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探讨如何制作和准备植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体(细胞学论文) 探讨如何制作和准备植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体(细胞学论文)

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《探讨如何制作和准备植物乳杆菌素BM-1单克隆抗体(细胞学论文)》修改意见稿

1、“.....孔加入酶标板,温育,弃去孔内液体,洗涤次后于室温晾干。孔板中每孔加入显色液,温育。每孔加入终止液,使用酶标仪检测波长下的吸光值值。结果判定检测孔值大于或等于倍阴性值的最高抗体稀释倍数为检测样品抗体的滴度。细胞融合及阳性细胞筛选于融合前向最佳免疫小鼠脾脏白和牛血清白蛋白制备得到人工抗原和人工抗原,用于后续免疫试验动物。人工抗原动物免疫将人工抗原按蛋白只小鼠的量与等体积的完全弗氏佐剂混合,皮下注射初次免疫只无特定病原体级级的雌性小鼠。每隔加强次免疫,按照蛋白只小鼠的量共加强次,之后进行眼眶取血,采用间接酶联免疫吸附试验测其血清效价。间接酶联免疫吸附试验检测抗体滴探讨如何制作和准备植物乳杆菌素单克隆抗体细胞学论文乳杆菌素单克隆抗体......”

2、“.....小鼠骨髓瘤细胞食品质量与安全北京实验室保存,鼠单抗亚型鉴定试剂盒公司。其他试剂均为分析纯。仪器与设备型恒流电泳仪北京仪器厂,酶标测定仪公司,电子天平试验证实,植物乳杆菌能够代谢产生种对单核细胞增生李斯特菌屎肠球菌大肠杆菌沙门氏菌志贺氏菌等都具有定抑菌效果的细菌素蛋白,命名为植物乳杆菌素。由于植物乳杆菌素对多种食源性致病剂,近年来在食品保藏和抑菌类药物开发等行业的应用受到极大的关注。由乳酸菌代谢所产的细菌素被称为乳酸菌素,是种安全的蛋白类物质,同时可抑制单核细胞增生李斯特氏菌金黄色葡萄球菌幽门螺杆菌和沙门氏菌等致病菌以及腐败菌的生长。乳酸乳球菌素和乳酸片球菌素是目前大规模商业化应用的乳酸菌细菌素,已经被多个国家和地区允许作为食品添加剂,应用在奶酪牛奶制品果汁和罐头等摘要目的制备植物乳杆菌素单克隆抗体。方法合成植物乳杆菌素蛋白并制备偶联抗原,免疫小鼠......”

3、“.....并筛选阳性杂交瘤细胞。筛选得到阳性杂交瘤细胞后,进行小鼠腹水制备,并纯化植物乳杆菌素单克隆抗体。结果植物乳杆菌素人工抗原免疫小鼠后,通过细胞融合筛选得到株能稳定分泌植物乳杆菌素单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名,免疫球蛋白亚型均为代方法。而细菌素纯化率低是细菌素自身或结合载体蛋白免疫试验动物的主要缺点,之前成功的经验大多是采用合成的细菌素生产多克隆抗体或者单克隆抗体。等合成的乳链球菌素免疫兔子制备细菌素多克隆抗体,得到抗体的滴度约为∶。等用合成的植物乳杆菌素免疫兔子制备多克隆抗体,得到抗体的滴度约为∶,均远低于本研究制备的细菌素单克隆抗体的滴度。本研究同样采用合成的面菌落总数。目前,已经报道多种由植物乳杆菌代谢产生的细菌素应用于食品微生物污染控制。例如,植物乳杆菌素,是种由植物乳杆菌产生的,具有抗单增李斯特菌作用的细菌素,在其端含有的段保守序列......”

4、“.....能够显著抑制多种食源性致病微生物。植物乳杆菌产生的抗菌肽,对黑曲霉匍匐根霉总状毛霉和产黄青类型的阳性杂交瘤细胞株。植物乳杆菌素单克隆抗体的纯化将得到的杂交瘤细胞扩大培养,注射成年小鼠腹腔,诱发腹水,获取腹水。经间接酶联免疫吸附试验检测,腹水效价为。采用辛酸硫酸铵法进行单克隆抗体的纯化试验,经蛋白纯化,蛋白质量浓度,分析纯度达到。采用电泳检测纯化的植物乳杆菌素单克隆抗体,结果如图。获得清晰的条蛋白带,分别为单克隆抗体的重链和轻链。注是预度。结果分析间接酶联免疫吸附试验检测小鼠血清效价采用制备的乳酸菌素人工抗原免疫小鼠,免疫次后于后分别检测只小鼠血清中乳酸菌素抗体效价,结果如表所示。其中号小鼠血清中乳酸菌素抗体效价最高,血清稀释倍数达到时值为,显著大于号小鼠的......”

5、“.....进行阳性细胞筛选,并采用酶联免疫吸附试验检测筛选的单克探讨如何制作和准备植物乳杆菌素单克隆抗体细胞学论文物乳杆菌素制备人工抗原后免疫小鼠,并分离小鼠脾细胞进行细胞融合,筛选得到株能够稳定分泌植物乳杆菌素单克隆抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞免疫小鼠诱发腹水,抗体滴度在∶以上。本研究为进步建立基于免疫学的植物乳杆菌素定量检测方法奠定研究基础。王欢,张红星,金君华,谢远红植物乳杆菌素单克隆抗体的制备北京农学院学报,探讨如何制作和准备植物乳杆菌素单克隆抗体细胞学论文疫吸附法检测细菌素。将乳酸乳球菌素包被于酶标板,并用亲和纯化的抗乳链菌肽抗体进行检测。为了减少非特异性结合,在酶标板上涂层吐温。建立的酶联免疫吸附试验对纯乳酸乳球菌素更敏感,为研究细菌素的产生及其在食品货架期中的抗菌活性提供种工具细菌素抗体的产生为细菌素的检测和定量提供特异和敏感的方法......”

6、“.....后于腹腔收集腹水。取腹水与磷酸盐缓冲液混匀后,逐滴加入辛酸,磁力搅拌,静臵。用滤纸过滤得到上清液加入体积的磷酸盐缓冲液,并向液体中缓慢加入硫酸铵,磁力搅拌,使硫酸铵达到,静臵,条件下离心,弃上清,将沉淀用磷酸盐缓冲液溶解并在条件下透析去除硫酸铵,冷冻干燥纯化的单克隆抗体,并于种腐败真菌具有抑菌效果,并且在实验室条件下能提高小麦的储藏时间。关于细菌素的定量分析方法,目前主要有微量滴定法比浊法和免疫学方法等。前种方法更多的用于检测细菌素的活性,而免疫学方法用于定量检测细菌素蛋白的含量。等建立的直接竞争性酶联免疫吸附试验检测结果表明,使用小鼠来源的乳酸乳球菌素单克隆抗体的检测限明显高于使用多克隆抗体的检测限。等利用酶联免蛋白......”

7、“.....本课题组从天然发酵食品中分离得到株产乳酸菌素的植物乳杆菌,抑菌活性分析表明,植物乳杆菌素对多种食源性革兰氏阳性和阴性致病菌均具有良好的抑菌作用。将其应用于冷鲜肉中微生物污染的控制研究中,发现植物乳杆菌素能够显著抑制冷鲜肉中单增李斯特菌的污染,并且有效降低冷鲜肉细胞产生抗体的效价。细胞进行次孔板的筛选,结果如表所示。共筛选得到株呈阳性的杂交瘤细胞,分别是孔细胞,阳性率为。选取株阳性细胞连续培养代,有限稀释法进行次筛选,结果如表所示。其中株阳性细胞稳定性较好,按照吸光值大小最终筛选得到株效价较高的单克隆细胞株和。单克隆细胞亚类鉴定选取筛选得到的株单克隆细胞株和,进行亚型鉴定分析,结果如表所示。和细胞株均为储存。采用核酸蛋白定量仪......”

8、“.....加热。制备凝胶,分离胶,浓缩胶。将凝胶臵入电泳槽,向电泳槽加入电泳缓冲液,电泳,染色后采用光密度分析法检测蛋白探讨如何制作和准备植物乳杆菌素单克隆抗体细胞学论文中的液体,使用磷酸盐缓冲液洗涤次,于每孔中加入封闭液,孵育。弃去孔中的液体,使用含有吐温磷酸盐缓冲液洗涤次,于每孔中加入杂交瘤细胞上清,孵育。弃去孔中的液体,使用吐温磷酸盐缓冲液洗涤次,每孔中加入用辣根过氧化物酶标记的抗,孵育。弃去孔中的液体,使用吐温磷酸盐缓冲液洗涤次,每孔中加入显色底物,显色。酶标仪波长下检测吸光值。植物乳杆菌素单克隆抗体注射免疫原加强免疫。断颈处死小鼠,分离小鼠脾脏,轻轻刮取脾细胞。取同时培养的人骨髓瘤细胞,两者按∶比例混合,缓慢加入聚乙醇,进行两种细胞的融合,使其充分反应后,用培养基洗遍,最后溶于培养基中,于培养箱中培养。将培养板中液体换为培养基......”

9、“.....中,终浓度为。取包被缓冲液,加入到孔板,于包被过夜,弃去孔内液体,洗涤次后于室温晾干。每孔加入封闭液小牛血清,温育,弃去孔内液体,洗涤次并于室温晾干。将待测血清用稀释液,从倍稀释液开始进行连续的倍梯度稀释,直到稀释倍数为倍。于孔板中每孔加入不同稀释度的血清,并且将阴性血清做阴性对照,稀释液做空白对照,用于消除公司,台式冷冻离心机公司,微量分光光度计公司。方法植物乳杆菌素抗原制备根据研究,按照植物乳杆菌素的氨基酸序列,合成植物乳杆菌素成熟肽,全序列为。并委托上海强耀生物技术有限公司将合成的植物乳杆菌素分别偶联钥孔血蓝蛋都具有定的抑菌效果,且热稳定性良好,在范围内均具有良好的抑菌活性,相对于乳酸乳球菌素在食品防腐保鲜领域具有更为广阔的应用前景。植物乳杆菌素作为种新型的类乳酸菌素,目前限制其在食品保鲜应用中存在的最大问题是......”

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