识与有关的四种酶比较项目限制酶连接酶聚合酶解旋酶作用底物分子分子片段脱氧核苷酸分子作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键碱基对间的氢键形成产物黏性末端或平末端形成重组分子新的分子形成单链限制酶识别序列的特点呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到条中心轴线，如，以中心线为轴，两侧碱基互补对称为轴，两侧碱基互补对称。

切割后末端的种类限制酶和连接酶的关系限制酶和连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。

限制酶不切割自身的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

连接酶起作用时，不需要模板。

载体条件与目的条件目的稳定并能复制目的基因稳定存在且数量可扩大有个至多个限制酶切割位点可携带多个或多种外源基因具有特殊的标记基因便于重组的鉴定和选择作用作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。

利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。

易误警示基因工程操作基本工具的个易错点易误点限制酶是类酶，而不是种酶。

易误点限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温强酸或强碱均易使之变性失活。

易误点在切割目的基因和载体时要求用同种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。

易误点将个基因从分子上切割下来，需要切两处，同时产生个黏性末端。

易误点不同分子用同种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同个分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端般不相同。

易误点限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便进行检测。

易误点基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同。

基因工程中的载体是分子，能将目的基因导入受体细胞内膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。

易误点基因工程中有种工具，但工具酶只有种。

跟踪演练下列有关基因工程中限制性内切酶的描述，错误的是种限制性内切酶只能识别种特定的脱氧核苷酸序列限制性内切酶的活性受温度影响限制性内切酶能识别和切割限制性内切酶可从原核生物中提取解析种限制性内切酶只能识别种特定的脱氧核苷酸序列，正确限制性内切酶的活性受温度影响，正确限制性内切酶能识别和切割，错误限制性内切酶可从原核生物中提取，正确。

答案下图为分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性内切酶聚合酶连接酶解旋酶作用的正确顺序是解析限制性内切酶切断的是磷酸二酯键聚合酶是复制过程中的使用到的酶连接酶是粘合由于限制性内切酶切开的磷酸二酯键解旋酶作用的是中的氢键。

故答案为。

答案解题技巧限制酶的选择技巧根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类。

应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择Ⅰ。

不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择Ⅰ。

为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用Ⅰ和Ⅰ两种限制酶但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点。

根据质粒的特点确定限制酶的种类。

所选限制酶要与切割目的基因的限制酶致，以确保产生相同的黏性末端。

质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶Ⅰ会破坏标记基因如果所选酶的切割位点不是个，则切割重组后可能丢失些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。

考点二基因工程的操作过程核心知识获取目的基因直接分离从基因组文库中获取即用限制酶进行切割分离从文库中获取即利用反转录形成利用扩增技术获取大量目的基因人工化学合成适用于分子较小的基因。

化学合成法针对已知核苷酸序列的较小基因反转录法以为模板，在反转录酶的作用下人工合成基因表达载体的构建基因工程的核心目的使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。

基因表达载体组成构建过程将目的基因导入受体细胞生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术感受态细胞法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到质粒的上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞的染色体上表达将含有目的基因的表达载体提纯取卵受精卵显微注射受精卵发育获得具有新性状的动物处理细胞感受态细胞重组表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收分子目的基因的检测与鉴定易误警示关于操作添加植物激素，即生长素和细胞分裂素诱导细胞的分裂和分化。

在转基因过程中，质粒和含目的基因的片段要用同种限制酶进行切割，形成相同的黏性末端构建的基因表达载体含有目的基因标记基因启动子和终止子。

愈伤组织中细胞的全能性高，可作为受体细胞检测转基因植株的是否插入了目的基因，常用分子杂交技术。

上述过程涉及到基因工程植物细胞工程。

考点三基因工程的应用及与蛋白质工程的关系核心知识乳腺生物反应器与工程菌生产药物的比较含义乳腺生物反应器是指使外源基因在哺乳动物的乳腺中特异表达，利用动物的乳腺组织生产药物蛋白。

工程菌是指用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。

两者区别比较项目乳腺生物反应器工程菌基因结构动物基因的结构与人类基因的结构基本相同细菌和酵母菌等生物基因的结构与人类基因的结构有较大差异基因表达合成的药物蛋白与天然蛋白质相同细菌细胞内没有内质网高尔基体等细胞器，产生的药物蛋白可能没有活性受体细胞动物的受精卵微生物细胞导入目的基因的方式显微注射法感受态细胞法生产条件不需严格灭菌，温度等外界条件对其影响不大需严格灭菌，严格控制工程菌所需的温度营养物质浓度等外界条件药物提取从动物乳汁中提取从微生物细胞中提取蛋白质工程与基因工程的比较项目蛋白质工程基因工程原理中心法则的逆推中心法则基因重组过程预期蛋白质功能设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列合成表达出蛋白质获取目的基因构建基因表达载体将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定实质定向改造或生产人类所需的蛋白质定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型或生物产品基因的异体表达区别结果生产自然界没有的蛋白质生产自然界已有的蛋白质联系蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程基因工程中所利用的些酶需要通过蛋白质工程进行修饰改造易误警示易误点毒蛋白基因编码的毒蛋白并无毒性，进入昆虫消化道被分解成多肽后产生毒性。

易误点青霉素是诱变后的高产青霉菌产生的，不是通过基因工程改造的工程菌产生的。

易误点动物基因工程的应用主要体现在提高动物生长速度改善畜产品品质用转基因动物生产物等方面。

跟踪演练海淀区期中科研人员利用相关技术改变了胰岛素链的第位氨基酸，从而避免了胰岛素结合成无活性的二聚体形式。

下列相关叙述中，不正确的是胰岛素的本质是蛋白质，不宜口服使用可通过测定的序列确定突变是否成功对胰岛素结构的改造属于蛋白质工程该过程的操作对象是胰岛素分子解析胰岛素的本质是蛋白质，在消化道内会被分解成氨基酸，丧失功能，正确可通过测定的序列确定突变是否成功，基因突变后的碱基序列发生变化，正确对胰岛素结构的改造属于蛋白质工程，蛋白质工程是对自然界已有的蛋白质进行改造，正确该过程的操作对象是控制胰岛素合成的基因，蛋白质工程是基因工程的延续和发展，错误。

答案蛋白质工程与基因工程相比，其突出的特点是蛋白质工程原则上能生产出任何蛋白质蛋白质工程能够对现有的蛋白质进行改造，或者制造种新的蛋白质蛋白质工程可以不通过转录和翻译来实现蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第三代基因工程解析基因工程原则上能生产自然界原有的蛋白质，故错误蛋白质工程能对现有的蛋白质进行改造，或制造种新的蛋白质，故正确蛋白质工程中合成蛋白质需要经过转录和翻译，故错误蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程，故错误。

答案解题技巧蛋白质工程中，蛋白质的改造是通过基因的改造来实现的，这样的改造可遗传。

改造基因时，要进行基因合成或对基因进行修饰，因此，需要用到基因工程中的有关酶，如限制酶连接酶等。

改造后的基因需要表达出相应的蛋白质，可将改造或合成的基因导入受体细胞中让其表达，导入时，仍然需要构建基因表达载体。

可见，基因工程技术是蛋白质工程技术的基础，因此，蛋白质工程也叫作第二代基因工程。

题组基因工程的工具与操作程序重庆卷下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述，正确的是表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞反转录获得表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原起点借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用解析由于胰岛素基因只在胰岛细胞中表达，因此在肝细胞中无胰岛素基因的转录产物为胰岛素基因的转录启动于启动子，而不是复制原点抗生素抗性基因可作为标记基因，在含有抗生素的培养基中将受体细胞筛选出来启动子位于胰岛素基因上，在胰岛素基因的转录中起作用，终止密码子位于，在胰岛素基因的翻译中起作用。

答案小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因目的基因后再重组表达。

下列相关叙述正确的是双选设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列用方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列体系中定要添加从受体细胞中提取的聚合酶定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞解析设计引物时应当考虑由此扩增的目的基因与载体两端的序列进行互补配对扩增目的基因时需根据基因两端的序列设计引物，不必知道基因的全部序列体系中应用耐高温的聚合酶，而不是从受体细胞中提取的普通聚合酶为保证目的基因表达出所需的产物，需选择合适的受体细胞。

答案嗜热土壤芽胞杆菌产生的葡萄糖苷酶是种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验Ⅰ利用大肠杆菌表达酶扩增基因时，选用基因组作模板。

右图为质粒限制酶酶切图谱。

基因不含图中限制酶识别序列。

为使扩增的基因重组进该质粒，扩增的基因两端需分别引入和不同限制酶的识别序列。

嗜热土壤芽孢杆菌ⅠⅠ大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为。

Ⅱ温度对酶活性的影响转基因的大肠杆菌分泌出有活性的酶据图可知，保温分钟后，酶会为高效利用酶降解纤维素，反应温度最好控制在单选。

Ⅲ利用分子育种技术提高酶的热稳定性在扩增基因的过程中，加入诱变剂可提高基因的突变率。

经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的酶的基因。

失活与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获取热稳定性高的酶基因的效率更高，其原因是在过程中多选。

仅针对基因进行诱变基因产生了定向突变基因可快速累积突变基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变考纲内容基因工程的工具与操作程序基因工程的应用与蛋白质工程命题规律限制酶连接酶与载体基因工程的基本操作程序基因工程在农业医药等方面的应用蛋白质工程的产生与操作命题趋势主要考查基因工程的步骤和应用。

常以最新的基因工程的研究成果为背景考查基因工程与克隆技术组织培养和胚胎工程的知识间的联系，综合考查学生的解