绵样品中分离都仅分离到了株菌，约占总数的表给出了个属测序菌株形态形似菌株最大相似参比菌及其登录号，以及最大相似率由表中可知，菌株的最大相似菌株为，者的相似率为菌株的最大相似菌株为，者的相似率为菌株的最大相似菌株为，者的相似率为，因此，这个菌株可能是潜在的新的分类单元，需进步研究确定菌株与数，为样品的附生真菌物种数或属数，为样品的附生真菌物种数或属数热带海绵可培养真菌的系统发育分析将测序结果上传至比对后，选择与供试菌株相似度最大的序列为参比菌株序列采用对所有的序列进行比对，并进行手工调整，使用软件，根据模型估算系统进化矩阵，值设臵为，构建供试菌株与参比菌株的系统发育树，从而分析热带海绵可培养真菌的系统发育关系结果与分析热带海绵共附生真菌的分离结果利用种分离培养基从份热带海绵样品中共分离得到株真菌菌株，共计个形态种为初步确定分离菌株的分基于多样性分析进行热带海绵共附生真菌分离研究微生物学论文后分别进行种预处理未做任何处理将海绵样品在溶液中浸泡将海绵样品在水浴中加热在超净工作台中，将经过预处理的样品分别用无菌手术刀和手术剪切成左右的方块，放入无菌的研钵中，加入的无菌海水研磨至匀浆状，将匀浆吸取到无菌离心管中摇晃混匀后，制成样品稀释液，再用无菌海水将配制好的的样液稀释成和浓度梯度的稀释液采用倾注平板法对个样品中的真菌进行分离，用移液枪吸取样液滴在培养皿中，然后倒入培养基摇晃均匀每个处理个平行，所有平板放在恒温培养箱中倒臵培养，观察到菌落长出后及时将菌落转接到培养基中人员研发海洋药物领域的个重点对象本研究旨在从亚海域热带海绵中分离出可培养的共附生真菌，研究其种属分布的多样性，为海绵共附生真菌的活性研究及其应用奠定基础材料与方法图供试热带海绵样品形态特征实验材料海绵样品本研究共使用种海绵样品如图所示，它们采集自海南亚天涯区红塘湾样品采集后保存在无菌采样袋中，冰浴，当天带回实验室进行后续操作培养基本实验采用种分离培养基，分别为真菌号马丁培养基和培养基，每种培养基均添加终浓度为的硫酸链霉素的氯霉素和的氨苄青霉素培养基葡萄环境的特异性，使海洋微生物在物种基因组成和生态功能上表现出多样性和特异性，体内存在特殊代谢途径的酶，相应产生了些特殊的活性代谢物质例如，在肽类方面，年等从未鉴定的海绵中分离得到了株曲霉属真菌，从其发酵产物的乙酸乙酯萃取液中分离得到个能够产生抗神经炎性效果化合物等从海绵共生真菌曲霉属真菌的发酵液中分离得到对种癌细胞有微弱的抑制活性的环肽类化合物在生物碱类方面，年等从海绵来源曲霉属真菌的次级代谢产物中分离到具有摘要为探明热带海绵可培养共附生真菌的多样性，本研究以采集自亚海域的种热带海绵样品为研究对象，采用种不同的分离培养基对其共附生真菌进行分离，并进步利用序列对可培养的真菌进行分子鉴定和系统发育分析研究结果表明热带海绵具有较丰富的真菌资源，种样品种分离培养基共分离得到株真菌，序列表明，它们分属于个属，其中为优势种属，本研究分离得到的所，郭双双，徐炜等南海种珊瑚附生可培养真菌多样性分析应用海洋学学报，张圣良，楚肖肖，赵友兴，等海洋生物共附生真菌的分离鉴定及抗菌活性分析生物技术通报，张丹，蒋群，李英新，等中国南海海绵和珊瑚共附生真菌多样性及其抑菌活性研究中国海洋药物，肖胜蓝，雷晓凌，徐佳，等徐闻种珊瑚共附生真菌的分离及初步鉴定广东海洋大学学报，梁小蕊株海洋木霉次生代谢产物及生物活性研究烟台中国科学院烟台海岸带研究所，柴家乐，白雪莲，郑双芝，等日本矶海绵共生真菌分离及其代谢产物抑菌活性研究食品与机械，杜晓娜，高渊皓，张雁，等株南作用在前人关于海绵共附生真菌的研究报道中，分离得到的种属有曲霉属青霉属拟盾壳霉属枝孢属茎点霉属假丝酵母属迈耶氏酵母属红酵母属侧齿霉属炭角菌属踝节菌属链格孢属暗球腔菌属光黑壳属双散霉属拟盘多孢属等种类丰富的海洋真菌本研究分离得到的株真菌中，除了分离到与上述研究中共有的真菌外，还分离到外瓶霉属韦斯特壳属威克汉姆酵母属属属属和属，这些种属在前人的研究中少见或未见本研究采用种不同的真菌分离培养基对热带海绵共附生真菌进行分离培出株真菌菌株，序列表明它们属于个属，其中和菌株与已知最大相似菌的相似率都低于，有可能为潜在的新物种，而的最大相似菌为未培养真菌，其也有可能为首次获得的可培养菌株本研究结果表明，木霉属为热带海绵共附生真菌中的优势属这结果与前人的报道不太相符在张圣良等，的研究中，优势菌属均为曲霉属导致这种差别的因素，我们认为主要集中在两种方面在本次研究中，我们采取了种预处理方法，种是水浴加热，种是在溶液中浸泡，还有种便是不做处理种预处理方法下，水浴加热并分离出菌株在前人属和属仅在培养基上分离得到，枝孢属威克汉姆酵母属外瓶霉属只在培养基上分离得到而迈耶氏酵母属拟盾壳霉属和炭角菌属则只在真菌号培养基上分离得到属则只在培养基上分离得到研究结果说明热带海绵共附生真菌对不同培养基具有偏好性，但培养基和真菌号培养基最适合用于分离海绵共附生真菌图供试菌株与基于多样性分析进行热带海绵共附生真菌分离研究微生物学论文海指海绵共附生真菌多样性及其抗菌活性菌物学报，马新华株海绵来源的真菌次级代谢产物及其生物活性研究青岛中国海洋大学，周康，张霞，张风丽，等中国南海海绵共附生真菌种群多样性及抑菌活性中国海洋药物，焦杰颖，朱天骄，朱伟明，等海绵来源真菌的分离纯化及其抗肿瘤活性的筛选中国海洋大学学报自然科学版，吴琪闽，童剑锋，李聪，杨振光，李荭烨，徐小雄，冯慧敏热带海绵共附生真菌的分离与多样性分析海南热带海洋学院学报，基金海南省大学生创新创业训练计划项目亚市院地科技合作项目基于多样性分析进行热带海绵共附生真菌分离研究微生物学论文线菌的分离和多样性研究大连中国科学院大连化学物理研究所，杨君泽，吴小凯，何山海绵来源真菌天然产物的研究进展天然产物研究与开发，周康，张霞，张风丽，等中国南海海绵共附生真菌种群多样性及抑菌活性中国海洋药物，柴家乐，白雪莲，郑双芝，等日本矶海绵共生真菌分离及其代谢产物抑菌活性研究食品与机械，杜晓娜，高渊皓，张雁，等株南海指海绵共附生真菌多样性及其抗菌活性菌物学报，宋恺，胡洁，林文翰，等海绵共附生真菌多样性及其次级代谢产物的研究进展生物技术通报，张海涛海绵放线菌的分离和多样性研究大连中国科学院研究生院大连化学物理研究等于，说明它们之间的共附生真菌菌群有着较高的相似性其他海绵样品之间的共附生真菌菌群的相似系系数均小于，反映出它们之间共附生真菌多样性水平差异性较大，相似程度低表个海绵样品之间真菌群落结构相似性系数种分离培养基对海绵共附生真菌的分离能力比较本研究共采用种分离培养基进行分离，共得到真菌菌株株，其中真菌号培养基共分离得到株菌，占总菌株数的培养基共分离得到株菌，约占培养基共分离得到株，约占培养基共分离得到株菌，约占每种分离培养基上得到的菌株数及其种类如表所示，结果表明，种培养基均可分离得到真菌菌株，养，研究结果表明培养和真菌号培养分离得到的菌株数量和种类都较为丰富，因此尝试用于海洋真菌的分离培养而培养基在分离海洋源真菌的实验中作为种常见的培养基，其分离效果普遍得到大家认可，但是在本次实验中并未取得显著的效果，所以在培养基的选取中仍然需要经过多方面的考量参考文献马军，马芮，叶佳琪，等红树林根际土壤中产种酶枯草芽孢杆菌的分离鉴定琼州学院学报，徐小雄，雷鸣，邵贵银，等吊罗山阿宽蕉根际土壤放线菌的分离与初步鉴定琼州学院学报，王沛政，徐云升海南发酵罗非鱼细菌多样性分析海南热带海洋学院学报，张海涛海绵放对海洋源共附生真菌的分离研究中，采用溶液浸泡的预处理方式尚属少见，大部分都是经过冲洗后即研磨制取样液所以溶液对曲霉属真菌或其他菌属是否产生抑制影响，是值得考虑的个因素另外，由于采集的海绵样品尚未得到鉴定，所以海绵样品的种类与特定分布海域的环境因素是否会对曲霉属真菌与木霉属真菌产生影响也暂时不得而知木霉属作为自然界中分布较为广泛的真菌类群，因其中许多种类对植物病原真菌具有拮抗和重寄生作用以及能够产生纤维素酶等多种酶类而备受关注本研究分离出木霉属为优势属类的结果亦可为后人对海洋源木霉属真菌的特定研究中提供定的参照比菌株基于序列的系统发育树表种培养基上海绵共附生真菌的分布热带海绵共附生真菌基于序列的系统发育分析将供试的个菌株的序列上传至进行比对，并下载各菌株的参比序列，以为外类群构建供试菌株与参比菌株基于序列的系统发育树由图可知，供试的菌株可以明显分为两大类，大类为酵母菌，大类为丝状真菌其中与未培养真菌菌株聚到了起，可能为首次获得的纯培养菌株的新物种讨论本研究从亚海域的个热带海绵样品种共分离但是每种培养基的出菌率存在定的区别，其中培养基和真菌号培养基出菌率更高进步分析发现，这种分离培养基分离得到的菌株，不仅数量有差异，菌株的种类也有定的区别其中，培养基和真菌号培养基分离得到的菌株种类最为丰富，都为个属，而培养基分离得到株个属的真菌菌株，培养基分离得到的菌株数最少，仅为株个属木霉属在种分离培养基上均有得到弯孢聚壳属和属在培养基培养基和真菌号培养基上均能分离得到此外，韦斯特壳属基于多样性分析进行热带海绵共附生真菌分离研究微生物学论文得到，如威克汉姆酵母属拟盾壳霉属和属均来源于海绵号样品，炭角菌属外瓶霉属属均来源于海绵号样品，枝孢属只在海绵号样品上分离得到，韦斯特壳属只在海绵号样品上分离得到表种海绵样品上的共附生真菌分布采用索伦森相似性系数，比较样品之间