后，分别作用和，进行检测，结果反应后值均最大，确定酶国动物保健，韩瑞鑫，申捷，申之义绵羊肺炎支原体实时荧光定量检测方法的建立与应用中国兽医科学，林裕胜，李莎莎，江锦秀绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重探针荧光定量检测方法的建立及应用农业生物技术学报，宋蓉绵羊肺炎支原体固相竞争抗体检测方法的建立农民致富之友，赵萍，储岳峰，高鹏程绵羊肺炎支原体间接检测方法的建立及应用福建农林大学学报自然版，朱光猪流感病毒蛋白纳米抗体的制备及阻断方法的建立与评价杨凌西北农林科技大学，杜改梅，孙玫，刘茂军绵羊肺炎支原体抗体检测方法的建立畜牧与兽医，基金国家重点研直接影响检测方法的敏感度和特异性，导致疾病误诊，造成不良后果。常用封闭液的种类较多，但不同封闭液和不同浓度封闭液的封闭效果均不同。本试验分别用不同种类封闭液进行封闭，结果发现封闭效果较好，以含的磷酸盐缓冲液作为稀释液，有效地降低试验中的非特异性反应，使得结果判定更准确更明显更直观。许多报道都以为封闭液，但不同报道所选用的最佳浓度有所不同，这可能与其他诸多因素有关。对包被浓度血清稀释倍数酶标抗反应浓度，以及血清和酶标抗反应时间进行摸索，并且对各个反应条件进行了优化，建立了绵羊肺炎支原体抗体检测方法。与检测结果相比，本研究的方探讨绵羊肺炎支原体血清抗体检测方法的构建及意义病毒学论文法，及时准确地对羊群进行监测，及早发现，对有效防控该病发生起着决定性作用。病原的分离培养是检测绵羊支原体性肺炎的最经典方法，但其方法繁琐耗时，不适宜向基层推广应用。技术快速，准确性高，绵羊肺炎支原体的方法最低检测限可达到绵羊肺炎支原体，。但该技术成本高，需要先进的仪器设备，更适宜于实验室研究。环介导等温扩增技术是种新发现的敏感性高的分子生物学技术，存在假阳性等问题。血清学方法是目前最常用的种检测技术。赵萍等应用方法检测绵羊支原体肺炎，阳性检出率高，特异性和敏感性高，但其敏感性较方法低。方法以其操作简捷方便及良好的检测特异性与敏感性而倍值在时的值最大，因此选择底物的最佳反应时间为图。图底物最佳作用时间的优化间接临界值的确定用本方法各检测份羊血清经绵羊肺炎支原体抗体检测试剂盒检测为阴性，求得其平均值，标准偏差，临界值为。由此确定判定标准为在酶标仪上测各孔值，如果血清大于等于判为阳性，小于判为阴性，介于者之间判为可疑。临床样品检测符合率用实验室建立的绵羊肺炎支原体抗体检测方法和绵羊肺炎支原体抗体检测试剂盒共同检测来自临床的羊血清和试验攻毒羊血清共份。从表中可以看出，绵情加重，死亡率升高，该病在世界多个国家地区均有流行，给养殖业造成严重危害，。羊支原体肺炎的诊断方法较多，如病原分离培养血清学诊断和分子生物学诊断等，。但支原体培养条件苛刻，耗时长，不适合应用于临床实际。血清学诊断方法中，方法特异性强，灵敏度高，高效省时。近年来，我国虽然在该方面的研究报道较多，但目前缺乏稳定成熟的快速特异高通量临床应用诊断试剂盒，严重影响了该病的有效诊断与防治工作，。因此，有效控制羊支原体肺炎，应该建立种敏感稳定的诊断方法，这不仅对本病的检测和监控及流行病学调查具有重要意义，而且为疫苗免疫的效果评估提供了支持。图抗原和血清最佳稀释浓度的优化血清反应时间的优化加底物反应时间的优化加入底物后分别作用和，进行检测，根据值最大时，确定底物的最佳反应时间。临界值的确定采用本研究建立的绵羊肺炎支原体抗体方法检测份经绵羊肺炎支原体检测为阴性的血清。计算，进行统计学分析。探讨绵羊肺炎支原体血清抗体检测方法的构建及意义病毒学论文。摘要为了建立特异性好和敏感性高的绵羊肺支原体抗体检测方法，以绵羊肺炎支原体标准菌株的全菌蛋白作为抗原，进行了反应体系和反应条件的优化筛选。结果显示最佳蛋白抗原包被浓度为，最适封闭液及其稀释浓度为，血清样品的稀释度为，兔抗山羊的最适稀释浓度为，抗和抗的最佳的绵羊肺炎支原体抗体方法检测份经绵羊肺炎支原体检测为阴性的血清。计算，进行统计学分析。血清最佳反应时间的确定加入待检血清后，分别于作用和，进行检测，根据值最大时，确定血清的最佳反应时间。酶标抗体反应浓度和时间的确定将酶标抗体进行和梯度稀释后，分别作用，进行检测，根据值最大时，确定酶标抗体的最佳反应浓度。以最佳浓度分别作用和，检测，根据值最大时，确定酶标抗体的最佳反应时间。临床样品检测符合率研究用实验室研制的绵羊肺炎支原体血清抗体检测方法和绵羊肺炎支原体共同检测来自临床的羊血清和绵羊肺炎纳米抗体的制备及阻断方法的建立与评价杨凌西北农林科技大学，杜改梅，孙玫，刘茂军绵羊肺炎支原体抗体检测方法的建立畜牧与兽医，基金国家重点研发计划江苏高校青蓝工程江苏省第期工程科研项目。摘要为了建立特异性好和敏感性高的绵羊肺支原体抗体检测方法，以绵羊肺炎支原体标准菌株的全菌蛋白作为抗原，进行了反应体系和反应条件的优化筛选。结果显示最佳蛋白抗原包被浓度为，最适封闭液及其稀释浓度为，血清样品的稀释度为，兔抗山羊的最适稀释浓度为，抗和抗的最佳作用时间为，底物显色的最佳时间为通过与绵羊肺炎支原体抗体间接血凝倍数酶标抗反应浓度，以及血清和酶标抗反应时间进行摸索，并且对各个反应条件进行了优化，建立了绵羊肺炎支原体抗体检测方法。与检测结果相比，本研究的方法检出份阳性血清，符合率为检出份阴性血清，符合率为。这表明该方法特异性好，能够反映绵羊肺炎支原体感染情况，可应用于临床生产中，为羊支原体肺炎提供监测和诊断工具。参考文献张莉，王作艳，孙继国，等绵羊肺炎支原体的微生物学特性的研究河北农业大学学报，张莉绵羊肺炎支原体生物学特性及其快速检测技术的研究保定河北农业大学，黄海碧绵羊肺炎支原体检测方法的建立及黏附蛋白的研究呼和浩特内蒙古农业大学，赵萍，禄忠新，储岳峰，等绵羊肺炎萍等应用方法检测绵羊支原体肺炎，阳性检出率高，特异性和敏感性高，但其敏感性较方法低。方法以其操作简捷方便及良好的检测特异性与敏感性而倍受欢迎，不仅被广泛地应用到科研生产中，也被开发成各种诊断试剂盒广泛应用于临床疾病的检测，在动物疾病的诊断和疫情监测中发挥了重大作用。国内虽开展了大量有关羊肺炎支原体检测方法的研究，但尚无可靠稳定的商品化试剂盒。检测方法操作步骤虽简单，但影响因素较多，抗原封闭液样品稀释液以及相互之间的作用时间等都会直接影响到检测结果。本研究选取绵羊肺炎支原体标准菌株作为抗原，建立绵羊肺炎支原体的抗体检测方法。封闭是探讨绵羊肺炎支原体血清抗体检测方法的构建及意义病毒学论文支原体攻毒试验血清共份。统计分析阳性符合率和阴性符合率。统计分析所有数据用平均值标准误表示，采用统计软件统计，以单因子方差分析进行差异显著性检验。探讨绵羊肺炎支原体血清抗体检测方法的构建及意义病毒学论文。血清最佳反应时间的确定加入待检血清后，分别于作用和，进行检测，根据值最大时，确定血清的最佳反应时间。酶标抗体反应浓度和时间的确定将酶标抗体进行和梯度稀释后，分别作用，进行检测，根据值最大时，确定酶标抗体的最佳反应浓度。以最佳浓度分别作用和，检测，根据值最大时，确定酶标抗体的最佳反应时体肺炎的诊断方法较多，如病原分离培养血清学诊断和分子生物学诊断等，。但支原体培养条件苛刻，耗时长，不适合应用于临床实际。血清学诊断方法中，方法特异性强，灵敏度高，高效省时。近年来，我国虽然在该方面的研究报道较多，但目前缺乏稳定成熟的快速特异高通量临床应用诊断试剂盒，严重影响了该病的有效诊断与防治工作，。因此，有效控制羊支原体肺炎，应该建立种敏感稳定的诊断方法，这不仅对本病的检测和监控及流行病学调查具有重要意义，而且为疫苗免疫的效果评估提供了支持。底物反应时间的优化加入底物后分别作用和，进行检测，根据值最大时，确定底物的最佳反应时间。临界值的确定采用本研究建检测符合率用实验室建立的绵羊肺炎支原体抗体检测方法和绵羊肺炎支原体抗体检测试剂盒共同检测来自临床的羊血清和试验攻毒羊血清共份。从表中可以看出，绵羊肺炎支原体抗体检测方法检出份阳性，份阴性，份可疑绵羊肺炎支原体检出份阳性，份阴性两者共同检出阳性份，共同检出阴性头份。阳性符合率和阴性符合率分别为和。表绵羊肺炎支原体抗体检测方法和检测试剂盒的对比结果讨论羊支原体肺炎是由绵羊肺炎支原体引起的种以咳嗽气喘渐进性消瘦以及肺间质增生性炎症为特征的慢性呼吸道传染病，该病在世界多个国家和地区均普遍流行，给当今养羊业的健康发展造成了严重威胁。该病主要通过试验检测结果相比，份羊血清样品中检出阳性为份，阴性为份，者的检测符合率可达到，相对特异性达。提示建立的绵羊肺炎支原体血清抗体检测方法具有较高的检测敏感性和特异性，为绵羊肺炎支原体的抗体检测及其感染的流行病学调查提供了种快速简便的检测工具。关键词抗体病毒学绵羊支原体肺炎绵羊肺炎支原体间接羊支原体肺炎是由绵羊肺炎支原体引起的山羊和绵羊最为常见的种呼吸道疾病，发病率高，死亡率低。羔羊易感性强，发病率和死亡率均较高。感染绵羊肺炎支原体之后，羊只抵抗力降低，容易继发感染其他病原菌，致使病情加重，死亡率升高，该病在世界多个国家地区均有流行，给养殖业造成严重危害，。羊支原支原体间接血凝诊断方法的建立甘肃农业大学学报，谢秀兰，额尔和花，黎帅，等宁夏不同绵羊品种中绵羊肺炎支原体的调查中国兽医杂志，王兴和绵羊支原体性肺炎防治措施中国动物保健，韩瑞鑫，申捷，申之义绵羊肺炎支原体实时荧光定量检测方法的建立与应用中国兽医科学，林裕胜，李莎莎，江锦秀绵羊肺炎支原