检验进行统计分析｡结果与分析重组质粒模板制备构建扩增出的和段的重组质粒｡单独检测方法条件的筛选用建立的体系，其中含有重组质粒模板引物与或引物与各｡程序，软件推荐的退火温度｡在此基础上，逐筛选与的各自单独探讨如何建立快速检测并区分与的双重检测方法病毒学论文和，其扩增产物大小为引物序列为和，其扩增产物大小为｡病毒基因片段重组质粒的构建用北京康为世纪生物科技有限公司的自年被报道发现以来，现已在多个国家传播流行｡故有必要建立种快速区分与的检测方法｡技术是现阶段应用于病毒快速检测的种实效方法｡在需要快速检测与区分多种病毒时，单独存在效率低下成本较高的缺陷，而多重则可解决这些缺陷｡本研究旨在建立种双重检测方法，以显著差异，且与单独检测方法的符合率都达到以上｡结论建立了种特异性强敏感性高的猪圆环病毒型和猪圆环病毒型双重检测方法，为区分猪圆环病毒型和猪圆环病毒型提供了种快速检测方法｡关键词双重猪圆环病毒型猪圆环病毒型病毒学猪圆环病毒是种非常小的病毒，现有种类型｡猪圆摘要目的建立针对猪圆环病毒型和猪圆环病毒型的种双重检测方法｡方法先优化猪圆环病毒型和猪圆环病毒型的单独检测方法条件，在此基础上优化这种猪圆环病毒的双重检测方法条件，之后进行其特异性与灵敏度的检测，并进行初步临床应用检测｡结果建立的猪圆环病毒型与猪圆环病毒型双重混合检出率为｡不同研究者报道的与的临床检出率不尽致，这可能与临床样品的地区来源采集时间等因素有关｡综合来看，的临床感染普遍明显高于感染，但部分地区临床感染也不低，提示除注意防控感染外，也需要开始关注感染的防控｡参考文献季程远，王蔚怡，黄欣｡本研究建立的与双重检测方法中和的检测灵敏度分别为病毒，不仅高于已有报道，还与相应的单独检测方法的检测灵敏度样｡对份仔猪样品的检测显示，两种的双重检测结果都只稍低于单独检测结果，符合率都达到以上｡与，都可能引起母猪繁殖障碍和，故可快速鉴别感染与感染的诊断方法具有重要临床价值｡双重检测方法就是种能够早期快速区分与的实用检测方法｡般而言，在进行扩增时，与使用对引物相比，使用多对引物时更易出现相互干扰，这会引起扩增效率下降，从而引起梯度稀释后的与的重组质粒为模板进行灵敏度检测，电泳结果图显示，可检出的最低浓度分别为，故确定者双重检测方法的灵敏度分别为｡临床样品检测结果和的双重检出率都稍低于各自单独检出率，但都没有显著差探讨如何建立快速检测并区分与的双重检测方法病毒学论文，方庆励，欧阳康，陈樱，韦祖樟，黄伟坚猪圆环病毒型和型双重检测方法的建立与应用中国预防兽医学报，温海京，石玉佩，胡胜云，王阳，张永红，周双海猪圆环病毒型与型双重检测方法的建立北京农学院学报，探讨如何建立快速检测并区分与的双重检测方法病毒学论文检测方法从来自重庆与辽宁地区个猪场份样品中发现与的检出率分别为与，混合检出率为季程远等检测广西地区例临床样本，发现与的检出率分别为与，混合检出率为｡本研究应用建立的双重检测方法对年京津冀地区份仔猪样品的检测结果显示，与的检出率分别为与法的灵敏度分别为｡双重检测方法条件的优化以优化后的与的单独检测方法为基础，设臵个退火温度进行双重扩增，发现退火温度在时的条带都比另两个温度下的条带更亮见图，故确定为双重检测方法的最适退火温度｡以优化后的与的单独此同时，在检测伪狂犬病病毒猪细小病毒及猪圆环病毒型等现阶段比较普遍存在的病毒时，单独检测与双重检测的检测结果均呈阴性｡这些结果表明建立了种具有良好特异性与敏感性的与双重检测方法｡些研究者报道中国部分地区与的检出率｡等报道用单独检测敏感性下降｡在检测敏感性方面，多重扩增低于单独扩增｡通过引物设计与筛选和检测条件优化，多重检测方法的灵敏度可以非常接近相应的单独检测方法｡些研究者建立和的双重检测方法，季程远等建立的方法中两种病原的检测灵敏度都是病，符合率分别为表｡不管是单独检测还是双重检测，检出率都极显著高于｡检出率超过，检出率超过，说明在这些临床样品中感染普遍存在，同时感染也不少｡另外，与的混合检出率为｡表两种方法的检出率讨论与都是具有致病性的检测方法为基础，以为退火温度，对引物浓度与引物浓度设臵个比例进行双重扩增，电泳结果图显示，引物浓度与引物浓度的比例为∶时的条带较其他比例下的条带更亮，故将其确定为双重检测方法中两种病原的最适引物浓度比例｡应用已优化的双重检测方法，以倍探讨如何建立快速检测并区分与的双重检测方法病毒学论文度为时的条带都比较亮，而引物浓度为时的条带都比较暗，所以将对引物的最适浓度范围都确定为｡应用已优化的单独检测方法，以倍梯度稀释后的与的重组质粒为模板进行灵敏度检测，电泳结果见图显示可检出的最低浓度分别为，故确定者各自单独检测的左右大小的预期产物图｡分别对个预期产物进行克隆与测序鉴定，测序结果显示与相应靶序列都达到符合度｡提取相应含有与的基因片段的重组质粒，测出重组质粒为，重组质粒为｡单独检测方法条件的优化选取合适的模板浓度，测方法的最适退火温度与最适引物浓度，并检测其特异性与灵敏度｡双重检测方法条件的筛选以优化后的与的单独检测方法条件为基础，逐筛选双重检测方法的最适退火温度与最适引物浓度比例，并检测其特异性与灵敏度｡临床检测与统计分析收集年秋季至年夏季之间北京市河北省与来建立个含有引物与或引物与各为病毒为总体积为的体系｡程序｡用琼脂糖凝胶电泳观察产物回收纯化预期产物进行克隆与测序鉴定，构建含有或的基因片快速检测并区分与｡材料与方法病毒模板种和猪细小病毒与伪狂犬病病毒等病毒模板由北京农学院动物科学技术学院动物疫病研究实验室保存｡引物序列比对分析与的全基因组核苷酸同源性后设计对引物，引物序列为病毒型般被认为对猪没有致病性｡猪圆环病毒型除引起断奶后多系统衰竭综合征外，还可引起母猪繁殖障碍，并被认为与猪皮炎与肾病综合征有关自世纪年代被报道发现以来，目前呈全球性流行｡猪圆环病毒型，除引起外，还被认为可引起母猪繁殖障碍检测方法对猪圆环病毒型猪细小病毒伪狂犬病病毒等当前常见猪源病毒的检测结果都是阴性，检测猪圆环病毒型和猪圆环病毒型的灵敏度分别是｡该方法对份仔猪样品的检测结果显示，猪圆环病毒型和猪圆环病毒型的检出率分别为和，虽然稍低于各自单独检出率但并没有