1、录学位论文原创性声明与学位论文版权使用授权书.摘要英文缩写.插图索引.附表索引.第章绪论.胚胎干细胞的生物学特性.胚胎干细胞的形态学特征胚胎干细胞的生物学特性.胚胎干细胞的建系.人胚胎干细胞的研究进展小鼠胚胎干细胞的研究进展胚胎干细胞的定向诱导分化.胚胎干细胞定向分化成神经细胞.胚胎干细胞定向分化成造血干细胞.胚胎干细胞定向分化成内皮细胞.胚胎干细胞定向分化成肝脏细胞肝细胞定向诱导分化过程中关键基因肝脏.肝脏的代谢功能肝细胞再生过程及调控胚胎中肝脏早期发育的分子机制.胚胎干细胞向肝细胞的体外诱导分化.酒精肝的形成机理乙醇和乙醛的毒性作用第章人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化鉴定.主要试剂与试剂盒.主要实验仪器和设备.实验步骤复苏细胞.博士学位论文细胞传代细胞诱导细胞总的提取普通逆转录反应逆转录反应.荧光定量芯片.细胞免。

2、三级代谢酶的相对表达水平图.检测诱导了未分化的人胚胎干细胞诱导分化第天细胞培养上清中和正常人类肝细胞的分泌的相对量.图.诱导分化第天样本和人正常肝细胞样本实验结果.图.诱导分化第天样本和人正常肝细胞样本实验结果.图.诱导分化第天样本和人正常肝细胞样本实验结果.图.荧光定量检测分化第天酒精对肝细胞诱导分化水平标志物表达水平的影响图.荧光定量检测分化第天酒精对胆管细胞诱导分化水平标志物表达水平的影响图.荧光定量检测分化第天酒精对肝细胞诱导分化水平早期标志物表达水平的影响.图.荧光定量检测分化第天酒精对肝细胞诱导分化中成熟肝细胞标志物表达水平的影响图.荧光定量检测分化第天酒精对肝脏分化中成熟胆管细胞标志物表达水平的影响博士学位论文图.荧光定量检测分化第天酒精对肝细胞诱导分化过程中级代谢酶表达水平的影响图.荧光定量检测分。

3、限增殖多向分化和自我更新等特性，且应用前景较广泛,。细胞研究在胚胎发育机理和认知细胞分化等的方面具有重要意义，同时其重要的应用在于克隆动物基因功能研究建立动物转基因动物制备药物的发现与筛选人类疾病模型肿瘤研究细胞组织移植治疗和器官的修复等方面。世纪末开始，细胞研究是生物医学领域的热点之。美国科学杂志评出的上个世纪十大科学突破中“干细胞研究与应用”名列榜首。可在特定条件下向个胚层的组织和细胞分化，所以可称之为全能干细胞。通常在改变抑制不分化状态的培养条件下可以分化成多种细胞类型。其广泛应用于生物学研究，也是因为具有在体外增殖并保持未分化状态及其多向分化潜能的生物学特性，医学应用价值巨大，使其已成为世界范围内研究的热点。.胚胎干细胞的生物学特性胚胎干细胞的形态学特征早期胚胎细胞与细胞具有相似的形态结构，有个或多个核仁。

4、检测化第天酒精对细胞周期的影响.图.检测化第天酒精对细胞核内表达的影响.图.检测化第天对和表达的影响图.荧光定量检测诱导分化第天对和表达水平的影响图.检测分化第天对和表达的影响图.荧光定量检测分化第天对细胞周期蛋白表达水平的影响。.图.检测分化第天对表达的影响.图.检测分化第天对细胞核内表达的影响图.检测诱导分化第天酒精对磷酸化水平的影酒精对人胚胎干细胞向肝细胞分化的影响响图.检测诱导分化第天对磷酸化水平的影响图.荧光定量检测诱导分化第天对和表达水平的影响.图.检测诱导分化第天对蛋白表达的影响图.检测分化第天不同处理的样本对和表达的影响.图.荧光定量检测诱导分化第天酒精对和表达水平的影响.图.检测诱导分化第天酒精对蛋白表达的影响图.荧光定量检测分化第天对和表达水平的影响.图.检测化第天对蛋白表达的影响图.荧光定量。

5、本研究证实，酒精抑制了肝细胞分化过程中信号通路，降低的磷酸化位点的磷酸化水平，导致转录因子核定位的减少，下调其下游靶基因细胞周期蛋白等的表达，最终造成细胞周期受阻。肝细胞分化过程中加入信号通路抑制剂，抑制了肝细胞和胆管细胞的形成，这现象与酒精对诱导分化的抑制途径相符。在此过程中和生长因子与的叠加，致使肝细胞诱导分化过程以及和细胞周期蛋白蛋白表达水平趋于正常，这验证了酒精是通过抑制生长因子与对信号通路的激活作用，进而抑制了人胚胎干细胞向肝细胞的诱导分化过程。本研究表明，酒精还影响肝细胞分化过程中经典信号通路和信号通路，降低这两个通路的活性，并抑制的表达。随后我们在分化过程中加入通路抑制剂，抑制了胆管细胞的形成，并通过上调来促进肝细胞的形成。我们又在此过程中加入经典信号通路抑制剂，导致肝细胞形成被抑制，并促进了胆管细。

6、第天酒精对肝细胞诱导分化过程中级代谢酶表达水平的影响图.荧光定量检测分化第天酒精对肝细胞诱导分化过程中二级代谢酶表达水平的影响图.荧光定量检测分化第天酒精对肝肝细胞诱导分化过程中二级代谢酶表达水平的影响图.诱导分化过程中第天荧光定量检测肝脏代谢酶相对表达水平.图.荧光定量检测分化第天天酒精对和的表达水平的影响.图.检测分化第天酒精对和的蛋白表达水平的影响.图.荧光定量检测分化第天酒精对表达水平的影响.图.诱导分化第天酒精处理样本和正常分化样本实验结果.图.诱导分化第天酒精处理样本和正常分化样本实验结果图.检测酒精对分化过程中的影响.图.荧光定量检测分化第天酒精对细胞标志物表达水平的影响图.荧光定量检测分化第天酒精对细胞周期蛋白表达水平的影响.图.检测分化第天酒精对细胞周期蛋白蛋白表达的影响.图.流式细胞仪细胞周期。

7、疫荧光染色.主要试剂的配制.实验结果人胚胎干细胞向内胚层细胞诱导分化.内胚层细胞向肝细胞诱导分化人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化程度与人正常肝细胞比较.小结讨论.第章酒精抑制人胚胎肝细胞向肝细胞分化.主要试剂与试剂盒.主要实验仪器和设备.实验步骤复苏细胞.细胞传代细胞诱导细胞总的提取普通逆转录反应荧光定量细胞总蛋白提取法测定提取蛋白浓度.蛋白质印迹法主要试剂的配制.实验结果酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化整个过程中影响人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化整个过程中肝脏代谢酶相对表达水平.酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中影响酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中肝脏细胞色素酶酒精对人胚胎干细胞向肝细胞分化的影响的影响检测酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中影响的主要信号通路酒精对分化过程中细胞外调节蛋白激酶的影。

8、酒精对诱导分化过程中细胞类型的影响小结讨论.第章酒精通过抑制信号通路抑制肝细胞分化主要试剂与试剂盒.主要实验仪器和设备.实验步骤复苏细胞.细胞传代细胞诱导细胞总的提取普通逆转录反应荧光定量细胞总蛋白提取细胞核蛋白提取法测定提取蛋白浓度主要试剂的配制.实验结果酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中些基因的影响信号通路在人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中的作用.小结讨论.第章酒精抑制肝细胞分化的相关信号通路.主要试剂与试剂盒.主要实验仪器和设备.实验步骤复苏细胞.细胞传代细胞诱导细胞总的提取普通逆转录反应博士学位论文荧光定量细胞总蛋白提取细胞核蛋白提取法测定提取蛋白浓度主要试剂的配制.实验结果酒精对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中信号通路的影响.信号通路在人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中的作用酒精对人胚胎干细胞。

9、博士学位论文摘要胚胎干细胞被广泛的应用于生物学研究中，是生命科学研究的热点之。作为肝病研究的主要细胞模型，胚胎干细胞将有助于解决人肝干细胞生长缓慢肝干细胞建系困难肝干细胞向肝细胞分化机制及基因调控机制等临床问题。乙醇的主要代谢器官为肝脏，酗酒是造成严重肝脏疾病首要因素。在欧美国家中，青年死亡的主要原因之就是饮酒过量造成了酒精性肝病。本论文运用胚胎干细胞诱导分化为肝细胞的研究模型先从胚胎干细胞定向诱导分化到内胚层细胞，再从内胚层细胞向肝细胞定向诱导分化，研究酒精对此过程的影响，模拟肝脏受损后启动肝卵圆再生过程，探讨酒精影响肝干细胞分化的分子机制。本论文研究发现，在人胚胎干细胞向肝细胞定向诱导过程中，酒精抑制了人胚胎干细胞向肝细胞和胆管细胞的分化以及成熟胆管细胞的形成，同时酒精也抑制了肝脏代谢酶表达及代谢功能的建立。。

10、胞形成。同时对肝脏代谢酶的表达与代谢功能的建立也存在抑制作用。这些实验结果证明了在本诱导体系中，经典信号通路与信号通路分别控制了肝细胞与胆管细胞的形成。本文研究结果确立了酒精对肝细胞分化的重要影响，加深了对肝细胞分化机理的理解，对肝损伤与酒精肝治疗的临床研究具有重要的指导意义。酒精对人胚胎干细胞向肝细胞分化的影响关键词人胚胎干细胞干细胞诱导分化酒精信号通路信号通路信号通路博士学位论文.,.,.,.,.,.酒精对人胚胎干细胞向肝细胞分化的影响,.博士学位论文英文缩写碱性成纤维细胞生长因子骨形成蛋白牛血清白蛋白地塞米松培养基培养基胚胎干细胞胎牛血清培养基培养基人胚胎干细胞肝细胞生长因子培养基血清替代物小鼠胚胎成纤维细胞小鼠胚胎干细胞非必需氨基酸抑瘤素聚合酶链式反应培养基蛋白免疫印迹酒精对人胚胎干细胞向肝细胞分化的影响。

11、测分化第天对和表达水平的影响图.检测化第天对和蛋白表达的影响图.荧光定量检测分化第天对表达水平的影响.图.检测化第天对蛋白表达的影响.图.荧光定量检测酒精对经典信号通路常见基因表达水平的影响图.检测诱导分化第天酒精对表达的影响图.检测诱导分化第天对细胞核内表达的影响图.荧光定量检测分诱导化第天对和表达水平的影响.图.检测诱导分化第天对和表达的影响图.荧光定量检测分化第天对级代谢酶和表达水平的影响.图.荧光定量检测分化第天对和表达水平的影响图.检测分化第天对表达的影响.博士学位论文附表索引表.基因组消化反应体系表.逆转录反应体系表.逆转录反应体系表.逆转录反应体系表.体系.表.配制法标准曲线表.核蛋白提取各溶液比例博士学位论文第章绪论胚胎干细胞,是原始性腺或早期胚胎原肠胚期之前中分离出来的类干细胞，它具有体外培养无。

12、向肝细胞诱导分化过程中信号通路的影响.经典信号通路在人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中的作用.经典信号通路对人胚胎干细胞向肝细胞诱导分化过程中信号通路的影响.小结讨论.总结参考文献致谢附录攻读学位期间发表的论文目录.酒精对人胚胎干细胞向肝细胞分化的影响插图索引图.显微镜观察人胚胎干细胞诱导分化第天的细胞形态图.免疫荧光染色检测诱导分化第天的表达.图.免疫荧光染色检测诱导分化第天的表达图.显微镜观察人胚胎干细胞诱导分化第天的细胞形态图.免疫荧光染色检测诱导分化第天的表达图.荧光定量检测诱导分化第天相对表达水平图.荧光定量检测诱导分化第天和相对表达水平.图.荧光定量检测诱导分化第天和相对表达水平.图.荧光定量检测诱导分化第天与人正常肝细胞和的相对表达水平.图.荧光定量检测诱导分化第天与人正常肝细胞级代谢酶二级代谢酶和。

参考资料：

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