液值，分别加热至,再混合。冷却至室温,调值为,用酸度计监测。离心,弃上清液,得到粗品酪蛋白。水洗三次,每次离心,弃上清液。用无水乙醇洗沉淀次,抽滤再用乙醇乙醚洗两次,分别抽滤然后用乙醚洗两次,分别抽滤。烘干沉淀物至恒重,用感量为的扭力天平称量所得纯品酪蛋白。张芳等研究了不同温度值及搅拌强度对牛乳中酪蛋白得率的影响。试验结果表明，温度控制在时，酪蛋白得率最高为时酪蛋白分离效果最好边滴加酸边缓慢搅拌酪蛋白得率较高。综上所述，不难看出，在我国现阶段下，等电沉淀法是适合我国国情的种酪蛋白定量检测方法，其所用仪器简单，主要包括离心机，恒温水浴锅，酸度计,布氏漏斗,真空抽滤机，电热干燥箱,电子天平等，这些条件是每个通过认证的乳制品企业已基本具备的实验室条件，其检验方法容易推广。实验材料与方法实验器材实验材料奶粉全脂速溶奶粉，由陕西省泾阳县岁平乳业有限责任公司提供明胶市售试验试剂蛋白含量的测定硫酸铜硫酸钾硫酸硼酸混合指示剂份甲基红乙醇五份溴甲酚绿乙醇氢氧化钠溶液硫酸标准溶液酪蛋白含量的分离为的醋酸醋酸钠缓冲液,乙醇乙醚混合液体积比为∶,盐酸,氢氧化钠,无水乙醇,无水乙醚。试验仪器调温多功能水浴锅型数字酸度计型电子天平精确度分析天平精确度小霸王搅拌机抽滤装置离心机酪蛋白百分含量测定方法的研究烧杯量筒玻璃棒电炉水蒸气发生器螺旋夹小漏斗反应室冷凝管蒸馏接收瓶铁架台型离心机型真空抽滤机布氏漏斗三角瓶温度计滤纸等。试验内容及方法要检测的内容本试验的检测内容主要包括了，总固形物奶粉或者是奶粉和明教的混合物中总蛋白质的含量酪蛋白的含量，再计算出酪蛋白占总蛋白的含量，据此数据分析和区别出试验的样中是否加入了明胶，并初步确定奶粉中加入明胶的量是多少。在试验当中要确定分离酪蛋白的最佳工艺条件。实验条件的确定分离的值确定随着溶液,值增大，酪蛋白得率呈上升趋势,值时酪蛋白得率较高，值大于时得率降低。在之间酪蛋白凝聚颗粒随增大而增大，这与酪蛋白胶粒所带的电荷数目有关，酪蛋白在等电点时即整个蛋白质分子呈电中性，静电斥力最小，酪蛋白胶粒之间容易结合成块。当溶液,值为以下或以上时，偏离它的等电点，酪蛋白胶粒变成带正或负电荷的憎或亲水胶体，静电斥力增大不易结合成块，酪蛋白得率下降。又由附录Ⅰ查得酪蛋白的平均等电点为，而明胶等电点为。所以应该定在附近。同样由附录Ⅰ可知各种蛋白质的等电点有不同，并且最大的干扰使乳球蛋白含量为。所以分离时候定在。搅拌强度的确定在不搅拌或搅拌剧烈时，酪蛋白得率较低，边滴加酸边缓慢搅拌时，酪蛋白得率高。边滴加酸边缓慢搅拌，加入脱脂牛乳中的酸可以均匀分布，有利于酪蛋白与酸充分接触，酪蛋白沉淀比较完全得率较高。不搅拌时酪蛋白与酸接触不充分，溶液中有酸度梯度存在，上层与酸接触沉淀形成结块，下层未与酸接触酪蛋白不能完全沉淀而影响得率。搅拌过于剧烈时会使形成的酪蛋白凝块破碎不易分离，得率下降。所以选用缓慢搅拌。分离温度的确定随着温度的升高酪蛋白得率也随之增加，当温度超过温度时，酪蛋白得率反而下降，温度在此时，酪蛋白得率最高，这与等的分析致。通过分析认为，酪蛋白在牛乳中以酪蛋白磷酸钙的形式存在，随着温度的升高，酪蛋白胶囊之间热碰撞频率增加，酪蛋白容易相互结合成块，但温度超过此温度的时候，蛋白质的次级结构遭破坏，静电斥力增加，使酪蛋白结合变得困难而不易结块，导致酪蛋白得率下降。所以确定了分离温度为此温度。试验方法的确定蛋白质的含量的测定总蛋白的测定方法由甲法测定得到总蛋白含量，这也是是现阶段检测单位同意的较为准确的方法。由于其采用常规的凯氏定氮法，测定的总蛋白含量比较精确可靠。蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后在以硫酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋品数据手册北京中国食品出版社，张芳,李红旭影响牛乳酪蛋白分离因素的研究保鲜与加工,陈忠平牛奶中酪蛋白和乳糖的分离安徽技术师范学院学报,程涛,孙艳波,李健双缩脲法测定乳中酪蛋白含量中国乳品工业,张东送,庞广昌,高法国,张涛等毛细管电泳在牛乳中酪蛋白含量测定及掺假检测方面的应用食品与发酵工业,张涛,庞广昌酶联免疫法快速测定原料乳中酪蛋白质量浓度中国乳品工业,凌关庭，唐述潮，陶民强主编食品添加剂手册第三版北京。化学出版社，温度和值对酪蛋白的影响中国乳品工业，张和平乳中酪蛋白胶粒的扩散双电层理论及稳定性内蒙古农牧学院学报，,郭本恒乳品化学北京中国轻工业出版社附录附录Ⅰ牛乳蛋白质的命名及性质名称脱脂乳蛋白质中的百分比电泳的峰电泳的迁移率等电点沉降常数分子量酪蛋白酪蛋白，κ酪蛋白，酪蛋白，酪蛋白，乳清蛋白质乳百蛋白，乳球蛋白，血乳清蛋白，免疫球蛋白，免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白胨酪蛋白百分含量测定方法的研究附录Ⅱ牛乳中蛋白百分含量计算公式推导样品中奶粉含有的蛋白量附Ⅱ式中样品中奶粉含有的蛋白质含量消耗的硫酸标液的体积空白消耗的硫酸体积奶粉占总的质量百分含量硫酸标液的摩尔浓度硫酸标液相当的氮的克数奶粉中氮换算成蛋白质的系数样品的质量样品中明胶含有的蛋白量附Ⅱ式中样品中明胶含有的蛋白质含量消耗的硫酸标液的体积空白消耗的硫酸体积明胶占总的质量百分含量硫酸标液的摩尔浓度硫酸标液相当的氮的克数明胶中氮换算成蛋白质的系数样品的质量蛋白质含量附Ⅱ式中样品含有的蛋白质含量样品中奶粉含有的蛋白质含量样品中明胶含有的蛋白质含量白质的含量。凯氏定氮法的定氮原理是将生物样品放在凯氏烧瓶中或中试管与硫酸共热进行消化,并加入硫酸钾以升高沸点,以硫酸铜为催化剂,样品中的碳,氢元素全部氧化为二氧化碳和水水蒸气挥发掉,有机氮转变为氨并与硫酸结合生成硫酸铵然后加浓碱,加热蒸馏,硫酸铵分解放出氨,挥必性氨由硼酸接受形成硼酸铵,最后用标准酸滴定之根据标准酸的消耗量,计算出蛋白质的量消化蛋白质蒸馏↑吸收滴定滴定指示剂是用按定比例配成的甲基红溴甲酚绿混合指示剂甲基红在之间变色,由红变为黄,终点为橙色,溴甲酚绿在之间变色,由黄变蓝,终点为绿色当二种指示剂按适当比例混合时,在以上呈绿色,在以下为橙红色,在时因互补色关系呈紫灰色,因此滴定终点十分明显,易于掌握酪蛋白含量的测定按照等电点沉淀法测定乳品中的酪蛋白含量等电点分离的原理等电点现象是蛋白质氨基酸的特点之。以蛋白质来说,蛋白质由多个氨基酸分子以肽键连接而成,其开链两端有酸性自由羧基和碱性自由氨基,分子中的离解基如未结合的氨基或羧基羟基胍基咪唑基等也很多,所以具酪蛋白百分含量测定方法的研究有两性离解性质,其离解情况复杂,总离解可用下式表示其中代表蛋白质正离子两性离子等电点负离子因此,在不同溶液中可为正离子负离子或两性离子净电荷为零。当蛋白质分子净电荷为零时,在电场中既不向阳极也不向阴极移动,这时的值称为等电点。蛋白质在等电点时,溶解度最小,利用此原理便可以分离酪蛋白。检测步骤温度的取定总蛋白的测定加入明胶奶粉总蛋白测定加入明胶奶粉总蛋白测定奶粉按国家标准中的规定执行蛋白测定加入明胶奶粉总蛋白测定加入明胶奶粉总蛋白测定酪蛋白的测定加入明胶奶粉加入明胶奶粉温纯净水溶解混合定容分离酪蛋白烘干加入明胶奶粉加入明胶奶粉称重实验分析主要操作步骤说明分离温度的取定取脱脂乳，分别加热至后，滴加乙酸溶液，边滴加边搅拌，使溶液值达到，酪蛋白沉淀，分离酪蛋白，将酪蛋白烘干称重测得最佳得率取此时的温度。国家标准中的蛋白测定方法步骤样品消化分别称量奶粉于干燥的用记号笔编号为的凯氏瓶中，并依次加入明胶。再分别都加入硫酸需要全文请联系致谢本实验是在咸阳食品技术监督局完成的，实验期间受到局里的许多工作人员的帮助特此感谢局里的所有工作人员。并在此要特别感谢王小勇王科长，正是您对本实验的支持和些特别重要的指导才使得实验得以顺利完成还要感谢王学姐的热心帮助和操作上的辅助。对于您们毫无保留的帮助我再次表示感谢。本实验也是导师李宏梁老师指导的，在实验中老师不厌其烦的给我耐心讲解，更有对我实习生活的帮助，正是老师提供的条件使得我学的更多，不仅是学习上的，更有做人方面的。为我以后的工作提供了可贵的建议。正是老师的帮助，使得我的实验完成之余还学到了很多可贵的经验。谢谢老师的教导，谢谢老师的帮助。最后，要特别感谢王敏同学在我生活上的帮助。感谢所有教导我知识的老师们，和我起生活的同学们。谢谢你们,酪蛋白百分含量测定方法的研究参考文献夏文水食品中乳蛋白的重要作用无锡食品与生物技术学报第卷第期李晓晖牛乳中酪蛋白的结构特性及其应用上海食品工业年第期陕西省质量技术监督局关于开展全省乳制品生产加工企业专项集中整顿的通知内部文件年月日邵锦震,易理清等电沉淀分离酪蛋白方法的探讨兼对黄石市场鲜牛奶质量分析湖北师范学院学报自然科学版，著，张慜等译食品工业手册第二十四版北京中国轻工业出版社，著，王璋，钟芳等译食品科学第五版北京中国轻工业出版社，荷主编，任发政，韩北忠，罗永康，陈历俊主译现代乳品加工与质量控制北京中国农业大学出版社杨丹毅,林志斌,罗玉玮酪蛋白等电点沉淀法快速鉴别奶粉和乳清粉珠海检验检疫科学,俋文盛主编常用中仅测定总蛋白质的含量，不