基因是否导入受体细胞可用抗原抗体杂交技术。

蛋白质工程的目的是改造或合类需要的蛋白质。

蛋白质工程的操作对象是蛋白质分子。

知考点破疑难系统知识整合•核心考点考点基因工程的操作工具“分子手术刀”限制性核酸内切酶限制酶存在主要存在于原核生物中。

特性种限制酶只能识别种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割分子。

识别序列的特点呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到条中心轴线，如图，中轴线两侧的双链上的碱基是反向对称重复排列的。

如以中心线为轴，两侧碱基互补对称以为轴，两侧碱基互补对称。

切割后末端的种类分子经限制酶切割产生的片段末端通常有两种形式黏性末端和平末端如图所示。

当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而当限制酶在它识别序列的中轴线处切开时，产生的则是平末端。

“分子缝合针”连接酶种类连接酶连接酶来源大肠杆菌噬菌体功能特性只能将双链片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来缝合两种末端，但连接平末端的效率较低相同点都缝合磷酸二酯键，如图“分子运输车”载体载体具备的条件能在受体细胞中复制并稳定保存。

具有个至多个限制酶切点，供外源片段插入。

具有标记基因，供重组的鉴定和筛选。

最常用的载体是质粒，它是种裸露的结构简单的于细菌拟核之外，并具有自我复制能力的双链环状分子。

其他载体噬菌体的衍生物动植物病毒等。

特别提醒般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，对些天然的载体进行人工改造。

限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完整性，有利于对目的基因的检测。

为使目的基因与载体形成相同的片段末端以便连接，通常使用同种限制酶将二者切割，但如果不同限制酶切割分子所产生的末端也存在互补关系时，则两末端也可连接。

应用训练根据基因工程的有关知识，回答下列问题。

限制性内切酶切割分子后产生的片段，其末端类型有和。

质粒运载体用Ⅰ切割后产生的片段如下„„„„为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的除可用Ⅰ切割外，还可用另种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是。

按其来源不同，基因工程中所使用的连接酶有两类，即连接酶和连接酶。

反转录作用的模板是，产物是。

若要在体外获得大量反转录产物，常采用技术。

基因工程中除质粒外，和也可作为运载体。

若用重组质粒转化大肠杆菌，般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是。

解析本题考查基因工程的操作过程及基因工程中的工具和工具酶的作用，考查考生的识记能力与理解分析能力，难度适中。

限制性内切酶切割分子形成的末端通常有两种，即黏性末端和平末端。

为使运载体和目的基因连接，二者必须具有相同的黏性末端，因而当使用除Ⅰ之外的其他酶进行切割时，应该产生相同的黏性末端。

连接酶的来源有两个是大肠杆菌，二是噬菌体。

反转录是由形成的过程，获得大量反转录产物时常采用扩增技术。

基因工程常用的运载体是质粒，除此以外，噬菌体和动植物病毒也可作为运载体。

如果用大肠杆菌作受体细胞，必须用钙离子处理，使其处于感受态此状态吸收外源的能力增强。

答案黏性末端平末端切割产生的片段末端与Ⅰ切割产生的相同或或噬菌体动植物病毒未处理的大肠杆菌吸收质粒外源的能力极弱考点二基因工程的操作过程和应用基因工程的操作程序分析目的基因的获取途径从自然界中已有的物种中分离出来，如从基因文库或文库中获取。

人工合成目的基因常用的方法有反转录法和化学合成法。

利用技术扩增目的基因通过技术可对已获取的目的基因进行扩增，以获取大量的目的基因。

基因表达载体的构建特别提醒插入的目的基因的表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入基因部位之前需有启动子，之后需有终止子。

两次使用的限制酶为同种酶，这样形成的黏性末端碱基之间互补，便于连接。

将目的基因导入受体细胞转化生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞转化过程将目的基因插入质粒的上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞的上表达将含有目的基因的表达载体提纯取卵受精卵显微注射受精卵发育获得具有新性状的动物处理细胞感受态细胞重组表达载体分子与感受态细胞混合感受态细胞吸收分子目的基因的检测与鉴定类型检测内容方法结果导入检测目的基因是否进入受体细胞分子杂交和之间杂交带转录检测目的基因是否转录出分子杂交和之间杂交带显示分子检测翻译检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原抗体杂交杂交带类型检测内容方法结果个体水平检测包括做抗虫抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度对基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较，以确定功能活性是否相同等基因工程的应用乳腺生物反应器与工程菌生产药物的比较比较项目乳腺生物反应器工程菌基因结构动物基因的结构与人类基因的结构基本相同细菌或酵母菌等生物基因的结构与人类基因的结构有较大差异基因表达合成的药物蛋白与天然蛋白质相同细菌细胞内没有内质网高尔基体等细胞器，产生的药物蛋白可能没有活性比较项目乳腺生物反应器工程菌受体细胞动物的受精卵微生物细胞生产条件不需对待转基因生物的正确态度应是趋利避害，不能因噎废食。

转基因生物存在安全性争议的原因目前对基因的结构调控机制及基因间的相互作用了解有限。

目的基因往往是异种生物的基因。

外源基因插入宿主基因组的部位往往是随机的。

生物武器种类种类举例致病菌鼠疫菌霍乱弧菌伤寒杆菌炭疽杆菌痢疾杆菌病毒天花病毒动物痘病毒等基因重组的致病菌生化毒剂如肉毒杆菌毒素可以阻滞神经末梢释放乙酰胆碱，从而引起肌肉麻痹。

只要有的肉毒杆菌毒素就可以使人死亡特点传染性强污染面广，危害时间长难以防治具有定的潜伏期受自然条件影响大。

传播途径经食物和水传播空气传播接触传播虫媒传播病原体直接传播。

应用训练江苏卷下列关于转基因生物安全性的叙述中，错误的是我国已经对转基因食品和转基因农产品强制实施了产品标识制度国际上大多数国家都在转基因食品标签上警示性注明可能的危害开展风险评估预警跟踪和风险管理是保障转基因生物安全的前提目前对转基因生物安全性的争论主要集中在食用安全性和环境安全性上解析为了维护消费者对转基因产品的知情权和选择权，我国对转基因食品和转基因农产品实行了标识制度，项正确只有经确定是安全的转基因食品才能向消费者出售，可能存在危害的转基因产品不允许出售，项错误为保障转基因生物安全，可开展风险评估预警跟踪和风险管理等措施，项正确转基因生物是否安全的争论主要集中在它是否能保证食用安全及环境安全上，项正确。

答案误区盘点状元笔记基因工程操作工具易错辨析限制酶是类酶，而不是种酶。

限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温强酸或强碱均易使之变性失活。

在切割目的基因和载体时要求用同种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。

将个基因从分子上切割下来，需要切两处，同时产生个黏性末端。

不同分子用同种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同个分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端般不相同。

限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。

基因工程操作过程中易出现的错误限制酶剪切目的基因与质粒的次数不同获取个目的基因需限制酶剪切次，共产生个黏性末端或平末端，切割质粒则只需要限制酶剪切次，因为质粒是环状分子，而目的基因在分子链上。

目的基因的插入位点不是随意的基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。

基因工程操作过程中只有第三步将目的基因导入受体细胞没有碱基互补配对现象第步存在逆转录法获得，第二步存在黏性末端连接现象，第四步存在检测时的分子水平杂交。

农杆菌转化法原理农杆菌易感染植物细胞，并将其质粒上的转移并整合到受体细胞染色体上。

目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。

转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。

受体细胞的选择受体细胞常用植物受精卵或体细胞经组织培养动物受精卵般不用体细胞，微生物大肠杆菌酵母菌等。

要合成糖蛋白有生物活性的胰岛素则必须用真核生物酵母菌需内质网高尔基体的加工分泌般不用支原体，原因是它营寄生生活定不能用哺乳动物成熟的红细胞，原因是它无细胞核，不能合成蛋白质。

还应注意的问题有基因表达载体中，启动子片段起始密码子终止子片段终止密码子。

基因工程应用中的易错分析毒蛋白基因编码的毒蛋白并无毒性，进入昆虫消化道被分解成多肽后产生毒性。

青霉素是诱变后的高产青霉菌产生的，不是通过基因工程改造的工程菌产生的。

动物基因工程主要为了改善畜产品的品质，不是为了产生体型巨大的个体。

纠错演练天津理综为达到相应目的，必须通过分子检测的是携带链霉素抗性基因受体菌的筛选产生抗人白细胞介素抗体的杂交瘤细胞的筛选转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定三体综合征的诊断解析解答此题可结合基因工程的第四步目的基因的检测和鉴定。

鉴定水平分为分子水平细胞水平以及个体水平。

受体菌的筛选属于个体水平，不需要分子检测，故错误。

杂交瘤细胞的筛选需用抗原抗体杂交的方法，属于分子水平，故正确。

对抗虫棉植株抗虫效果的鉴定属于个体水平，故错误。

三体综合征检测需进行细胞培养，并分析其染色体组成，属于细胞水平，故项错误。

答案纠错演练科学家通过基因工程的方法，能使大肠杆菌产生人的胰岛素。

以下叙述错误的是可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒导入大肠杆菌的目的基因不定能成功表达连接酶和限制性内切酶都是构建重组质粒必需的工具酶目的基因的检测与表达过程中没有发生碱基互补配对解析大肠杆菌本身不能在含抗生素的培养基上存活，当导入重组质粒后，质粒含有的抗性基因使大肠杆菌可以存活，起到筛选作用导入大肠杆菌的目的基因不定能成功表达，还要进行检测和鉴定在目的基因检测和表达过程中，分子杂交，基因探针与的杂交等都要发生碱基互补配对，基因的表达过程中转录和翻译过程也存在碱基互补配对。

答案选修现代生物科技专题专题►►基因工程回顾教材基础整合核心考点体验双基考题考纲要求考纲展示高频考点考纲解读基因工程基因工程的诞生Ⅰ简述基因工程诞生的历程基因工程的原理及技术Ⅱ简述基因工程的工具及其作用理解并掌握基因工程的原理和基本操作程序考纲展示高频考点考纲解读基因工程的应用Ⅱ举例说出基因工程在农牧业医药卫生等方面的应用蛋白质工程Ⅰ简述蛋白质工程的基本原理克隆技术植物的组织培养Ⅱ简述植物组织培养和植物体细胞杂交的操作步骤动物的细胞培养与体细胞克隆Ⅰ简述动物细胞培养和体细胞核移植技术及其应用前景细胞融合与单克隆抗体Ⅱ举例说出动物细胞融合和单克隆抗体技术及其应用考纲展示高频考点考纲解读胚胎工程动物胚胎发育的基本过程与胚胎工程的理论基础Ⅰ简述胚胎发育的基本过程和胚胎工程的理论基础胚胎干细胞的移植Ⅰ说出胚胎干细胞的移植及其应用胚胎工程的应用Ⅱ举例说出胚胎工程的应用及发展前景考纲展示高频考点