果的成功与失败。

菌名革兰染色形态及其他特征脆弱类杆菌两端钝圆着色深，中间色浅不均匀，有空泡，长短不，标本有琥珀味产黑色素普雷沃菌球杆菌，可见多形性，长短不，紫外线照射要求厌氧培养，只需种个厌氧血平板，并将其分为三个区，在第二区交界处贴放枚灭滴灵，如纸片周围出现抑菌圈，表明有厌氧菌存在。

培养方法原理是通过物理化学或生物学等方法，创造种无氧的环境。

厌氧罐培养法即利用物理或化学的方法在个密闭的罐子里造成无氧的环境。

有抽气换气法和冷触媒法。

抽气换气法将种好的培养基放于罐内，在放于经烘烤的催化剂钯粒盘，盖子拧紧。

通过罐盖上的三通管，用真空泵抽尽罐内空气，再用反复充气与抽气次，最后充入含的混合气体。

钯粒用过既失活，再次使用前需将其加热至灼红。

如此反复使用冷触媒法利用化学方法产生和，产生的在触媒的作用下，与罐内的氧结合生成水，将氧消耗掉，造成无氧环境。

使用时同时抽气换气法将钯粒和接种好的平板放于厌氧罐内，然后将配套的气体发生袋剪去角，加入水，立即放于罐内，密封厌氧罐即可。

钯催化剂厌氧气袋法原理与冷触媒法相同，只是用无毒的塑料薄膜制成的特殊气袋取代厌氧罐。

优点简便易行，携带方便，尤适宜于床边接种，和基层医院使用。

厌氧手套箱为国际公认的厌氧菌培养的最佳设备。

为个密闭的大型金属箱，由手套操作箱和传递箱两个部分组成，操作箱内还附有小型恒温培养箱，通过自动化装置自动抽气换气，保持箱内的厌氧状态。

优点因接种培养和鉴定等都是在无氧状态下进行，提高了检验的阳性率缺点设备昂贵，耗气。

疱肉培养法肉渣加适量液体培养基，表面盖以凡士林。

肉渣含不饱和脂肪酸，可吸收氧，并含谷光甘肽，可降低培养基的氧化还原电势。

适用于所有厌氧菌的培养和菌种保存结果观察厌氧菌的初代培养生长较慢，故应在后才能初步观察，如疑为放线菌则应延长至。

观察时应注意厌氧菌在对数生长期对氧非常敏感，故在培养的不应使细菌暴露于空气中标本镜检阳性，但培养却无菌生长，应继续培养。

次代培养和厌氧菌的确定初代厌氧培养有细菌生长时，需做耐氧试验，确定是否为厌氧菌。

方法是从每个平板上挑取个不同性状的菌落，每个菌落分别接种个平板每个平板分个区，可同时做个菌落的次代培养。

分别放有氧无氧和含环境中培养，如只在厌氧环境中生长的细菌，即为厌氧菌。

四鉴定试验初步鉴定菌体形态染色反应菌落性状对些抗生素的敏感性最后鉴定依据生化反应和终末代谢产物。

形态与染色对其鉴定较为重要。

菌落性状包括其形态大小色素荧光及溶血等。

色素产黑色素普雷沃菌不解糖紫单胞菌天黑色素龋齿放线菌天粉红色色素奈氏放线菌培养时间延长黄褐色溶血产气荚膜芽胞梭菌血平板形成双溶血环荧光产黑色素普雷沃菌不解糖紫单胞菌些株在紫外线照射下红色荧光梭杆菌黄绿色荧光艰难梭菌绿色荧光抗生素敏感鉴定试验常用抗生素卡那霉素万古霉素多黏菌素般抑菌环直径为耐药。

分梭杆菌属对卡那霉素敏感类杆菌多数不敏感革兰阳性厌氧菌对万古霉素敏感，对黏菌素耐药。

聚茴香脑磺酸钠敏感试验用于鉴定厌氧消化链球菌特别敏感。

生化试验糖发酵吲哚试验硝酸盐还原试验触媒试验等。

可用自动微生物鉴定系统如等胞外酶快速鉴定试验利用厌氧菌产生的酶，与少量的生化基质反应，不需培养，只需浓菌液即可，小时可观察结果。

气液相色谱技术厌氧罐厌氧袋全自动微生物分析系统的基本配置自动微生物鉴定药敏测试系统衣氏放线菌在厌氧血平板上的光滑型菌落自动微生物鉴定药敏产黑素普氏菌厌氧菌的动力观察法厌氧性细菌及检验第节概述厌氧性细菌指群必须在无氧条件下才能生长繁殖的细菌。

厌氧菌的分类分为两类类为有芽胞厌氧菌，只有个属，即梭菌属，共有个种。

以芽胞形式存于体外。

另类为无芽胞厌氧菌，包括多个属，多个菌种和亚种多为体内正常菌群，存在于皮肤口腔上呼吸道肠道和泌尿生殖道。

易引起这些部位的内源性感染，而不易诊断。

二厌氧菌感染的原因局部组织的氧化还原电势降低如血管损伤烧伤动脉硬化肿瘤压迫组织坏死等，可造成局部组织的缺血缺氧，使降低此外，大面积外伤伴有需氧菌感染消耗了氧，为厌氧菌感染提供了条件。

机体免疫功能下降如接受免疫抑制剂放疗或化疗的患者糖尿病慢性肝肾疾病病人及老人婴幼儿早产儿等，因免疫力下降易併发厌氧菌感染。

二厌氧菌感染厌氧菌在正常人体的分布厌氧菌与需氧菌起组成了人体的正常菌群。

人体许多部位厌氧菌在种类和数量上远多于需氧菌，如在结肠中的细菌都是厌氧菌。

临床厌氧菌感染中，由正常菌群的无芽胞厌氧菌的感染最为多见。

常见厌氧菌在正常人体的分布主要菌属皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道芽胞厌氧菌梭菌属无芽胞厌氧菌革兰阳性杆菌丙酸杆菌属双歧杆菌属乳杆菌属优杆菌属放线菌属革兰阴性杆菌类杆菌属普雷沃菌属紫单胞菌属梭杆菌属革兰阳性球菌消化球菌属消化链球菌属革兰阴性球菌韦荣菌属机体局部屏障破坏，使厌氧菌进入周围组织和血液引起感染。

三厌氧菌感染的临床及细菌学指征局部有气体产生为重要指征之发生在粘膜附近的感染深部外伤有特殊的分泌物如有恶臭，暗红血色或在紫外光下发出红色荧光。

如分泌物或脓汁中有硫磺颗粒即为放线菌感染。

些抗生素治疗无效的感染细菌形态培养有特征性变化如革兰染色着色不均形态奇特呈明显多形性或镜检查见细菌而需氧培养为阴性者。

第二节厌氧菌的微生物学检验标本的采集与运送标本采集标本种类血液关节液心包液腹腔液膀胱穿刺液等体液深部脓肿渗出液肺部渗出液其他组织穿刺液。

厌氧菌培养最好的标本是组织标本，厌氧菌在其中更易生长。

采集注意事项避免正常菌群污染，尽量避免接触空气。

有些标本如鼻咽拭子痰液流出的脓液阴道分泌物粪便等因含大量的正常菌群，故不宜作厌氧菌培养。

采集方法采取深部的组织标本需经碘酒消毒皮肤后，用注射器插入病变部位深部，抽取数毫升后，弃去滴于酒精棉球上。

尿道膀胱穿刺不同部位标本采集法标本来源收集方法封闭性脓肿针管抽取妇女生殖道后窟窿穿刺抽取下呼吸道分泌物肺穿刺术胸腔胸腔穿刺术窦道子宫腔深部创伤用静脉注射的塑料导管穿入感染部位抽取组织无菌外科切开二标本的运送与处理注意尽快送检，避免干燥，避免接触空气。

针筒运送法适宜液体标本。

标本抽取后排尽空气，并将针头插入无菌橡皮塞中即可送检。

无氧小瓶运送法常用于少量脓液标本的运送。

用无菌青霉素小瓶，瓶内装入的心脑浸液含有的刃天青氧化还原指示剂，加橡皮塞后，铝盖密封，真空泵抽出瓶中空气，充入，连续充抽次，最后充以，高压灭菌备用。

如有氧渗入小瓶，培养基则显粉红色，应弃去。

运送时挑选无色小瓶，将标本用无菌注射器注入瓶中即可。

标本充盈法送检适宜于大量液体标本运送。

将液体标本装满标本瓶，加盖密封，可驱除瓶中空气。

组织块运送法将组织块放在密封的厌氧罐中运送。

罐内放入经酸化硫酸铜浸泡过的钢丝绒，其表面即有金属铜