1、酶切割位点确定限制酶的种类。应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择Ⅰ。不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择Ⅰ。为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用Ⅰ和Ⅰ两种限制酶但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点。根据质粒的特点确定限用影印法接种到只含的培养基中培养，可进步筛选出含重组质粒的受体细胞。假设用Ⅰ切割获取目的基因，用Ⅰ切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用Ⅰ。为什么。解析单链中相邻两个碱基之间通过“脱氧核糖磷酸脱氧核糖”连接。Ⅰ识别的序列为，切割会产生平末端图甲中片段含有两个Ⅰ识别位点，。
2、连接酶标记基因供重组的鉴定和选择深圳模拟基因是蓝藻上控制叶绿素合成的基因，为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失基因的变异株细胞。技术路线如图甲所示，请据图分析回答与真菌相比较，蓝藻在结构上最主要的特点是，在功能上最主要的特点是。过程中均使用的工具酶有。构建重组质粒在整个操作过程中的目的是和。若含有基因的片段和选用的质粒上的限制酶切割位点如图乙所示。请回答选修专题基因工程考点基因工程的工具核心知识通关限制性核酸内切酶限制酶来源主要从生物中分离纯化而来。功能双链分子的种特定核苷酸序列，并且使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的断开。原核识别磷酸二酯键识别序列的特点呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都。
3、基因工程中可以作为运载体的除质粒外，还有噬菌体的衍生物动植物病毒等。大肠杆菌细胞有细胞壁和细胞膜，能阻止质粒外源等物质的进入，只能通过处理细胞，使细胞处于能吸收周围环境中分子的生理状态这种细胞称为感受态细胞才能作为受体细胞。答案黏性末端平末端切割产生的片段末端与Ⅰ切割产生的相同或或噬菌体的衍生物动植物病毒未处理的大肠杆菌吸收质粒外源的能力极弱延伸探究若把平末端连接起来，应该选用什么酶提示连接酶。切割载体和目的基因的酶是否必须选择同种酶，原因是什么提示不必。只要两种酶切割产生的末端相同即可。西安模拟正常细胞中含有抑癌的基因，若它失活而不能表达，则基因突变的细胞易形成肿瘤。基因治疗肿瘤是根本的方法，腺病毒以其嗜好增殖细胞和对人体。
4、列已经被修饰。连接酶起作用时，不需要模板。思维拓展与有关的四种酶比较项目限制酶连接酶聚合酶解旋酶作用底物分子分子片段脱氧核苷酸分子作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键碱基对间的氢键形成产物黏性末端或平末端形成重组分子新的分子形成单链高考模拟精练全国卷根据基因工程的有关知识，回答下列问题限制性内切酶切割分子后产生的片段，其末端类型有和。质粒运载体用Ⅰ切割后产生的片段如下„„„„为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的除可用Ⅰ切割外，还可用另种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是。按其来源不同，基因工程中所使用的连接酶有两类，即连接酶和连接酶。反转录作用的模板是，产物是。若要在体外获得大量反转录产物，常采用技术。基因工程中除。
5、。西安模拟正常细胞中含有抑癌的基因，若它失活而不能表达，则基因突变的细胞易形成肿瘤。基因治疗肿瘤是根本的方法，腺病毒以其嗜好增殖细胞和对人体基本无害而成为良好的基因载体。野生型腺病毒含有抑制基因活性的基因，以及病毒复制基因，因此需要重新构建有疗效的安全的腺病毒。图甲乙中箭头所指为相应限制酶切点。构建重组腺病毒时，限制酶最好选择，这样既可以去除基因以防止病毒复制后损伤健康细胞，同时还能破坏基因以防止其。将目的基因与腺病毒重组时，重组的成功率较低，依然还有大量非重组的野生型病毒的，这是因为。分子片段含有个碱基对即。经扩增后，通过只用限制酶Ⅰ与同时用Ⅰ和Ⅲ两种方法切割，其电泳结果如图丙所示，可推断限制酶Ⅲ在该片段上的切割点有个。解。
6、以找到条，如，以为轴，两侧碱基互补对称，如以为轴，两侧碱基互补对称。中心轴线中心线切割后末端的种类。连接酶常用类型连接酶连接酶来源大肠杆菌噬菌体功能连接连接结果恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的黏性末端黏性末端和平末端磷酸二酯键载体双链环状限制酶标记基因其他载体噬菌体衍生物等。具备的条件。能在宿主细胞内并大量复制。有切割位点，以便与外源基因连接。具有特殊的，以便进行筛选。动植物病毒稳定保存个至多个限制酶标记基因作用。作为，将目的基因转移到宿主细胞内。利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量。运载工具复制特别提醒限制酶和连接酶的关系限制酶和连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。限制酶不切割自身的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别。
7、个识别位点在左端序列向右三个碱基对的位置第二个识别位点在右端序列向左三个碱基的位置，从而两个位点切割后产生的片段的长度分布为，即得到的片段长度为。基因的序列中含有两个识别位点，经过Ⅰ完全切割会产生和三种不同长度的片段，基因的序列中含有个识别位点，经过切割后会产生和两种长度的片段。能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为的Ⅰ和识别序列为的Ⅰ，若使用Ⅰ会同时破坏质粒中的抗生素抗性基因和抗生素抗性基因，所以要用Ⅰ来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素抗性基因，便于筛选出含有重组质粒和质粒的大肠杆菌再用影印法接种到只含抗生素的培养基中培养，重组质粒的受体细胞死亡，可进步筛选出含重组质粒的受体细胞。见答案。答案脱氧核糖磷。
8、脱氧核糖两Ⅰ抗生素抗生素不能因为用Ⅰ切割获取目的基因，用Ⅰ切割质粒，然后形成重组质粒，用Ⅰ不定将插入在抗生素抗性基因处的目的基因重新切割下来，因为目的基因和抗生素抗性基因拼接处含有，不定出现如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题代表的物质和质粒的化学本质都是，二者还具有其他共同点，如，写出两条即可。若质粒分子的切割末端为，则与之连接的目的基因切割末端应为可使用把质粒和目的基因连接在起。氨苄青霉素抗性基因在质粒上称为，其作用是。下列常在基因工程中用作载体的是苏云金芽孢杆菌抗虫基因土壤农杆菌环状分子大肠杆菌的质粒动物细胞的染色体解题指南解答本题需注意两点质粒的化学本质是小型环状分子。质粒作为载体的条件以及载体的种。
9、，另类是从噬菌体中分离出来的，称为连接酶。反转录是指以为模板在逆转录酶的作用下合成的过程，可以在体外短时间内大量扩增的技术叫多聚酶链式反应。基因工程中可以作为运载体的除质粒外，还有噬菌体的衍生物动植物病毒等。大肠杆菌细胞有细胞壁和细胞膜，能阻止质粒外源等物质的进入，只能通过处理细胞，使细胞处于能吸收周围环境中分子的生理状态这种细胞称为感受态细胞才能作为受体细胞。答案黏性末端平末端切割产生的片段末端与Ⅰ切割产生的相同或或噬菌体的衍生物动植物病毒未处理的大肠杆菌吸收质粒外源的能力极弱延伸探究若把平末端连接起来，应该选用什么酶提示连接酶。切割载体和目的基因的酶是否必须选择同种酶，原因是什么提示不必。只要两种酶切割产生的末端相同即可。
10、根据题干信息“野生型腺病毒含有抑制基因活性的基因，以及病毒复制基因”，构建基因表达载体时，应选用Ⅰ和Ⅰ切割载体和含有目的基因的，这样既可以去除基因以防止病毒复制后损伤健康细胞，同时还能破坏基因以防止其抑制基因的活性。由于切下的片段有可能与原基因重新结合，因此将目的基因与腺病毒重组时，重组的成功率较低，依然还有大量非重组的野生型病毒的。只用限制酶Ⅰ切割能产生和三种长度的片段，同时用Ⅰ和Ⅲ两种酶切割可产生和三种长度的片段，可见，限制酶Ⅲ又将长度为的片段切成和两段，将长度为的片段切成的两段，由此可推断限制酶Ⅲ在该片段上的切割位点有个。答案Ⅰ和Ⅰ抑制基因的活性切下片段有可能与原基因重新结合方法技巧限制酶的选择技巧根据目的基因两端的限。
11、粒外，和也可作为运载体。若用重组质粒转化大肠杆菌，般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是。解题指南解答本题需明确四点限制性内切酶的作用和特点。连接酶的种类。运载体的类型。受体细胞的选择原理。解析当限制性内切酶在它识别序列的中心轴线两侧将的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而当限制性内切酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。为使运载体与目的基因相连，不同的限制性内切酶应该切出相同的黏性末端。连接酶根据其来源的不同分为两类，类是从大肠杆菌中分离得到的，称为连接酶，另类是从噬菌体中分离出来的，称为连接酶。反转录是指以为模板在逆转录酶的作用下合成的过程，可以在体外短时间内大量扩增的技术叫多聚酶链式反应。
12、。解析代表的物质是大型环状分子，质粒是种裸露的结构简单于细菌拟核之外的小型环状分子，两者都能自我复制，并蕴含遗传信息。与质粒分子的切割末端能够连接的目的基因切割末端之间能够发生碱基互补配对，可使用连接酶将它们连接在起。质粒分子上的氨苄青霉素抗性基因可以作为标记基因，便于对重组进行鉴定和筛选。作为载体必须具备的条件在宿主细胞中能保存下来并能大量复制有多个限制性核酸内切酶切割位点有定的标记基因，便于筛选。常用的载体有质粒噬菌体的衍生物动植物病毒等。苏云金芽孢杆菌抗虫基因般作为目的基因土壤农杆菌环状分子不容易在宿主细胞内保存动物细胞染色体的主要成分是和蛋白质，不能被限制性核酸内切酶切割，因此不能用作载体。答案能够自我复制具有遗传特。
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