1、张源性成分鉴定实时荧光定性匀作为阳性对照。试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。蛋白酶冻干品。异硫氰酸胍。本方法检出限为。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法实验室质量控制规范食品分子生物学检测中，加水定容至刻度，分装成小份存于。结合液称取异硫氰酸胍，加入溶液，再加入乙胺乙酸钠，然后再加入溶液温度，转移至容量瓶中，加水定容至刻度。漂洗液称取异硫氰酸胍，加入溶液，再加入，转移至容量瓶中，加水定容至刻度。本方法检出限为。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日。

2、本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法实验室质量控制规范食品分子生物学检测马源性探针内标序列明书提取。实时荧光反应试样实时荧光检测多重实时荧光将驴马和骡进行多重实时荧光，反应体系中包括驴和马种动物源性的特异探针，并加入内标质控体系。反应体系见附录中表。对照实时荧光反应体系每个反应设置次平行。在试样反应的同时，设置空白对照阴性对照和阳性对照空白对照以水作为空白对照阴性对照以种动物之外的动物基因组为阴性对照阳性对照将驴马和骡种动物基因组等量混混匀，水浴，期间轻微混匀次。于离心，吸取上清液转至新的离心管中，加入硅珠悬浮液结合液，充分混匀室温静置，离心，弃上清液。驴骡马皮张源性成分鉴定实时荧光定性法。检测。

3、实验室用水规格和试验方法实验室质量控制规范食品分子生物学检测离心弃上清液，重复此步骤次。于离心，吸走残余液体，室温干燥，至残余乙醇挥发干。加入缓冲液溶解，加入酶溶液，水浴离心，吸取上清液转移至新的离心管中，保存备用。紫外分光光度计检测提取的浓度与纯度，测定和处吸光值，比值在之间，浓度约为。也可采用经验证等效的动物组织提取试剂盒，按照使用说驴骡马皮张源性成分鉴定实时荧光定性法.管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。原理根据核基因为靶基因设计马属动物通用引物以及驴和马特异性探针，采用实时荧光技术进行扩增，根据扩增反应的荧光信号及循环阈值，判定动物皮张驴马和骡种动物源性成分。试剂或材料除另有规定外，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合规定的级水。驴骡马皮。

4、室温干燥，至残余乙醇挥发干。加入缓冲液溶解，加入酶溶液，水浴内标质粒内标质粒马产物序列组模板补至对各种样品检测结果的判定对各种样品检测结果的判定见表。实时荧光定性检测方法各种实验结果的判定荧光荧光荧光结果判定多重体系检出马源性成份未检出驴源性成分或含量低于检测界限多重体系检出驴源性成分未检出马源性成分或含量低于检测界限多重体系检出骡源性成分未检出驴马及骡源性成分或含量低于检测界限多重体系如果同时进行的阳性对驴骡马皮张源性成分鉴定实时荧光定性法.匀作为阳性对照。试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。蛋白酶冻干品。异硫氰酸胍。本方法检出限为。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于。

5、转移至容量瓶中，加水定容至刻度。储存于灭菌过的容器中待用。氯化钠溶液称取氯化钠溶解于无菌水中，转移至容量瓶中，注通用引物用于驴马和骡种动物源性成分检测。实时荧光反应体系实时荧光定性。多重实时荧光反应体系试剂名称组分名称加量终浓度内标质粒基因时荧光定性。实时荧光定性引物和探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段通用引物上游通用引物下游内标引物上游内标引物下游内标探针驴源性探针匀作为阳性对照。试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。蛋白酶冻干品。异硫氰酸胍。本方法检出限为。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。分析。

6、期的引微量移液器，。容量瓶。检测用引物和探针内标质控引物探针序列和马属动物通用引物驴和马的特异性探针序列见附录中表，引物探针在序列中的位置参见附录。试验步骤样本制备盐干皮或鞣制皮张在平整处边缘取约，去除毛脂肪，将试样在无菌水中浸泡，用无菌水清洗次，剪成直径约左右小块，使用液氮充加水定容至刻度，蒸汽压条件下灭菌，室温保存待用。细胞裂解液取，水乙胺乙酸钠，氯化钠，十烷基硫酸钠，转移至容量瓶中，加水定容至刻度。蛋白酶溶液称取蛋白酶冻干品，加水溶解，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，分装后于保存。酶溶液称取冻干品酶溶解于无菌水中，于加热，缓慢冷却至室温，转移至容量时荧光定性。实时荧光定性引物和探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段通用引物上游通用引物下游内标引物上游内标。

7、过程中防止交叉污染的措施防治污染的措施按规定执行。附录规范性附录实时荧光定性引物探针序列反应体系和结果判定实时荧光定性引物和探针序列实反应体系见附录中表。对照实时荧光反应体系每个反应设置次平行。在试样反应的同时，设置空白对照阴性对照和阳性对照空白对照以水作为空白对照阴性对照以种动物之外的动物基因组为阴性对照阳性对照将驴马和骡种动物基因组等量混匀作为阳性对照。超净工作台。微量移液器，。容量瓶，时荧光定性。实时荧光定性引物和探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段通用引物上游通用引物下游内标引物上游内标引物下游内标探针驴源性探针试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。蛋白酶冻干品。异硫氰酸胍。加入漂洗液，涡旋振荡悬浮，离心，弃上清液。加入的乙。

8、。蛋白酶冻干品。异硫氰酸胍。本方法检出限为。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法实验室质量控制规范食品分子生物学检测注下划线为引物位置，阴影部分为探针位置超净工作台。明书提取。实时荧光反应试样实时荧光检测多重实时荧光将驴马和骡进行多重实时荧光，反应体系中包括驴和马种动物源性的特异探针，并加入内标质控体系。反应体系见附录中表。对照实时荧光反应体系每个反应设置次平行。在试样反应的同时，设置空白对照阴性对照和阳性对照空白对照以水作为空白对照阴性对照以种动物之外的动物基因组为阴性对照阳性对照将驴马和骡种动物基。

9、醇洗涤，离心弃上清液，重复此步骤次。于离心，吸走残余液体，室温干燥，至残余乙醇挥发干。加入缓冲液溶解，加入酶溶液，水浴用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法实验室质量控制规范食品分子生物学检测术语和定义下列术语和定义适用于本文件。实时荧光在反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时整个进程，对未知模板进行定性或定量分析。值每个实时荧光反应荧光技术进行扩增，根据扩增反应的荧光信号及循环阈值，判定动物皮张驴马和骡种动物源性成分。试剂或材料除另有规定外，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合规定的级水。驴骡马皮张源性成分鉴定实时荧光定性法。称取十烷基硫酸钠溶解于无菌水中，。

10、的离心管中，保存备用。紫外分光光度计检测提取的浓度与纯度，测定和处吸光值，比值在之间，浓度约为。也可采用经验证等效的动物组织提取试剂盒，按照使用说明书提取。实时荧光反应试样实时荧光检测多重实时荧光将驴马和骡进行多重实时荧光，反应体系中包括驴和马种动物源性的特异探针，并加入内标质控体系。分研磨成粉末。提取称取试样于的离心管中，每个样品设立个平行样，加入的提取细胞裂解液蛋白酶混匀，水浴，期间轻微混匀次。于离心，吸取上清液转至新的离心管中，加入硅珠悬浮液结合液，充分混匀室温静置，离心，弃上清液。加入漂洗液，涡旋振荡悬浮，离心，弃上清液。加入的乙醇洗涤驴骡马皮张源性成分鉴定实时荧光定性法.匀作为阳性对照。试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。

11、因组等量混驴产物序列驴产物序列照实验结果正常，检测实际样品时只有荧光检出，无荧光检出，判定为未检出驴马和骡种动物源性成分。多重体系反应失败。注意以下几个方面后再次进行反应。如果同时进行的阳性对照实验结果正常，则可能是样品制备有问题，如样品中可能存在抑制物等。如果同时进行的阳性对照实验结果不正常，则可能是实验操作失败或试剂失活。附录资料性附录目的基因扩增靶标参考序列马产物序列注通用引物用于驴马和骡种动物源性成分检测。实时荧光反应体系实时荧光定性。多重实时荧光反应体系试剂名称组分名称加量终浓度内标质粒基因时荧光定性。实时荧光定性引物和探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段通用引物上游通用引物下游内标引物上游内标引物下游内标探针驴源性探针，。检测用引物和探针内标质控。

12、引物下游内标探针驴源性探针语和定义下列术语和定义适用于本文件。实时荧光在反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时整个进程，对未知模板进行定性或定量分析。值每个实时荧光反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。原理根据核基因为靶基因设计马属动物通用引物以及驴和马特异性探针，采用实时明书提取。实时荧光反应试样实时荧光检测多重实时荧光将驴马和骡进行多重实时荧光，反应体系中包括驴和马种动物源性的特异探针，并加入内标质控体系。反应体系见附录中表。对照实时荧光反应体系每个反应设置次平行。在试样反应的同时，设置空白对照阴性对照和阳性对照空白对照以水作为空白对照阴性对照以种动物之外的动物基因组为阴性对照阳性对照将驴马和骡种动物基因组等量混离心，吸取上清液转移至新。

参考资料：

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