1、本表采用个稀释度和,每个稀释度接种管。表内所列检样量如改用和时,表内数字应相应降低倍如改用和时,则表内数字应相应增高倍,其余类推若所有稀释度的平板上典型菌落数均不在适宜计数范围内,且无确证的肠杆菌科菌落,则以小于乘以最低稀释倍数计算。结果的度∶第稀释度典型菌落数用于确认试验的菌落数确证的菌落数上述数据按数字修约后,表示为或。两个连续稀释度均含适宜典型菌落数平板,但无已确证的肠杆菌科菌落,则以小于乘以最低稀释倍数计算。第稀释度平板上的菌落数超过,且有证实的肠杆菌科菌落,以及第稀释度平板上无确证的肠杆菌科菌落或典型菌落数不在附录结果计算示例两个连续稀释度均含适宜的典型菌落数平板,并含有已确证的肠杆菌科菌落,数据见表。表肠杆菌科平板计数结果示例稀释度∶。

2、,分装于灭菌的饲料中肠杆菌科检验送审稿.为。最可能数基于泊松分布的种间接计数方法。试剂或材料缓冲蛋白胨水见附录。缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤肉汤见附录。结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂见附录。营养琼脂见附录。葡萄糖琼脂见附录。革兰氏染色液见附录。氧化酶试剂见附录。仪器设备恒温培养箱。饲料中肠杆菌科检验送审稿可存放两周。营养琼脂成分牛肉浸膏蛋白胨琼脂粉蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸,时调节至,高压灭菌。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板于可存放两周。葡萄糖琼脂成分胰蛋白胨酵母浸膏葡萄糖氯化钠溴甲酚紫或溴甲酚紫酒精溶液琼脂粉蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸,时调或紫色菌落。选取典型菌落数在之间无蔓延菌落生长的平板,只计数典型菌落数。菌落计数以菌落形成单位,表示。其中个平板有较大片。

3、杆菌科的值。称重取样以为单位报告,体积取样以为单位报告。附录规范性附录培养基和试剂缓冲蛋饲料中肠杆菌科检验送审稿.可存放两周。营养琼脂成分牛肉浸膏蛋白胨琼脂粉蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸,时调节至,高压灭菌。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板于可存放两周。葡萄糖琼脂成分胰蛋白胨酵母浸膏葡萄糖氯化钠溴甲酚紫或溴甲酚紫酒精溶液琼脂粉蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸,时调告菌落数小于时,以整数报告。菌落数大于或等于时,对第位数字进行修约后,取前位数字,后面用代替位数也可用的指数形式来表示,采用两位有效数字。数字修约按舍入原则进行。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓培养。分离用接种环从各肉汤管分别取培养物环,划线接种于置信区间阳性管数置信区间下限上限下限上限。

4、。若所有稀释度的平板上典型菌落数均不在适宜计数范围内,且无确证的肠杆菌科菌落,则以小于乘以最低稀释倍数计算。结果的报告菌落数小于时,以整数报告。菌落数大可存放两周。营养琼脂成分牛肉浸膏蛋白胨琼脂粉蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸,时调节至,高压灭菌。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板于可存放两周。葡萄糖琼脂成分胰蛋白胨酵母浸膏葡萄糖氯化钠溴甲酚紫或溴甲酚紫酒精溶液琼脂粉蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸,时调白胨水成分蛋白胨氯化钠磷酸氢钠磷酸氢钾蒸馏水制法将成分加热溶解,于时调节至,分装于广口瓶中,每瓶,高压灭菌。缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤肉汤成分蛋白胨葡萄糖磷酸氢钠无水磷酸氢钾牛胆盐煌绿蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸至完全溶解,加热不宜超过,迅速冷却培养基,于调节至。

5、。结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂成分蛋白胨酵母浸膏号胆盐葡萄糖氯化钠中性红或酒精溶液结晶紫或水溶液制法将成分溶于水中,加热煮沸至完全溶解,时调节至,分装于灭菌的锥形烧瓶中,不需高压灭菌,用前制备。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板平板,培养,观察平板上有无典型菌落。典型菌落确认典型菌落确认见。结果的报告只要有个菌落确认为肠杆菌科,其所代表的管即为肠杆菌科阳性,依据阳性管数查表见附录,报告每克毫升样品中肠杆菌科的值。称重取样以为单位报告,体积取样以为单位报告。附录规范性附录培养基和试剂缓冲蛋白胨水接种于平板,培养,观察平板上有无典型菌落。典型菌落确认典型菌落确认见。结果的报告只要有个菌落确认为肠杆菌科,其所代表的管即为肠杆菌科阳性,依据阳性管数查表见附录,报告每克毫升样品中肠。

6、稀释度∶第稀释度典型菌落数用于确认试验的菌落数确证的菌落数上述数据按数字修约后,表示为或。两个连续稀释度均含适宜典型菌落数平板,其中稀释度的个平板菌落数不在适宜范围内,或者两个稀释度各有个平板菌落饲料中肠杆菌科检验送审稿.可存放两周。营养琼脂成分牛肉浸膏蛋白胨琼脂粉蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸,时调节至,高压灭菌。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板于可存放两周。葡萄糖琼脂成分胰蛋白胨酵母浸膏葡萄糖氯化钠溴甲酚紫或溴甲酚紫酒精溶液琼脂粉蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸,时调于或等于时,对第位数字进行修约后,取前位数字,后面用代替位数也可用的指数形式来表示,采用两位有效数字。数字修约按舍入原则进行。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告。

7、菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数若片状菌落不到平板的半,而其余半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以,代表个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状计数法检验程序法试验方法样品的处理和制备按进行。接种和培养非选择性前增菌根据预估样品的污染情况及相关限量要求,选择适宜的个连续稀释度的样品匀液,每个稀释度管,共管于培养。选择性增菌从各稀释度培养管中,分别移取培养物,接种于肉汤中,培养。分离用接种环从各肉汤管分别取培养物环,划线验送审稿。将冷却至的可放置于恒温水浴箱中保温倾注于每个平皿中。小心旋转平皿,使样品匀液与培养基充分混匀。待琼脂凝固后,再向其中倾注约薄层的培养基覆盖平板表层,以防止蔓延生长并使菌落特征更为明显。待培养皿中的。

8、无菌锥形瓶或等效容器。选择性增菌从各稀释度培养管中,分别移取培养物,接种于肉汤中,培养。分离用接种环从各肉汤管分别取培养物环,划线接种于生长时,则将每条单链作为个菌落计数。从每个平板上至少挑取个小于个全选典型菌落进行确认如果有不同形态的典型菌落,则每种形态分别至少挑取个菌落进行确认。典型菌落的确认分别将所挑选的每个菌落,划线于营养琼脂平板,培养,挑取平板上的菌落进行革兰氏染色镜检氧化酶试验及葡萄糖发酵试验。革兰氏染色镜检肠杆菌科为革兰氏阴性杆菌,无芽胞,大小菌锥形瓶或等效容器。最可能数基于泊松分布的种间接计数方法。试剂或材料缓冲蛋白胨水见附录。缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤肉汤见附录。结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂见附录。营养琼脂见附录。葡萄糖琼脂见附录。革兰氏染色液见附录。氧化酶试剂。

9、培养基凝固后,翻转培养皿,置于培养。菌落计数和确认肠杆菌科典型菌落为有或无沉淀环的粉红色至红色,分装于试管,每管约,高压灭菌后,试管垂直放置。于可存放周。为去除培养基中的氧气,使用前可将葡萄糖琼脂试管置于沸水浴中,然后迅速冷却,备用。若所有稀释度的平板上典型菌落数均不在适宜计数范围内,且无确证的肠杆菌科菌落,则以小于乘以最低稀释倍数计算。结果的报告菌落数小于时,以整数报告。菌落数大节至,分装于试管,每管约,高压灭菌后,试管垂直放置。于可存放周。为去除培养基中的氧气,使用前可将葡萄糖琼脂试管置于沸水浴中,然后迅速冷却,备用。水浴箱。均质器次挤压秒。振荡器。电子天平感量。显微镜倍倍。无菌培养皿直径。无菌吸管刻度刻度或微量移液器及吸头。试管。无试管中,每管,不需高压灭菌,可存放个。

10、分蛋白胨氯化钠磷酸氢钠磷酸氢钾蒸馏水制法将成分加热溶解,于时调节至,分装于广口瓶中,每瓶,高压灭菌。缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤肉汤成分蛋白胨葡萄糖磷酸氢钠无水磷酸氢钾牛胆盐煌绿蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸至完全溶解,加热不宜超过,迅速冷却培养基,于调节至,分装于灭菌的试管中,分装于试管,每管约,高压灭菌后,试管垂直放置。于可存放周。为去除培养基中的氧气,使用前可将葡萄糖琼脂试管置于沸水浴中,然后迅速冷却,备用。若所有稀释度的平板上典型菌落数均不在适宜计数范围内,且无确证的肠杆菌科菌落,则以小于乘以最低稀释倍数计算。结果的报告菌落数小于时,以整数报告。菌落数大水浴箱。均质器次挤压秒。振荡器。电子天平感量。显微镜倍倍。无菌培养皿直径。无菌吸管刻度刻度或微量移液器及吸头。试管。。

11、附录。仪器设备恒温培养箱。饲料中肠杆菌科按进行。接种和培养非选择性前增菌根据预估样品的污染情况及相关限量要求,选择适宜的个连续稀释度的样品匀液,每个稀释度管,共管于培养。饲料中肠杆菌科检验送审稿。试验方法用细玻璃棒或次性接种针挑去单个菌落,涂布在氧化酶试剂湿润的滤纸上。在内呈现粉红或紫红色,即为氧化酶试验阳性。不变色者为氧化酶试验阴性。附录资料性,分装于试管,每管约,高压灭菌后,试管垂直放置。于可存放周。为去除培养基中的氧气,使用前可将葡萄糖琼脂试管置于沸水浴中,然后迅速冷却,备用法行政。健全和完善财政国库集中收付制度,进步规范财政直接支付和授权支付,加强肃性。坚决制止擅自出台税收优惠政策和变相优惠政策的行为是严厉打击偷税骗税等各种涉税违法犯罪行为,做到依法征税,应收尽收,。

12、菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。计数法检验程序第法肠杆菌科计数法检验程序见图。图肠杆菌科计数法检验程序法试验方法样品的处理和制备试管中,每管,不需高压灭菌,可存放个月。结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂成分蛋白胨酵母浸膏号胆盐葡萄糖氯化钠中性红或酒精溶液结晶紫或水溶液制法将成分溶于水中,加热煮沸至完全溶解,时调节至,分装于灭菌的锥形烧瓶中,不需高压灭菌,用前制备。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板两周。营养琼脂成分牛肉浸膏蛋白胨琼脂粉蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸,时调节至,高压灭菌。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板于可存放两周。葡萄糖琼脂成分胰蛋白胨酵母浸膏葡萄糖氯化钠溴甲酚紫或溴甲酚紫酒精溶液琼脂粉蒸馏水制法将成分溶于水中,加热煮沸,时调节至。

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