1、变性，变性，退火温度或，延伸，个循环，再延伸，保存。扩增产物在的琼脂糖中国瓜菜，赵洪海，袁辉，武侠，等山东省根结线虫的种类与分布莱阳农学院学报，龙海波，孙艳芳，白成，等海南省象耳豆根结线虫的鉴定研究热带作物学报，卓侃，廖金铃植物线虫分子鉴定研究进展植物保护，马艳粉，郝志云，肖春，等南方根结线虫对不同寄主植物侵染能力的比较安徽农业科学，胡先奇，杨艳丽，廖金铃，等根结线虫种及种群致病性的聚类分析华中农业大学学报，张怀军，赵志祥，陈绵才象耳豆根结线虫对个品种番茄生长的影响华南农业大学学报，刘军，章鹏，宋银花，等葡萄抗根结线虫资源筛选河北林业科技，赵楠，顾沛雯，李嘉泓，张乐宁夏永宁葡萄育苗圃根结线虫鉴定中国果树，基金宁夏重点研发计划项目。宁夏永宁。

2、酒葡萄种植基地。近年来，随着当地葡萄栽培面积的扩大，根结线虫病扩散蔓延迅速发生逐年增加，尤其在育苗圃中最为严重，导致葡萄苗木的质量下研究热带作物学报，卓侃，廖金铃植物线虫分子鉴定研究进展植物保护，马艳粉，郝志云，肖春，等南方根结线虫对不同寄主植物侵染能力的比较安徽农业科学，胡先奇，杨艳丽，廖金铃，等根结线虫种及种群致病性的聚类分析华中农业大学学报，张怀军，赵志祥，陈绵才象耳豆根结线虫对个品种番茄生长的影响华南农业大学学报，刘军，章鹏，宋银花，等葡萄抗根结线虫资源筛选河北林业科技，赵楠，顾沛雯，李嘉泓，张乐宁夏永宁葡萄育苗圃根结线虫鉴定中国果树，基金宁夏重点研发计划项目。宁夏永宁葡萄育苗圃根结线虫鉴定研究果树园艺论文。不同葡萄品种苗木感病症。

3、备用。观察苗木根部症状，根据根结的有无判断苗木是否发病。选择具有代表性的病害品种，观察苗木的感病症状并拍照。形态学鉴定雌虫和龄幼虫的形态特征观察参考刘维志的方法，将获得的雌虫和龄幼虫制成临时玻片，于显微镜下观察根结线虫的整体虫态口针特征和中食道球特征等形态特征。花生根结线虫的鉴定。龄幼虫蠕虫形，头冠明显前端平，口针纤细，中食道球近似圆形，尾尖尖圆，尾部透明区末端无明显界限图版。雌虫，模板，。扩增程序是预变性，变性，退火温度，延伸，个循环，再延伸，保存。扩增产物在的琼脂糖凝胶上检测，凝胶成像仪上拍照。根结线虫特异性检测根据根结线虫扩增的结果，选用南方根结线虫的特异性引物及花生根结线虫的特异性引物进行检验，。反应体系引物各，模板，。扩增程序是。

4、明显，口针基球扁圆形，中食道球近似为圆形图版。雌虫会阴花纹卵圆形，背弓高，近似梯形，顶部平，背纹紧密，背面和侧面的线纹呈平滑的波浪形，阴门与肛门之间无线纹图版。鉴定为南方根结线虫。花生结线虫。年首次在美国加州的葡萄上发现根结线虫，随后葡萄根结线虫危害日趋加重，在世界各地的葡萄园中均有发生，逐渐引起了许多学者的关注和重视。在我国，李长存等发现，根结线虫侵害葡萄植株后，会造成葡萄园减产，严重时在以上。研究发现，根结线虫在葡萄根内寄生为害，会刺激根系形成大量根结，严重干扰根系的正常生理过程，造成根部畸形植株生长缓慢枯萎等症状。根结线虫已成为葡萄苗木生产上的大障碍，因此准确鉴定葡萄根结线虫的种类至关重要。宁夏永宁县是贺兰山东麓葡萄酒产区中最大的酿。

5、。根结线虫特异性检测根据扩增的结果，分别用特异性引物和对根结线虫的种类进行特异性检测。结果表明，目标条带位臵在的，经引物可以扩增出的目标条带，与南方根结线虫致图。目标条带位臵在的，经引物可以扩增出的目标条带，与花生根结线虫致图。由此得出为害葡萄育苗圃中苗木的根结线虫是南方根结线虫和花生根结线虫，其中南方根结线虫为优势种群，占根结线虫群体的。图不同葡萄品种中根结线虫的扩增结果图南方根结线虫特异性引物扩增结果不同葡萄品种中根结线虫的鉴定结果试验方法葡萄根结线虫病的调查按照随机取样的原则采集个葡萄品种的苗木，每个品种采集株苗木，共采集株苗木。采集时挖取整株苗木，将苗木装入自封袋内，标记葡萄品种采样时间等信息，带回实验室后用清水冲洗干净臵于冰箱中。

6、萄育苗圃根结线虫染能力差异明显，其中南方根结线虫的侵染能力最强。胡先奇等研究发现，根结线虫对寄主植物的侵染能力与根结线虫种间的致病性差异有关。由此可知，南方根结线虫对葡萄具有较强的致病性。此外，影响根结线虫侵染能力的原因还与寄主植物品种间的抗性有关。如张怀军等研究发现，根结线虫对不同番茄品种侵染能力的差异与番茄品种间的抗性密切相关。然而目前关于根结线虫对葡萄致病性机理及抗性机制的研究较少，需进步探究。本研究还发现，抗砧号免疫根结线虫病，这与刘军等发现的抗砧号等砧木品种抗根结线虫病的结果致，为选育抗根结线虫病的葡萄苗木提供了基础。但由于时间的局限性，本研究仅以永宁县葡萄根结线虫病害调查为基础，鉴定了该地区育苗特征为依据进行鉴定。赵洪海等通过。

7、表现不同，如代表性葡萄品种美乐，感病后地上部表现出枝梢短弱叶片卷曲的症状，宁夏永宁葡萄育苗圃根结线虫鉴定研究果树园艺论文。由此可知，南方根结线虫对葡萄具有较强的致病性。此外，影响根结线虫侵染能力的原因还与寄主植物品种间的抗性有关。如张怀军等研究发现，根结线虫对不同番茄品种侵染能力的差异与番茄品种间的抗性密切相关。然而目前关于根结线虫对葡萄致病性机理及抗性机制的研究较少，需进步探究。本研究还发现，抗砧号免疫根结线虫病，这与刘军等发现的抗砧号等砧木品种抗根结线虫病的结果致，为选育抗根结线虫病的葡萄苗木提供了基础。但由于时间的局限性，本研究仅以永宁县葡萄根结线虫病害调查为基础，鉴定了该地区育苗圃中根结线虫的种类，而对整个贺兰山东麓葡萄酒产区中根。

8、出种目标条带图在葡萄品种美乐品丽珠无核翠宝夏黑爱神玫瑰中，均只扩增出种目标条带图。根结线虫特异性检测根据扩增的结果，分别用特异性引物和对根结线虫的种类进行特异性检测。结果表明，目标条带位臵在的，经引物可以扩增出的目标条带，与南方根结线虫致图。目标条带位臵在的，经引物可以扩增出的目标条带，与花生根结线虫致图。由此得出为害葡萄育苗圃中苗木的根结线虫是南方根结线虫和花生根结线虫，其中南方根结线虫为优势种群，占根结线虫群体的。图不同葡鉴定研究果树园艺论文。试验方法葡萄根结线虫病的调查按照随机取样的原则采集个葡萄品种的苗木，每个品种采集株苗木，共采集株苗木。采集时挖取整株苗木，将苗木装入自封袋内，标记葡萄品种采样时间等信息，带回实验室后用清水冲洗干。

9、结线虫的种类分布与所占的数量比率还无法判定。今后，对产区内其他葡萄种植地的形态特征受寄主与环境等多种因素的影响，仅依靠形态学鉴定会导致鉴定结果有误。近年来，分子生物学鉴定技术发展迅速，因其具有高效性精确性的特点，广泛应用于根结线虫的鉴定工作。如龙海波等通过的序列分析以及构建系统发育树的方法鉴定出海南省蔬菜作物上的根结线虫是象尔豆根结线虫。但由于分子生物学鉴定技术起步较晚，致使已获得序列的根结线虫种类较少，且部分序列在根结线虫种内及种间存在定范围的变异。因此，将形态学鉴定与分子生物学鉴定相结合，可有效避免因鉴定方法单而产生的误差，使鉴定结果更加准确可靠。如等通过雌虫会阴花纹和特异性鉴定技术鉴定出土耳其中部地区危害茄子的病原线虫是埃塞俄标条带。

10、育苗圃根结线虫鉴定研究果树园艺论文。主要试剂和仪器所用试剂和蛋白酶，上海远慕生物科技有限公司和，北京全式金生物技术有限公司所用引物为生工生物工程上海股份有限公司合成。所用仪器电泳仪，北京市仪器厂体视显微镜，麦克奥迪实业集团中国有限公司正臵荧光显微镜，日本奥林巴斯有限公司梯度仪，公司凝胶成像仪，公和，北京全式金生物技术有限公司所用引物为生工生物工程上海股份有限公司合成。所用仪器电泳仪，北京市仪器厂体视显微镜，麦克奥迪实业集团中国有限公司正臵荧光显微镜，日本奥林巴斯有限公司梯度仪，公司凝胶成像仪，公司。根结线虫扩增利用根结线虫的和基因间序列通用引物对不同葡萄品种中的根结线虫进行扩增。反应体系引物各，西拉阳光玫瑰红芭拉蒂大青贝达霞多丽中，均扩增。

11、臵于冰箱中备用。观察苗木根部症状，根据根结的有无判断苗木是否发病。选择具有代表性的病害品种，观察苗木的感病症状并拍照。形态学鉴定雌虫和龄幼虫的形态特征观察参考刘维志的方法，将获得的雌虫和龄幼虫制成临时玻片，于显微镜下观察根结线虫的整体虫态口针特征和中食道球特征等形态特征。主要试剂和仪器所用试剂和蛋白酶，上海远慕生物科技有限公司圃中根结线虫的种类，而对整个贺兰山东麓葡萄酒产区中根结线虫的种类分布与所占的数量比率还无法判定。今后，对产区内其他葡萄种植地是否存在根结线虫为害的问题，需进步调查研究。参考文献陈慧，王会芳，陈绵才象耳豆根结线虫的研究进展贵州农业科学，李长存，王万信，张云山，等葡萄根结线虫病的发生规律与防治研究山东农业科学，刘维志植物。

12、根结线虫的形态特征和雌虫会阴花纹，鉴定出山东省葡萄上的病原线虫是南方根结线虫。然而，根结线虫的形态特征受寄主与环境等多种因素的影响，仅依靠形态学鉴定会导致鉴定结果有误。近年来，分子生物学鉴定技术发展迅速，因其具有高效性精确性的特点，广泛应用于根结线虫的鉴定工作。如龙海波等通过的序列分析以及构建系统发育树的方法鉴定出海南省蔬菜作物上的根结线虫是象尔豆根结线虫。但由于分子生物学鉴定技术起步较晚，致使已获得序列的根结线虫种类较少，且部分序列在根结线虫种内及种间存在定范围的变异。因此，将形态学鉴定与分子生物学鉴定相结合，可有效避免因鉴定方法单而产生的误差，使鉴定结宁夏永宁葡萄育苗圃根结线虫鉴定研究果树园艺论文胶上检测，凝胶成像仪上拍照。宁夏永宁葡。

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