1、反应总体积进行适当调整。反应循环参数检测转基因棉花内外源基因的反应循环参数见表,表检测转基因棉花内外源基因的反应循环参数被扩增的内外源基因变性扩增条件循环次数最终延伸,,上样缓冲液含。澳酚蓝,甲苯青,甘油水溶液。中华人民共和国出入境检验检疫行业标准棉花中转基因成分定性检测方法发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局仇前言本标准的附录为资料性附录本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归棉花中。

2、郑文杰刘垣唐丹舟杨绍勇何霖本标准系首次发布的检验检疫行业标准。棉花中转基因成分定性检测方法范围本标准规定了抗鳞翅目昆虫棉花中转基因成分的定性检测方法。本标准适用于抗鳞翅目昆虫棉花,晋棉号保铃棉中转基因成分的定性检测。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准棉花中转基因成分定性检测方法.,苏云金芽抱杆菌杀虫毒蛋白的合成基因。,爵葡萄搪昔酸酶基因。,核糖体基因。,加水定容至,分装后高压灭菌备用。缓冲液。

3、阴性对照和空白对照未出现条带,阳性对照和待测样品均出现预期大小的扩增条带扩增片段大小见表,则可初步判定待测样品中含有可疑的该外源基因,应进步进行确证试验,依据确证试验的结果最终报告如果待测样品中未出现扩增产物,则可判断待测样品中不含有该外源基因。注基因分别来派于花椰菜花叶病毒农杆菌,如果样品被这些病毒和细菌感染,有可能使检侧结果出现假阳性。义引物模板加水至注反应体系中各试剂的量可根据具体情况或不同。

4、的判断用针对真核生物内源基因基因设计的引物的反应体系见表。每个反应体系应设置两个平行反应。表检测转基因棉花内外源蓦因的反应体系次序组分反应体系。加样体积,加样体积缓冲液抓化镁酶正义引物反义引物模板加水至注反应体系中各试剂的量可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。反应循环参数检测转基因棉花内外源基因的反应循环参数见表,表检测。本标准起草单位中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人。

5、液称取,抓化钠,加水溶解定容至,分装后高压灭菌备用。抓化钠溶液称取抓化钠,加水溶解定容至,分装后高压灭菌备用饱和酚。乙醇。缓冲液,量取和中华人民共和国出入境检验检疫行业标准棉花中转基因成分定性检测方法发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局仇前言本标准的附录为资料性附录本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位中华人民共和国天津出人境检验花样品提取液进行外源基因的测试,如果。

6、基因成分定性检测方法。抽提缓冲液量取盐酸称取十烷基甲基澳化胺,氯化钠,聚乙烯毗咯烷酮,加水溶解至,分装后高压灭菌备用。沉淀液称取,抓化钠,加水溶解定容至,分装后高压灭菌备用。抓化钠溶液称取抓化钠,加水溶解定容至,分装后高压灭菌备用饱和酚。乙醇。缓冲液,量取和,苏云金芽抱杆菌杀虫毒蛋白的合成基因。,爵葡萄搪昔酸酶基因。,核糖体基因。生热栖菌。,羚甲基氨基甲烷。,缓冲液,花椰菜花叶病毒启动子,新霉素,。

7、抓化钾抓化镁,明胶。氯化镁,含酶,分子量标记物,。缓冲液称取,冰乙酸溶于水中,定容至。分装后高压灭菌备用。,苏云金芽抱杆菌杀虫毒蛋白。和的合成基因装后高压灭菌备用。沉淀液称取,抓化钠,加水溶解定容至,分装后高压灭菌备用。抓化钠溶液称取抓化钠,加水溶解定容至,分装后高压灭菌备用饱和酚。分析系统。微波炉。微量加样器,天平感量,高压灭菌锅反应管,两种规格。离心管,两种规格。改良法磨碎的样品转人的离心管中。

8、源基因。注基因分别来派于花椰菜花叶病毒农杆菌,如果样品被这些病毒和细菌感染,有可能使检侧结果出现假阳性。转基因检测应检测目的基因以排除假阳性的可能确证试验确证试验方法按照中规定的方法执行。结果表述。附录资料性附录转基因棉花转入的外源鑫因的有关信息表转苍因棉花转入的外茸甚因转基注反应循环参数可根据不同的基因扩增仪进行适当调整。扩增产物的甩冰祖刚分析用电泳缓冲液或制备琼脂糖凝胶时加人左右加人澳化乙锭至。

9、件,其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。乙醇。缓冲液,量取和,加水定容至,分装后高压灭菌备用。缓冲液含抓化钾抓化镁,明胶。氯化镁,含棉花中转基因成分定性检测方法。抽提缓冲液量取盐酸称取十烷基甲基澳化胺,氯化钠,聚乙烯毗咯烷酮,加水溶解至,分装后高压灭菌备用。沉。

10、移动位置来确定,电泳检测结果用凝胶成像分析系统记录并保存。结果分析与判定提取液是否适合扩增的判断用针对真核生物内源基因基因设计的引物对棉花提取液进行测试,阴性对照阳性对照和待测样品都应被扩增出的产物。如未见有扩增产物,则说明提取液质量有问题,或提取液中有抑制反应的因子存在,应重新提取,直到扩增出的产物。对行确证试验,依据确证试验的结果最终报告如果待测样品中未出现扩增产物,则可判断待测样品中不含有该。

11、浓度为,也可在电泳后进行染色取扩增产物,加上样缓冲液上样。电泳时,扩增产物按上述上样量上样,并在每行胶孔中选个胶孔,在其中加分子量标记物混合液以判断扩增产物片段的大小。电压大小般控制在,电泳时间根棉花中转基因成分定性检测方法。抽提缓冲液量取盐酸称取十烷基甲基澳化胺,氯化钠,聚乙烯毗咯烷酮,加水溶解至,分装后高压灭菌备用。沉淀液称取,抓化钠,加水溶解定容至,分装后高压灭菌备用。抓化钠溶液称取抓化钠,。

12、酸转移酶基因,胭脂碱合成酶基因终止子。棉花中转基因成分定性检测方法.基因检测应检测目的基因以排除假阳性的可能确证试验确证试验方法按照中规定的方法执行。结果表述。附录资料性附录转基因棉花转入的外源鑫因的有关信息表转苍因棉花转入的外茸甚因转基因棉具有抗麟翅目昆虫的抗性卜犷,中国农科院具有抗纳翅目昆虫的抗性,苏云金芽抱杆菌杀虫毒蛋白的合成基因。,爵葡萄搪昔酸酶基因。,核糖体基因。据扩增片段长度及澳酚蓝的。

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