1、抑制率注与空白对照组相比与空白对照组相比万方数据三峡大学硕士学位论文图直方图显示法检测对表达受体的细胞生长的影响与空白对照组相比与空白对照组相比实时定量检测的表达培养稳定表达受体的单核细胞，取对数生长期的细胞，用的处理后收集细胞，提取总，用核酸蛋白浓度测定仪检测提取的浓度及纯度，若，表明其纯度较高，蛋白质影响较小再进行琼脂糖凝胶电泳，电泳后将凝胶放在凝胶成像系统中曝光，条带清晰可见，条带较淡图，说明没有明显降解，可以继续下面的反应。将提取的总用逆转录试剂盒逆转录为，并以此为模板，分别以的引物进行实时定量扩增，为参照基因扩增及融解曲线见图。用处理后受体及，表达均高于空白对照。
2、化物酶二抗孵育，用凝胶成像系统仪曝光显影。以为参照，用对电泳后的图像进行灰度分析。结果发现处理前受体及蛋白表达的灰度比值分别为，处理后受体及蛋白表达的灰度值分别为，均高于空白对照组，具有统计学意义，表明三者在处理前后在蛋白水平上发生了显著变化，促进三者蛋白的表达。结果见表及图。万方数据分类号密级公开硕士学位论文在受体激活中的作用研究学位申请人习德娥学科专业免疫学指导教师韩莉教授二五年五月万方数据，万方数据三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何。
3、种于六孔板中，置于的细胞培养箱中过夜。收集细胞，用洗遍，离心。固定弃上清，每管加入多聚甲醛，室温下放置，然后用洗遍，离心。万方数据三峡大学硕士学位论文打孔弃上清，每管加入，室温放置，洗遍，离心。孵育抗兔抗人抗体用稀释倍，每管，放置使抗原抗体充分孵育。洗遍，离心。孵育二抗羊抗兔抗体用稀释倍，每管，避光放置使二抗与抗充分结合。洗遍，离心。上机检测将细胞浓度调整为个，用流式细胞仪进行检测。万方数据三峡大学硕士学位论文结果第部分对单核细胞中受体与表达的影响促使单核细胞炎症发生的最适浓度选择培养稳定表达受体的单核细胞，当细胞处于对数生长期时收集细胞，调整细胞浓度为个，孔板培养，每孔。
4、组受体及，具有统计学意义。表明三者的基因在处理前后发生显著变化，促进三者基因的表达。结果见表及图。图总电泳万方数据三峡大学硕士学位论文图扩增及融解曲线扩增曲线融解曲线扩增曲线融解曲线扩增曲线融解曲线扩增曲线融解曲线万方数据三峡大学硕士学位论文表与水平的相对值，空白组组注与空白对照组相比图检测处理后与的表达的柱形图与空白对照组相比检测蛋白的表达情况常规培养稳定表达受体的单核细胞，当细胞处于对数生长期时，给予的作用的与的共同处理的与的共同处理后收集细胞，提取蛋白，用法测定蛋白浓度，制备凝胶，根据蛋白浓度调整上样量后进行电泳，转膜，分别在相应的条带处加入蛋白的抗孵育，加辣根过氧。
5、于医学类Ⅳ万方数据三峡大学硕士学位论文英文缩略词表英文缩写中文全称英文全称英文全称三磷酸腺苷磷酸盐缓冲液细胞培养基膜硝酸纤维素膜十二烷基磺酸钠白细胞介素甲基噻唑基四唑蓝二甲基亚砜光密度值流式细胞术组织蛋白酶蛋白质免疫印迹实时定量万方数据三峡大学硕士学位论文引言嘌呤受体家族成员受体是控制的胞膜受定量的制好的蛋白样本总蛋白，根据蛋白浓度计算上样体积和蛋白电泳标准品用微量加样枪或注射器迅速加入上样孔中，如果没有足够数目的样本，可以用代替样本与上样缓冲液混匀后加入剩余孔中。电泳。电压，时间左右，电泳至分离胶时改电压为，直至溴酚蓝到达电泳槽底部。切胶。取下凝胶板，将内槽玻璃板轻轻撬。
6、照组。用受体的拮抗剂和共同处理细胞后，受体及蛋白的表达较组均显著下降，有统计学意义。用的拮抗剂和共同处理细胞后，及及蛋白的表达较组均显著下降，有统计学意义，及蛋白的表达与组相比无显著差异。结论在的刺激下，受体的表达均明显升高，的活化引起的表达上调，而抑制的表达导致的表达减少，说明受体对炎症小体的表达有影响抑制的表达会导致的表达受到抑制，而对受体的表达几乎无影响，说明对的表达有影响。本研究结果提示受体可能是通过影响的表达实现对炎症小体表达的调控，进而调节炎症反应，受体和可能在炎症反应中扮演重要角色，可为临床炎症反应的预防与治疗提供靶点。关键词受体Ⅱ万方数据三峡大学硕士学位论。
7、将膜正面朝上并在膜右上角剪个小角，作为标记，浸泡在中。用封闭液即脱脂牛奶室温摇床封闭。万方数据三峡大学硕士学位论文抗孵育。封闭液加抗，摇床震荡过夜。二抗孵育。次日用分别洗膜次，每次。羊抗兔用按照倍稀释，室温摇床孵育。再用分别洗膜次，每次。显影。取显色剂液各加入离心管中充分混匀。将膜的背面吸水纸轻轻的吸干，将膜平放在显影仪的托盘中，正面朝上，接触面上尽量不要有气泡。用加样枪加混合液于膜上，曝光显影，保存图像，记录结果。流式细胞术检测膜蛋白细胞收集将单核细胞以个浓度接种，置于的细胞培养箱中培养夜。收集细胞于离心管中洗遍，室温下离心。孵育抗山羊抗人抗体用稀释倍，每管，下放置使抗。
8、诺而引起的切法津和经济后果。学位论文作者签名日期Ⅰ万方数据三峡大学硕士学位论文内容摘要目的检测三磷酸腺苷及受体拮抗剂组织蛋白酶拮抗剂处理人单核细胞后受体组织蛋白酶与的表达，探讨受体及的相互关系以及受体影响表达的可能机制。方法常规培养单核细胞，法检测不同浓度处理后细胞的生长情况，选择模拟炎症状态下细胞反应的最适浓度。分别用单独处理细胞，受体拮抗剂或拮抗剂和共同处理单核细胞，用实时定量流式细胞术蛋白印迹法分别检测受体基因和蛋白表达的变化，探讨受体影响表达的可能机制。结果作用于细胞后，细胞的生长受到抑制，模拟炎症状态下细胞反应的最适浓度为。用处理后，及蛋白的表达均明显高于空白对。
9、开，按照上相应的蛋白大小切下需要的凝胶部分，浸泡在转膜液中。转膜。剪取张与凝胶大小相似的纤维素膜膜，浸泡在转膜液中。然后按照下列顺序铺电转移物品，夹子黑色面铺单层海绵，两张如凝胶大小也可如海绵大小的滤纸，凝胶，膜，两张如凝胶大小也可如海绵大小的滤纸，单层海绵。注意每层物品铺之前都先要用转膜液，铺完后再用转膜液充分浸透，不要留下气泡，否则会留下空斑。将转移装置放入电转移槽中，盖上盖子，注意凝胶面位于负极，膜位于正极即夹子的黑面与槽的黑面相对，电泳槽中加入升电转移液，另边放冰块降温，将电转移槽放入装有冰块的容器中利于散热。设置电压，电流，后开盖取出夹子。封闭。转膜时间结束后，。
10、板中加细胞悬液，放在，培养箱中静止，然后加入不同浓度的作用后，用显微镜观察发现其形态发生明显变化见图。作用前细胞圆形，轮廓清晰，单个散在分布作用后细胞肿胀，轮廓开始模糊不清，胞核易见，发生聚集，部分细胞漂浮在培养基中。不同浓度的刺激后，通过法检测发现，可抑制单核细胞的生长，并具有浓度依赖性，当作用细胞时，细胞的抑制率为，直到浓度达到，细胞的抑制率高达，有统计学意义，与空白组相比。前期研究发现会导致单核细胞活力发生明显变化，炎症因子的大量释放，故选择的最适浓度为结果见表及图。图作用前后细胞的形态变化，左边为正常的细胞，右边为作用后的细胞表法检测不同浓度对单核细胞生长的影响，。
11、原抗体充分孵育。洗遍，离心。孵育二抗兔抗山羊抗体用稀释倍，每管，避光孵育。洗遍，离心。上机检测将细胞浓度调整为个，用流式细胞仪进行检测。检测胞浆蛋白细胞收集将单核细胞以个的浓度接种于六孔板中，置于的细胞培养箱中过夜。收集细胞，用洗遍，离心。固定弃上清，每管加入多聚甲醛，室温下放置，然后用洗遍，离心。打孔弃上清，每管加入，室温放置，洗遍，离心。孵育抗兔抗人抗体用稀释倍，每管，放置使抗原抗体充分孵育。洗遍，离心。孵育二抗羊抗兔抗体用稀释倍，每管，避光放置使二抗与抗充分结合。洗遍，离心。上机检测将细胞浓度调整为个，用流式细胞仪进行检测。检测胞浆蛋白细胞收集将单核细胞以个的浓度接。
12、其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名日期三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承。
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