菌种保藏为了保持菌种的纯度，需进行菌种保藏，常用的方法有临时保藏法和甘油管藏法。

临时保藏法适用于频繁使用的菌种，其步骤为菌种接种在试管的固体斜面培养基上适宜条件下，培养至菌落长成将试管放在冰箱中保存以后每个月，都要重新将菌种从旧培养基上转移到新鲜的培养基上，重复步骤。

这种保存菌种的时间短个月，菌种易被污染，易产生变异。

甘油管藏法适用于需长期保存的菌种。

其方法是在甘油瓶中装入甘油，然后灭菌将培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在的冰箱中保存。

新情境激趣引航遍布于地球上各种环境中的微生物具有丰富的物种多样性。

迄今为止，能够在实验室条件下培养的微生物仅仅是其中的小部分，微生物物种的绝大多数还都难以在现有培养技术和条件下进行繁殖和生长。

新课堂互动探究学习目标了解有关培养基的基础知识。

进行无菌技术的操作。

进行微生物的培养。

新知预习培养基概念人们按照微生物对营养物质的不同要求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

分类依据培养基的物理性质可分为液体培养基液体状态的基质。

固体培养基在液体状态的基质中加棒不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

培养基灭菌后，需冷却至左右时才能倒平板，原因是琼脂在以下凝固。

培养皿打开条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。

整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避灭菌培养基高压蒸汽灭菌培养皿干热灭菌倒平板待培养基冷却至左右时，在酒精灯火焰附近倒平板注意事项天平称量时，注意放等大的称量纸。

防止牛肉膏粘在托盘上。

在溶化时要用玻璃和蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖溶化牛肉膏和称量纸水加热取出称量纸加蛋白胨和氯化钠加琼脂注意不断用玻璃棒搅拌防止糊底而导致烧杯破裂补加蒸馏水至调知识点三制备牛肉膏蛋白胨固体培养基细解教材制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤如下计算依据牛肉膏蛋白胨培养基配方比例计算配制的培养基时，各种成分的用量称量牛肉膏比较黏稠，可用称量纸称取，牛肉膏实验者双手化学消毒解析培养基般用高压蒸汽灭菌，正确牛奶消毒般用巴氏消毒法，煮沸会破坏蛋白质结构，错误接种环般用灼烧灭菌，正确实验操作者的双手用酒精擦拭消毒，正确。

答案为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部部分微生物，综上所述，项错误。

答案跟踪练习关于消毒和灭菌方法的选择，下列各项中错误的是培养基高压蒸汽灭菌牛奶煮沸消毒接种环灼烧灭菌高压蒸汽灭菌等解析灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子，项正确常用的灭菌方法有灼烧灭菌干热灭菌和高压蒸汽灭菌等，其中接种环用灼烧法灭菌，项正确消毒是指用较及容器的灭菌典例精析广元期中关于灭菌和消毒的理解不正确的是灭菌是指杀灭环境中切微生物的细胞芽孢和孢子消毒和灭菌实质上是相同的接种环用灼烧法灭菌常用灭菌方法有灼烧灭菌干热灭菌菌用酒精灯火焰的燃烧层充分灼烧接种工具的灭菌干热灭菌下灭菌玻璃器皿金属工具的灭菌灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物包括芽孢和孢子高压蒸汽灭菌条件下，灭菌培养基体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手后用氯气消毒水源等消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部部分对人体有害的微生物不包括芽孢和孢子紫外线消毒法紫外灯照射接种室灼烧灭干热灭菌箱内，高压蒸汽灭菌培养基等，特别提醒消毒和灭菌的区别项目概念常用方法应用的范围煮沸消毒法在煮沸般物品巴氏消毒法煮或在煮些不耐高温的液所有的微生物，包括芽孢和孢子。

三种常用灭菌方法的比较灭菌方法适用材料或用具灭菌条件灭菌时间灼烧灭菌接种环接种针或其他金属用具酒精灯火焰的充分燃烧层直至烧红干热灭菌玻璃器皿吸管培养皿和金属用具等时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

消毒灭菌消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部部分对人体有害的微生物不包括芽孢和孢子。

灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外方面对实验操作的空间操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。

将用于微生物培养的器皿接种用具和培养基等器具进行灭菌。

为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

实验操作微生物提供碳源氮源磷酸盐和维生素，三项均错误，项正确。

答案知识点二无菌技术细解教材获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。

无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个物不可缺少的营养物质，项正确水是该微生物的营养要素之，项正确。

答案跟踪练习牛肉膏可以为微生物提供氮源和维生素氢元素和氧元素碳源氮源磷酸盐和维生素无机盐解析牛肉膏可以为生长因子用以为唯碳源的培养基培养自养微生物，培养基中还必须提供氮源水无机盐。

氮源物质为该微生物提供必要的氮素，项正确该碳源是，不能作为该微生物的能源物质，项错误无机盐是该微生物生长因子用以为唯碳源的培养基培养自养微生物，培养基中还必须提供氮源水无机盐。

氮源物质为该微生物提供必要的氮素，项正确该碳源是，不能作为该微生物的能源物质，项错误无机盐是该微生物不可缺少的营养物质，项正确水是该微生物的营养要素之，项正确。

答案跟踪练习牛肉膏可以为微生物提供氮源和维生素氢元素和氧元素碳源氮源磷酸盐和维生素无机盐解析牛肉膏可以为微生物提供碳源氮源磷酸盐和维生素，三项均错误，项正确。

答案知识点二无菌技术细解教材获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。

无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个方面对实验操作的空间操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。

将用于微生物培养的器皿接种用具和培养基等器具进行灭菌。

为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

消毒灭菌消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部部分对人体有害的微生物不包括芽孢和孢子。

灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

三种常用灭菌方法的比较灭菌方法适用材料或用具灭菌条件灭菌时间灼烧灭菌接种环接种针或其他金属用具酒精灯火焰的充分燃烧层直至烧红干热灭菌玻璃器皿吸管培养皿和金属用具等干热灭菌箱内，高压蒸汽灭菌培养基等，特别提醒消毒和灭菌的区别项目概念常用方法应用的范围煮沸消毒法在煮沸般物品巴氏消毒法煮或在煮些不耐高温的液体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手后用氯气消毒水源等消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部部分对人体有害的微生物不包括芽孢和孢子紫外线消毒法紫外灯照射接种室灼烧灭菌用酒精灯火焰的燃烧层充分灼烧接种工具的灭菌干热灭菌下灭菌玻璃器皿金属工具的灭菌灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物包括芽孢和孢子高压蒸汽灭菌条件下，灭菌培养基及容器的灭菌典例精析广元期中关于灭菌和消毒的理解不正确的是灭菌是指杀灭环境中切微生物的细胞芽孢和孢子消毒和灭菌实质上是相同的接种环用灼烧法灭菌常用灭菌方法有灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌等解析灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子，项正确常用的灭菌方法有灼烧灭菌干热灭菌和高压蒸汽灭菌等，其中接种环用灼烧法灭菌，项正确消毒是指用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部部分微生物，综上所述，项错误。

答案跟踪练习关于消毒和灭菌方法的选择，下列各项中错误的是培养基高压蒸汽灭菌牛奶煮沸消毒接种环灼烧灭菌实验者双手化学消毒解析培养基般用高压蒸汽灭菌，正确牛奶消毒般用巴氏消毒法，煮沸会破坏蛋白质结构，错误接种环般用灼烧灭菌，正确实验操作者的双手用酒精擦拭消毒，正确。

答案知识点三制备牛肉膏蛋白胨固体培养基细解教材制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤如下计算依据牛肉膏蛋白胨培养基配方比例计算配制的培养基时，各种成分的用量称量牛肉膏比较黏稠，可用称量纸称取，牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖溶化牛肉膏和称量纸水加热取出称量纸加蛋白胨和氯化钠加琼脂注意不断用玻璃棒搅拌防止糊底而导致烧杯破裂补加蒸馏水至调灭菌培养基高压蒸汽灭菌培养皿干热灭菌倒平板待培养基冷却至左右时，在酒精灯火焰附近倒平板注意事项天平称量时，注意放等大的称量纸。

防止牛肉膏粘在托盘上。

在溶化时要用玻璃棒不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

培养基灭菌后，需冷却至左右时才能倒平板，原因是琼脂在以下凝固。

培养皿打开条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。

整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。

平板冷凝后要倒置的原因防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。

若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，易滋生杂菌，这个平板应丢弃。

典例精析宿迁期中关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是将称好的牛肉膏连同称量纸同放入烧杯待培养基冷却至左右时进行倒平板待平板冷却凝固约后将平板倒过来放置操作顺序为计算称量溶化倒平板灭菌解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基时，应将称好的牛肉膏连同称量纸同放入烧杯，正确待培养基冷却至左右时进行倒平板，正确待平板冷却凝固约后将平板倒过来放置，正确操作顺序为计算称量溶化灭菌倒平板，错误。

答案跟踪练习吉林中月考制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算称量倒平板溶化灭菌计算称量溶化倒平板灭菌计算称量溶化灭菌倒平板计算称量灭菌溶化倒平板解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的般步骤是计算称量溶化灭菌倒平板。

答案知识点四纯化大肠杆菌细解教材纯化大肠杆菌的方法平板划线法平板划线操作及培养结果接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。

平板划线示意图及培养后菌落分布示意图如下图所示。

每次划线前后都要进行灼烧接种环的目的灼烧时间目的第次杀死接种环上原有的微生物防止外来微生物干扰每次划线前杀死上次划线后残留在接种环上的菌种，使下次划线的菌种直接来自上次划线末端，使每次划线菌种数目减少，达到分离菌体的目的接种结束后杀死接种环上残存的菌种，避免污染环境或感染操作者稀释涂布平板法主要操作环节系列稀释和涂布平板。

系列稀释和涂布平板后培养结果如图所示。

纯化大肠杆菌的结果分析与评价未接种的培养基表面若有菌落生长，说明培养基被污染若无，则说明未被污染。

在接种大肠杆菌的培养基上可观察到的菌落。

有光滑型菌落，菌落边缘整齐，表面有光泽，湿润光滑呈灰色也有粗糙型菌落，菌落扁平，干涩边缘不整齐还有黏液型菌落，为含荚膜菌的菌落。

培养和，菌落大小不同，培养，菌落大，灰色深，光泽度强。

若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯混入其他杂菌或在实验操作过程中被杂菌污染。

特别提醒单细胞菌落的获得。

利用平板划线法接种时，单细胞茵落从后划线的区域挑取。

利用稀释涂布平板法接区的划线不能与第区的划线相连，故错。

答案景德镇质检无菌操作是微生物接种技术的关键传统发酵技术和微生物分离纯化应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。

回答下列相关问题消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生