1、胞类型。重要提示悬浮生长型细胞此类细胞在体外生长时可在培养基中悬浮生长，不必贴壁，因此也叫非贴壁型细胞。悬浮培养类似微生物的深层培养。由于是悬浮生长，细胞密度般都较高，培养的效率也高操作也容易，易于大规模生产，便于过程的控制大规模培养可采用培养微生物细胞用的发酵罐，但须将其稍加改进，如将搅拌速度减慢，搅拌叶改用螺旋桨式通气装置通过硅橡胶管扩散的方式等。些在体内原本就以悬浮状态生长的细胞，当接种于体外环境中，也可以以悬浮状态生长，这类细胞的胞体始终为球形。还有些细胞，在体外培养时，即可贴壁生长，也可悬浮生长。第二节体外培养细胞的生长特点体外培养细胞重要的生长特点包括贴附与伸展运动的接触抑制和生长的密度抑制贴附与伸展贴附并伸展是大多数体外培养细胞的基本生长特点，大多数的。
2、况下，培养的条件也会在定程度上影响细胞系的寿命。细胞生长的全生命过程在进行正常细胞培养时，无论细胞的种类和供体的年龄如何，在细胞的全生长过程中大致都要经过三个主要阶段原代培养或初代培养期自体内取出在体外培养和第次传代的时期，般约周。与体内相应的细胞性状相似。传代期传代大约数天至周左右重复次，持续数月，此期间细胞增殖旺盛。衰退老期反复传代定时间后大概至代后，细胞增殖变慢，端粒进行性缩短，直至停止分裂。有的细胞的极少部分后来细胞能够转化，获得永生，成为无限细胞系。细胞系原代细胞经第次传代后形成的能够继续进行传代培养的细胞群体称为细胞系，般为有限细胞系。原代培养后得到细胞系，再经多次传代培养后，部分细胞死亡，部分细胞继续生长并转化为连续细胞系或无限细胞系。细胞株从个经生。
3、，对氧的需求各不相同。细胞培养环境中的溶氧要适度，溶氧过低会影响细胞的能力代谢，从而影响细胞的生长反之，溶氧过高是也会对细胞产生毒性，影响细胞的能量代谢。在动物细胞培养过程中溶解氧般控制在。可以参与调节维持培养环境的。渗透压渗透压对动物细胞也有影响。多数传代细胞，对渗透压有较强的耐受性，而原代细胞和正常二倍体细胞对渗透压波动则比较敏感。人血浆渗透压约，为体外培养动物细胞的理想渗透压。不同细胞要求的渗透压略有不同，对大多数动物细胞来说，渗透压在的范围内是较为适宜的。常用的渗透压保护剂有三甲基甘氨酸脯氨酸和甘氨酸甜菜碱等。营养动物细胞的体外培养对营养的要求较高，往往需要多种营养成分的优化组合氨基酸所有动物细胞都需要种基本氨基酸精氨酸胱氨酸异亮氨酸亮氨酸赖氨酸甲硫氨酸苯丙氨酸。
4、物污染和无其他细胞污染。保证无污染的措施有所有培养材料器具要严格按照定程序严格清洗，绝对保证无毒和洁净，使用前必须进行消毒处理细胞培养过程中所需的气体液体，均应去除细菌病毒和支原体等各类污染物所有操作过程都必须在洁净条件下进行。温度维持细胞增殖生长，必须有适宜的温度。人和哺乳动物培养细胞的标准温度为，若偏离这温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。总的说来，培养细胞对低温的耐受力比对高温强。高温会使细胞内酶失活并破坏细胞膜上的脂类结构，诱导细胞凋亡。温度不超过时，细胞代谢强度与温度成正比超过时，细胞受损超过时，细胞死亡。低温会降低细胞内酶的活性，对细胞伤害不大温度降至冰点以下时，细胞可因胞质结冰受损而死亡。但如果向培养液中加定量的保护剂如甘油，改变冰晶的性质。
5、多形型细胞此型细胞外形与体内成纤维细胞形状相似，细胞大致呈梭形或不规则形。起源于中胚层的细胞在体外培养时般表现为这种形式。人胚肺细胞在显微镜下观可观察到典型的成纤维细胞型。成纤维细胞型细胞此型细胞形状上类似上皮细胞，扁平状，形态较为规则，细胞贴壁后呈三角形及不规则偏平的多角形，中央有扁圆形核，生长时彼此紧密连接成单层细胞。起源于内胚层与外胚层的细胞在体外培养时都可能呈现上皮型。血管内皮细胞宫颈癌细胞在显微镜下可呈现典型的上皮细胞型。上皮型细胞此型细胞具有类似巨噬细胞样的特征在支持物上分散生长，般不连接成片形成群落细胞胞质常伸出伪足和突起在培养皿壁上生长位置不固定，呈活跃的游走和变形运动，速度快且方向不规则细胞内易出现色暗的吞噬性颗粒。表现此类细胞形态的主要是具有吞噬。
6、物学鉴定的细胞系经过克隆化或其他筛选方法获得的单类型的细胞群体被称为细胞株。重要概念细胞系与细胞株每代细胞的生长过程在体外培养的细胞的生长过程中，当细胞繁殖到定密度后，将之分开并转移至新的培养皿中的称之为接种，使之继续繁殖生长，即为传代。细胞自接种至新的培养皿中至其下次再传代接种的时间称为细胞的代，每代细胞的生长过程可分为四个阶段滞留期指数生长期天平台期传代时机衰亡期第四节体外培养细胞的生长条件体外培养的细胞需要合适的生长环境和必需的条件才能生存繁殖。无污染环境温度气体环境渗透压营养生长附着物抑制物无污染环境在细胞培养过程中，离体细胞对任何毒性物质都非常敏感。因此，培养环境的无污染是保证细胞生存的首要条件，培养环境的无污染主要包括无毒性物质污染无微生。
7、哺乳动物细胞在体外均附着于定的底物而生长。当培养细胞在未贴附于底物之前般均似球体样当与底物贴附后，细胞将逐渐伸展而形成定的形态，呈成纤维细胞样或上皮细胞样等在体外，细胞贴附的底物可以是其它细胞胶原玻璃或塑料等。些促细胞附着因子例如纤维连接蛋白层粘连蛋白血清扩展因子型胶原等可以促进细胞与底物的附着。般来说，从底物脱离下来的贴附生长型细胞，不能长时期在悬浮中生长，除非是些转化了的细胞或恶性肿瘤细胞。细胞的贴附与伸展受到离子的作用机械和物理因素以及生物因素的影响。细胞贴附与伸展的步骤运动的接触抑制与生长的密度抑制接触抑制是体外培养中多数贴壁型细胞的生长特性之。般情况下，正常细胞在不断分裂而增殖的过程中存在不停顿的活动或移动，其外周的细胞膜呈现些特征性皱褶样活动，但是，当两个细胞。
8、移动而互相靠近时，其中之或两个将停止移动并向另方向离开，这保证了细胞将不会重叠。当贴壁细胞长满底物时，个细胞被其他细胞围绕致无处可去而发生接触时，细胞不再移动，在接触区域的细胞膜皱褶样活动将停止，此即接触抑制。运动的接触抑制与生长的密度抑制般来说，当细胞生长汇合形成单层时，细胞变得比较拥挤，扁平形成的程度减小，与培养液接触的表面积减少同时培养液中的些营养物将逐渐消耗掉，尤其是细胞周围的部位，因此，这种形成的单层细胞，其分裂将停止，单层细胞的密度常与培养液中的血清浓度有关，这种贴壁细胞的体外生长特性被称为细胞生长的密度抑制或密度依赖性调节形成密度抑制的单层细胞可在静止状态维持存活段时间，但不发生分裂增殖。转化细胞和恶性肿瘤细胞与正常细胞不同，它们的密度依赖性调节常常降低，因而。
9、细胞之间相互接触二是细胞与细胞外基质结合。动物细胞培养中，大多数哺乳动物细胞必须附着在固体表面生长，当细胞布满表面后即停止生长，这时若取走片细胞，存留在表面上的细胞就会沿着表面生长而重新布满表面。而从生长表面脱落进入液体的细胞通常不再生长而逐渐退化，这种细胞培养称为单层附壁培养。贴壁生长型细胞的生长般都经历游离期吸附期繁殖期和退化期。贴壁培养的细胞可用以蛋白酶酸碱等试剂或机械方法处理，使之从生长表面上脱落下来。贴壁生长型细胞在体外，细胞的贴壁方式与体内也不相同，体外培养细胞需要附着于些带适量正电荷的固体或半固体表面，大多是只附着个平面，因而体外培养的细胞的外形般与在体内时明显不同。按照贴壁型细胞的体外培养时的形态，主要分为四大类成纤维细胞型细胞上皮型细胞游走型细胞。
10、作用的单核巨噬细胞系统的细胞和肿瘤细胞。游走型细胞此型细胞形态上不规则，般分为胞体和胞突两部分，其中胞突为细长形，类似丝状伪足胞体虽然也略呈多角形，但没有成纤维细胞那样不规则。此类细胞不常见，只有些神经组织细胞等那以确定其稳定形态的才归入多形细胞。多形型细胞上述四种细胞形态学形式是细胞体外培养最常见的也是形态最明显的几种形式，体外培养时所谓的型细胞，仅是因为其形态与体内的种细胞类似，而不能将体外培养的这些细胞与体内同名的细胞完全等同，同时也不能说明培养细胞的起源。在实际培养中，所培养的细胞并不定呈现种典型的形态形式，而多呈现的是些过渡性形态。体外培养细胞的形态学特征受到多种培养条件的影响，因此，细胞形态学特征仅是对培养物判断或识别的种参考性指标，不能用于确定培养物的确切细。
11、，装入冻存管保存于液氮温度可达中，能长期贮存，细胞解冻复苏后，仍能继续增殖生长，细胞的生物学性状不受任何影响，这是保存细胞的最主要手段。合适的也是细胞生存的必要条件之，不同细胞对的要求不同，哺乳动物细胞般为之间。般来说，原代细胞对变动的耐受差，而传代细胞或肿瘤细胞对变动的耐受较强。当超出合适的范围，如低于或高于都会对细胞产生不利的影响，严重时可导致细胞蜕变或死亡。般来说，细胞对碱性不如对酸性的变化耐受。为保持培养环境的适宜的条件，可采用的措施在培养液中加入缓冲剂以稳定培养液的在开放式培养环境中，通入约的，平衡培养过程中的流失。气体环境气体是细胞生存的必须条件之，其主要包括和。参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长增殖和合成各种所需成分。不同的细胞和同细胞的不同生长时期。
12、可以生长成较高的终末细胞密度第三节体外培养细胞的生长过程体外培养细胞的生长过程包括三个层次的概念细胞生长的全生命过程每代细胞的生长过程单个细胞的生长过程细胞周期细胞生长的全生命过程培养的细胞是生长在培养器皿之中的，当细胞持续生长繁殖段时间后，到达定的细胞密度之后，就应当将细胞分离成两部分或更多部分至新的培养器皿并补充更新培养液，这过程称为传代或再培养。从动物体取出的原代培养的原代细胞，经过传代以后，便成为了细胞系，般正常细胞的这种细胞系的寿命只能维持定的时间期限被称为有限细胞系，然后将自行停止生长，即使提供足够的营养，最终仍致死亡，这个完整的过程，被称为细胞生长的全生命过程，也叫细胞系的生长过程。细胞系在培养中能够存活时间的长短，主要取决于细胞来自何种动物种族。在些情。
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