集，用磷酸缓冲溶液中性洗次，离心。将细胞沉淀用倍体积的高氯酸萃取或者加入预冷的，冻融法裂解细胞反复次，转移至离心管中，冰浴浸提离心将上清液贮存在或者直接分析，由夜温度，光暗周期。接种侵染空载体的棉花幼苗作为对照，试验组重复次，每次处理各株，后观察棉花表型。图侵染基因沉默后棉花表型和沉默后的棉花表型和沉默后的棉花叶片。盐胁迫下沉默棉花的相关基因表达有多个代谢通路，本研究分析了沉默后下游相关基因的转录水平。与对照相比，下游呈现不同程度的下调表达，表现出了上下游相互协同性关系表，表明对和具有正调控的作用。盐胁迫后，迅速上调，而参照组的和个基因表达急速下调，和逐渐恢复正常水平，而先急剧下调后在瞬时爆发，而后又被抑制。沉默组盐胁迫后测，。多胺质量分数采用苯甲酰氯柱前衍生化法检测。液氮研磨叶片，用离心管离心收集，用磷酸缓冲溶液中性洗次，离心。将细胞沉淀用倍体积的高氯酸萃取或者加入预冷的，冻融法裂解细胞反复次，转移至离心管中，冰浴浸提离心将上清液贮存在或者直接分析，由提供的方法检测。氨基酸采用，硝基氟苯柱前衍生化法检测，。用溶解液氮研磨的叶片，微量移液器吸取原液于离心管中，高速离心，沉淀菌体等固形物。准确量取上清液，加入装有衍生缓冲溶液的塑料离心管中，然后加入衍生试剂溶液，摇匀，将塑料离心管臵于水浴中暗处恒温加热后取出，放臵待溶液冷至室温后，加入值为定容缓冲液匀，放臵后进行色探讨棉花氮代谢变化与病毒诱导的精氨琥珀酸合成酶基因沉默之间的关联性病毒学论文质中以高浓度积累，。经热激预处理的棉花在干旱胁迫后时，叶片内和分别是对照植株中的和倍，比未经处理的棉花的耐渗透胁迫能力显著增强。在花期喷施外源可改善小麦的耐热能力，从而提高小麦产量。高等植物中精氨酸代谢研究的最新进展主要集中在拟南芥的研究，明确了拟南芥中鸟氨酸生物合成循环途径。盐胁迫沉默的棉花，除了质量分数下降外，其余氨基酸则升高，特别是极性氨基酸增高水平极为显著。具有多个代谢通路，当表达持续受到抑制，代谢不畅质量分数增加时，表达上调，活性增强，质量摩尔浓度也显著增加，表明棉花具有合成的通路。研究也说明，的合成，质量分数高低是关键，只是必要条件。在盐胁迫状态下是否存其他代谢被抑制，质量摩尔浓度也随之下降。参与植物抵御环境胁迫的响应，发挥重要生理作用，其代谢是复杂的生理过程。是和其他生物碱代谢的第个关键环节，在植物体内，的合成是由经过催化等系列反应而得，另条途径是由经催化鸟氨酸脱羧生成。在亚精胺合成酶催化加氨基生成，而能够在精胺合成酶作用下合成。本研究中盐胁迫棉花幼苗迅速上调，表明其对盐的敏感。沉默后和水平下降，表达也急剧下调。受到强烈的抑制，合成受阻，和质量分数显著下降。已经越来越被认为是个新的信号分子，在各种胁迫下低浓度能迅速清除超氧阴离子和脂质自由基，阻断包括脂质过氧的利用与代谢关系密切，有学者提出，光合作用所产生的能量用于硝酸盐还原。是生物体中含氮最多的氨基酸，是体内氮代谢的重要枢纽，它主要来源于体外营养的供给，自身蛋白质的代谢，以及通过生物代谢途径合成，其下游具有合成机体蛋白质肌酸尿素胍基丁胺等多个代谢途径，在生物的生长发育抗逆抗病过程中发挥重要的功能。在棉花幼根花瓣和花蕊中表达活跃，而这些都是发育比较旺盛的器官，可以促进的合成与利用。与动物和微生物类似，植物体内利用和为原始底物合成，随后与利用和合成的为底物，鸟氨酸转氨酶催化和形成。反应需要的由和谷氨酰胺的氨基通过产生。精氨酸的第个原子衍生自天冬氨酸，其通过和是合成的重要原料，利用生成，当沉默后，这几种氨基酸质量分数均下降，尤其是下降为空载棉花组的。盐胁迫后与空载棉花组比较，沉默组棉花总游离氨基酸质量分数显著增加表，在检测的种氨基酸中，除氨基酸质量分数下降外，其他氨基酸质量分数都不同程度上升进步分析发现，与空载棉花组盐胁迫前比较，各游离氨基酸质量分数和下降极为显著，达到了以下，而和升高极为显著。结论与讨论在棉花幼根花瓣和花蕊中表达活跃，对盐胁迫敏感，迅速上调表达。不仅仅控制的合成，而且在整个氨基酸代谢中起重要作用。可以快速沉默目的基因，研究营养环境，还可以增强棉花抗盐抗逆能力，扩大种植面积，提高产量品质。利用技术沉默棉花精氨琥珀酸合成酶基因，探索其缺失对棉花生理以及含氮化合物代谢的影响，来探讨精氨琥珀酸合成酶在植物中的作用和功能。材料与方法试验材料陆地棉农大号珂字棉种子由河北农业大学棉花育种组提供。病毒载体质粒和菌株由河北省农林科学院棉花研究所迟吉娜研究员惠赠。大肠杆菌农杆菌由本研究所保存。棉花幼苗的盐胁迫将去纤维的大小均成熟饱满的籽粒，杀菌后，播种于营养土中蛭石∶营养土∶，每天光照培养，温度为。棉花幼苗长到两叶心后，挑选长势致的幼苗，采用浓度的盐溶液营养钵底部吸收的方法至营养土饱和，以水做对照。表盐胁可改善小麦的耐热能力，从而提高小麦产量。高等植物中精氨酸代谢研究的最新进展主要集中在拟南芥的研究，明确了拟南芥中鸟氨酸生物合成循环途径。盐胁迫沉默的棉花，除了质量分数下降外，其余氨基酸则升高，特别是极性氨基酸增高水平极为显著。具有多个代谢通路，当表达持续受到抑制，代谢不畅质量分数增加时，表达上调，活性增强，质量摩尔浓度也显著增加，表明棉花具有合成的通路。研究也说明，的合成，质量分数高低是关键，只是必要条件。在盐胁迫状态下是否存其他同工酶，催化途径，以及与和的关系和作用机理还需进步研究，本研究已经构建了过表达载体，正在进行转化，以期获得转基因棉花体内，的合成是由经过催化等系列反应而得，另条途径是由经催化鸟氨酸脱羧生成。在亚精胺合成酶催化加氨基生成，而能够在精胺合成酶作用下合成。本研究中盐胁迫棉花幼苗迅速上调，表明其对盐的敏感。沉默后和水平下降，表达也急剧下调。受到强烈的抑制，合成受阻，和质量分数显著下降。已经越来越被认为是个新的信号分子，在各种胁迫下低浓度能迅速清除超氧阴离子和脂质自由基，阻断包括脂质过氧化在内的参与的各种伤害效应，而且能诱导抗氧化酶基因的表达，起到抗氧化功能。在植物体内合成主要有亚硝酸盐还原酶黄嘌呤氧化酶和非酶促反应，以及类似的代谢，以及通过生物代谢途径合成，其下游具有合成机体蛋白质肌酸尿素胍基丁胺等多个代谢途径，在生物的生长发育抗逆抗病过程中发挥重要的功能。在棉花幼根花瓣和花蕊中表达活跃，而这些都是发育比较旺盛的器官，可以促进的合成与利用。与动物和微生物类似，植物体内利用和为原始底物合成，随后与利用和合成的为底物，鸟氨酸转氨酶催化和形成。反应需要的由和谷氨酰胺的氨基通过产生。精氨酸的第个原子衍生自天冬氨酸，其通过与连接。作为和的底物，和是合成的必需前体，最后在作用下产生最终产物和延胡索酸完成的生物合成。催化过程需要消耗探讨棉花氮代谢变化与病毒诱导的精氨琥珀酸合成酶基因沉默之间的关联性病毒学论文迫后沉默棉花幼苗多胺质量分数导出到注表中数据为平均值标准差同列数据后不同字母表示处理间差异显著。表沉默棉花幼苗瞬时质量摩尔浓度导出到注表中数据为平均值标准差同列数据后不同字母表示处理间差异显著。盐胁迫后，与胁迫前比较，空载体棉花叶片总游离氨基酸质量分数变化不大，但是质量分数显著增加，其中质量分数为胁迫前倍。其他氨基酸质量分数不同程度下降沉默组棉花总游离氨基酸质量分数增加极为显著，其中除质量分数显著下降外，其他游离氨基酸质量分数都有所升高，尤其质量分数增加极为显著，这几种氨基酸都因为携带更多的含氮基团或者羟基而具有极性或者碱标准差同列数据后不同字母表示处理间差异显著。盐胁迫后，与胁迫前比较，空载体棉花叶片总游离氨基酸质量分数变化不大，但是质量分数显著增加，其中质量分数为胁迫前倍。其他氨基酸质量分数不同程度下降沉默组棉花总游离氨基酸质量分数增加极为显著，其中除质量分数显著下降外，其他游离氨基酸质量分数都有所升高，尤其质量分数增加极为显著，这几种氨基酸都因为携带更多的含氮基团或者羟基而具有极性或者碱性。棉花棉属，是重要的经济作物，盛产天然植物纤维，棉籽油和高蛋白，是纺织食品精细化工等行业的重要原材料，对干旱和盐度具有定程度的耐受性，研究棉花的氮代谢，不仅减肥减药，提高氮的有效利用率适应低胁迫后与空载棉花组比较，沉默组棉花总游离氨基酸质量分数显著增加表，在检测的种氨基酸中，除氨基酸质量分数下降外，其他氨基酸质量分数都不同程度上升进步分析发现，与空载棉花组盐胁迫前比较，各游离氨基酸质量分数和下降极为显著，达到了以下，而和升高极为显著。结论与讨论在棉花幼根花瓣和花蕊中表达活跃，对盐胁迫敏感，迅速上调表达。不仅仅控制的合成，而且在整个氨基酸代谢中起重要作用。可以快速沉默目的基因，研究其功能和对作物的生长发育的影响，沉默后，可能使棉花细胞完整性破坏，生长发育受到严重影响，叶子小而薄，植株矮小，生长迟缓，沉默使和表达下调并将进步研究在棉花氮代谢过程中的作用和机理。参考文献王慧飞，孙艳香，冯雪，等棉花精氨琥珀酸合成酶基因的克隆及表达分析中国农业科学，王慧飞，孙艳香，冯雪，等植物中尿素循环相关酶及代谢产物研究进展云南农业大学学报自然科学，王慧飞，刘琳琳，甄军波，刘迪，欧阳艳飞，迟吉娜，冯雪，张名，孙艳香，陈光病毒诱导的精氨琥珀酸合成酶基因沉默对棉花氮代谢的影响东北林业大学学报，基金河北省科技重点研发计划项目河北省自然科学基金项目河北省科技支撑计划子课题河北省农林科学院创新工程项目。表盐胁迫后沉默棉花幼苗多胺质量分数导出到注表中数据为平均值