1、“.....实时荧光定性检测方法各种实验结果的判定荧光荧光荧光结果判定多重体系检出大豆源性成份未检出大豆源性成分或含量低于检测界限多重体系检出羊源性成分未检出羊源性成分或含量低于检测界限多荧光定性检测方法。本标准适用于生鲜羊奶灭菌液态羊奶羊奶粉等羊奶制品中羊大豆源性成分的定性检测。羊奶中羊大豆源性成分的定性检测方法实时荧光法。实时荧光定性引物和探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段大豆引物上游大豆引物下游羊源性引物上游羊源性引物下游内标引物上游子分析天平感量。离心机最大离心力不小于。振荡型恒温金属浴。高压灭菌锅。低温冰箱。超净工作台。山东省地方标准羊奶中羊大豆源性成分的定性检测方法实时荧光法......”。

2、“.....探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段大豆引物上游大豆引物下游羊源性引物上游羊源性引物下游内标引物上游内标引物下游大豆探针羊探针羊奶中羊大豆源性成分的定性检测方法实时荧光法。蛋白酶溶液称取蛋白酶冻干品，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，分装后于保存。的称取树脂，转移至容量瓶中，加水定容至刻度。溶液称取羟甲基氨基甲烷置于烧杯中，加入水，用浓盐酸调节至，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，蒸汽压灭菌，室温保存待用。溶液称取水乙胺乙酸钠置于烧杯中，加入水，用的氢氧化钠溶液，调节至，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，蒸汽压注下划线为引物位置，阴影部分为探针位置试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合规定的级水。试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷......”。

3、“.....十烷基硫酸钠。磷酸盐缓冲液。羊奶中羊大豆源性成分的定性检测方法实时荧光法。实时荧光定性引物和蒸汽压灭菌，降至室温，保存备用。于离心，吸走残余液体，室温干燥，使残余乙醇挥发干。加缓冲液溶解，加入酶溶液，水浴离心，吸取上清液转移至新的离心管中，保存备用。紫外分光光度计检测提取的浓度与纯度，测定和处吸光值，比值在之间，浓度约为。实时荧光反应试样实时荧光检测多重实时荧光进行羊和大豆源性成分多重实时荧光，反应体系中包含羊和大豆个物种源性的特异探针，并加入内标质控体系光定量仪通道以上。电子分析天平感量。离心机最大离心力不小于。振荡型恒温金属浴。高压灭菌锅。低温冰箱。超净工作台。蛋白酶溶液称取蛋白酶冻干品，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，分装后于保存。的称取树脂，转移至容量瓶中，加水定容至刻度。溶液称取羟甲基氨基甲烷置于烧杯中，加入水，用浓盐酸调节至，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，蒸汽压灭菌......”。

4、“.....溶液称取水乙胺乙酸钠置于烧杯中，加入。反应体系见附录中表。对照实时荧光反应体系每个反应设置次平行。在试样反应的同时，设置空白对照阴性对照和阳性对照空白对照以水作为空白对照阴性对照以个动物之外的其他基因组为阴性对照阳性对照将羊和大豆种动物和植物基因组等量混匀作为阳性对照。实时荧光反应体系配制按照附录依次加入试剂，配制反应体系，混匀离心分装至反应管中，加入模板，离心，取出管，放入荧光定量仪中。实时荧光反应程序预变性变性，退火延伸，个循环。山东省地方标准羊奶中羊大豆源性成分的定性检测方法实时荧光法......”。

5、“.....实时荧光定性检测方法各种实验结果的判定荧光荧光荧光结果判定多重体系检出大豆源性成份未检出大豆源性成分或含量低于检测界限多重体系检出羊源性成分未检出羊源性成分或含量低于检测界限多重体系检出大豆和羊源性成分未检出大豆和羊源性成分或含量低于检测限多重体系如果同时进行的阳性对照实验结果正常，检测实际样品时只有荧光检出，荧光曲线，判定为未检出羊和大豆源性灭菌，室温保存待用。称取十烷基硫酸钠溶解于无菌水中，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，储存于灭菌过的容器中待用。结合液称取异硫氰酸胍，加入溶液，再加入乙胺乙酸钠溶液，再加入聚乙醇辛基苯基醚原液温度，转移至容量瓶中，加水定容至刻度。缓冲液将的的乙胺乙酸钠加入到的容量瓶中，调节至，转移至容量瓶中，加水定容至刻度，蒸汽压灭菌，降至室温，保存备用。仪器设备实时荧光定量仪通道以上。电。反应体系见附录中表......”。

6、“.....在试样反应的同时，设置空白对照阴性对照和阳性对照空白对照以水作为空白对照阴性对照以个动物之外的其他基因组为阴性对照阳性对照将羊和大豆种动物和植物基因组等量混匀作为阳性对照。实时荧光反应体系配制按照附录依次加入试剂，配制反应体系，混匀离心分装至反应管中，加入模板，离心，取出管，放入荧光定量仪中。实时荧光反应程序预变性变性，退火延伸，个循环。探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段大豆引物上游大豆引物下游羊源性引物上游羊源性引物下游内标引物上游内标引物下游大豆探针羊探针内标序列内标序列羊奶中羊大豆源性成分的定性检测方法实时荧光法.内标序列内标序列注下划线为引物位置，阴影部分为探针位置。探针序列引物探针名称缩写序列扩增片段大豆引物上游大豆引物下游羊源性引物上游羊源性引物下游内标引物上游内标引物下游大豆探针羊探针山羊产物序列山羊产物序列大豆产物序列山羊产物序列山羊产物序列成分......”。

7、“.....注意以下几个方面后再次进行反应。如果同时进行的阳性对照实验结果正常，则可能是样品制备有问题，如样品中可能存在抑制物等。如果同时进行的阳性对照实验结果不正常，则可能是实验操作失败或试剂失活。附录资料性附录目的基因扩增靶标参考序列大豆产物序列大豆产物序列。反应体系见附录中表。对照实时荧光反应体系每个反应设置次平行。在试样反应的同时，设置空白对照阴性对照和阳性对照空白对照以水作为空白对照阴性对照以个动物之外的其他基因组为阴性对照阳性对照将羊和大豆种动物和植物基因组等量混匀作为阳性对照。实时荧光反应体系配制按照附录依次加入试剂，配制反应体系，混匀离心分装至反应管中，加入模板，离心，取出管，放入荧光定量仪中。实时荧光反应程序预变性变性，退火延伸，个循环。内标探针实时荧光反应体系实时荧光定性。多重实时荧光反应体系试剂名称组分名称加量终浓度内标质粒注下划线为引物位置......”。

8、“.....在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合规定的级水。试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。磷酸盐缓冲液。羊奶中羊大豆源性成分的定性检测方法实时荧光法。实时荧光定性引物和定性引物探针序列反应体系和结果判定附录资料性附录目的基因扩增靶标参考序列前言本标准按照给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。本标准由山东省畜牧专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位山东省农业科学院生物技术研究中心。本标准主要起草人张全芳范阳阳刘艳艳胡悦陈雪燕刘国霞陈淑娟谷玉霞王俊燕步迅。羊奶中羊大豆源性成分的定性检测方法实时荧光法范围本标准规定了羊奶产品中羊大豆源性成分的实时荧光定性检测方法。本标准适用于生鲜羊奶灭菌液态羊奶羊奶粉等羊奶制品中羊大豆源性成分的定性检测。仪器设备实时荧绵羊产物序列绵羊产物序列羊奶中羊大豆源性成分的定性检测方法实时荧光法......”。

9、“.....检测实际样品时只有荧光检出，荧光曲线，判定为未检出羊和大豆源性成分。多重体系反应失败。注意以下几个方面后再次进行反应。如果同时进行的阳性对照实验结果正常，则可能是样品制备有问题，如样品中可能存在抑制物等。如果同时进行的阳性对照实验结果不正常，则可能是实验操作失败或试剂失活。附录资料性附录目的基因扩增靶标参考序列大豆产物序列注下划线为引物位置，阴影部分为探针位置试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合规定的级水。试剂氯化钠。浓盐酸。羟甲基氨基甲烷。水乙胺乙酸钠。十烷基硫酸钠。磷酸盐缓冲液。羊奶中羊大豆源性成分的定性检测方法实时荧光法......”。