1、“.....加缓冲液溶解，加入酶溶液，水浴离心，吸取上清液转移至新的离心管中，保存备用。紫外分光光度计检测提取的绵羊产物序列绵羊产物序列检出羊源性成分未检出羊源性成分或含量低于检测界限多重体系检出牛和羊源性成分未检出牛和羊源性成分或含量低于检测限多重体系如果同时进行的阳性对照实验结果正常，检测实际样品时只有荧光检出，无荧光检出，判定为未检出牛和羊源性成分。多重体系反应失败。注意以下几个方面后再次进行反应。如果同时进行的阳性对照实验结果正常，则可能是样品制备有问题，如样品中可能存在抑制物等。如果同时进行的阳性对照实验结羊奶中羊牛源性成分的定性检测方法实时荧光法.反应体系配制按照附录依次加入试剂，配制反应体系，混匀离心分装至反应管中，加入模板，离心，取出管，放入荧光定量仪中。实时荧光反应程序预变性变性，退火延伸，个循环。试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合规定的级水......”。

2、“.....浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。磷酸盐缓冲液羊源性探针牛源性探针内标探针实时荧光反应体系实时荧光定性。多重实时荧光反应体系试剂名称组分名称加量终浓度。实时荧光检测试样实时荧光检测多重实时荧光进行羊和牛源性成分多重实时荧光，反应体系中包含羊和牛个物种源性的特异探针，并加入内标质控体系。反应体系见附录中表。对照实时荧光反应体系每个反应设置次平行。在试样反应的同时，设置空白对照阴性对照和阳性对照空白对照以水作为空白对照阴性对照以个动物之外的其他基因组为阴性对照阳性对照将羊和牛种动物基因组等量混匀作为阳性对照。实时荧光。提取向收集的白细胞中加入的和蛋白酶，保温以上高速震荡，煮沸高速震荡，离心，转移上清液至离心柱中，离心，收集上清液。向收集液体中加入硅珠悬浮液和结合液，充分混匀，水浴，中间反转次室温放置，中间反转次离心，弃上清，留管底沉淀。加入乙醇，于离心......”。

3、“.....实时荧光反应体系配制按照附录依次加入试剂，配制反应体系，混匀离心分装至反应管中，加入模板，离心，取出管，放入荧光定量仪中。实时荧光反应程序预变性变性，退火延伸，个循环。微量移液器，无水乙醇吹打悬浮，离心，弃上清。羊奶中羊牛源性成分的定性检测方法实时荧光法。实时荧光定性引物和探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段通用引物上游通用引物下游内标引物上游内标引物下游试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合规定的级水。试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。磷酸盐缓冲液。于离心，吸走残余液体，室温干燥，使残余乙醇挥发干。加缓冲液溶解，加入酶溶液，水浴离心，吸取上清液转移至新的离心管中，保存备用。紫外分光光度计检测提取的蒸汽压灭菌，降至室温......”。

4、“.....凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法实验室质量控制规范食品分子生物学检测术语和定义下列术语和定义适用于本文件。羊源性本标准提及的羊源性成分为山羊和绵羊。实时荧光在反应体系进程，对未知模板进行定性或定量分析。值每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。原理根据线粒体基因在不同物种间保守区设计通用引物，在可变区设计物种特异性探针，采用实时荧光技术进行扩增，根据扩增反应的荧光信号及循环阈值，判定羊和牛的源性成分。羊奶中羊牛源性成分的定性检测方法实时荧光法。蛋白酶溶液称取蛋白酶冻干品，转内标质粒模板补至对各种样品检测结果的判定对各种样品检测结果的判定见表......”。

5、“.....离心，弃上清。羊奶中羊牛源性成分的定性检测方法实时荧光法。实时荧光定性引物和探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段通用引物上游通用引物下游内标引物上游内标引物下游反应体系配制按照附录依次加入试剂，配制反应体系，混匀离心分装至反应管中，加入模板，离心，取出管，放入荧光定量仪中。实时荧光反应程序预变性变性，退火延伸，个循环。试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合规定的级水。试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。磷酸盐缓冲液淀。加入乙醇，于离心，重复此步骤次加入无水乙醇吹打悬浮，离心，弃上清。于离心，吸走残余液体，室温干燥，使残余乙醇挥发干。加缓冲液溶解，加入酶溶液，水浴离心，吸取上清液转移至新的离心管中，保存备用。紫外分光光度计检测提取的浓度与纯度，测定和处吸光值，比值在之间......”。

6、“.....中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时整个进程，对未知模板进行定性或定量分析。值每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。原理根据线粒体基因在不同物种间保守区设计通用引物，在可变区设计物种特异性探针，采用实时荧光技术进行扩增，根据扩增反应的荧光信号及循环阈值，判定羊和牛的源性成分。羊奶中羊牛源性成分的定性检测方法实时荧光反应体系配制按照附录依次加入试剂，配制反应体系，混匀离心分装至反应管中，加入模板，离心，取出管，放入荧光定量仪中。实时荧光反应程序预变性变性，退火延伸，个循环。试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合规定的级水。试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。磷酸盐缓冲液，室温保存待用。称取十烷基硫酸钠溶解于无菌水中，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，储存于灭菌过的容器中待用。结合液称取异硫氰酸胍，加入溶液......”。

7、“.....再加入聚乙醇辛基苯基醚原液温度，转移至容量瓶中，加水定容至刻度。缓冲液将乙胺乙酸钠加入到的容量瓶中，调节至，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，。容量瓶。检测用引物和探针内标引物探针序列及羊和牛的引物和特异性探针序列见附录。引物探针在序列中的位置参见附录。试验步骤取样首先收集白细胞取液态羊奶，或者奶粉溶于无菌水中，每个样品设立个平行样，将样品于离心弃去离心管的上层乳脂和中间层乳液，保留其底部沉淀，向底部加缓冲液，将底部沉淀吹打悬浮并转移至的至容量瓶中，加水定容至刻度，分装后于保存。的称取树脂，转移至容量瓶中，加水定容至刻度。溶液称取羟甲基氨基甲烷置于烧杯中，加入水，用浓盐酸调节至，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，蒸汽压灭菌，室温保存待用。溶液称取水乙胺乙酸钠置于烧杯中，加入水，用的氢氧化钠溶液，调节至，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，蒸汽压灭菌无水乙醇吹打悬浮，离心......”。

8、“.....羊奶中羊牛源性成分的定性检测方法实时荧光法。实时荧光定性引物和探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段通用引物上游通用引物下游内标引物上游内标引物下游规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法实验室质量控制规范食品分子生物学检测术语和定义下列术语和定义适用于本文件。羊源性本标准提及的羊源性成分为山羊和绵羊。实时荧光在反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时整个。实时荧光检测试样实时荧光检测多重实时荧光进行羊和牛源性成分多重实时荧光，反应体系中包含羊和牛个物种源性的特异探针，并加入内标质控体系。反应体系见附录中表。对照实时荧光反应体系每个反应设置次平行。在试样反应的同时......”。

9、“.....实时荧光浓度与纯度，测定和处吸光值，比值在之间，浓度约为。实时荧光检测试样实时荧光检测多重实时荧光进行羊和牛源性成分多重实时荧光，反应体系中包含羊和牛个物种源性的特异探针，并加入内标质控体系。反应体系见附录中表。对照实时荧光反应体系每个反应设置次平行。在试样反应的同时，设置空白对照阴性对照和阳性对照空白对照以水作为空白对照阴性对照以个动离心管中，离心力，常温离心，弃去上层液体，保留底部沉淀。提取向收集的白细胞中加入的和蛋白酶，保温以上高速震荡，煮沸高速震荡，离心，转移上清液至离心柱中，离心，收集上清液。向收集液体中加入硅珠悬浮液和结合液，充分混匀，水浴，中间反转次室温放置，中间反转次离心，弃上清，留管底沉羊奶中羊牛源性成分的定性检测方法实时荧光法.反应体系配制按照附录依次加入试剂，配制反应体系......”。