1、温度温度稳定性及金属离子稳定性。最适值测定条件为反应温度，值梯度从来源于瘤胃厌氧真菌基因组的个木聚糖酶基因和，并比较分析其酶学特性。首先根据大肠杆菌基因编码偏好，合成可在大肠杆菌中表达的木聚糖酶基因序列，然后采用同源重组的方法将各序列分别插入载体中，在大肠杆菌宿主菌中异源表达，并研究其酶学特性，结果成功表达出来源于厌氧真菌的个木聚糖酶基因。测定其酶学性质发现，种木聚糖酶的反应最适值均为木聚糖酶的反应最适温度为，其余种木聚糖酶的反应最适温度均为种木聚糖酶具有广泛的温度稳定性和稳定性金属离子显著促进木聚糖酶活性，而则有明显的抑制作用种木聚糖酶降解山毛榉木聚糖的厌氧真菌来源的木聚糖酶比酶活相对较低，可能是因为种木聚糖酶为真核蛋白，在大肠杆菌的原。

2、病毒蛋白基因都是用大肠杆菌表达，因为大肠杆菌基因背景和表达调控过程清楚，培养周期短。本研究中，大肠杆菌表达的厌氧真菌来源的木聚糖酶比酶活相对较低，可能是因为种木聚糖酶为真核蛋白，在大肠杆菌的原核表达过程中，没有经过完整修饰导致酶活下降。等把来源于人纤溶酶原的结构域与链激酶的末端融合，分别进行真核表达和原核表达，结果表明原核表达的融合蛋白没有生物活性，而毕赤酵母表达的融合蛋白由于端发生糖基化而具有生物功能瘤胃厌氧真菌木聚糖酶基因的表达与酶学特性研究畜牧养殖论文筛选高产木聚糖酶菌株构建多效复合酶优化培养及工艺条件定向改造酶学性质等。但如何获得低成本高催化效率的木聚糖酶仍然是实际工业生产的主要瓶颈问题。瘤胃中存在许多能够高效降解木质纤维素的厌氧。

3、蛋白质分子量分别为和，其表达产物以胞内可溶性蛋白和不溶性包涵体形式存在。瘤胃厌氧真菌木聚糖酶基因的表达与酶学特性研究畜牧养殖论文。按照体积的接种量把种子液转接进入大体系的液体培养基，培养菌液时，加入终浓度为，再诱导表达。葡萄糖醛酸苷酶乙酰木聚糖酯酶和酚酸酯酶。木聚糖酶广泛应用于酿酒食品饲料等行业，高效合理地利用木质纤维素废弃物，能够促进环境友好的能源转化。酶活性质的测定木聚糖酶活力测定采用年等建立的法。使用法蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。在最适反应和温度下，每分钟降解木聚糖生成木糖所需的酶量定义为个酶活力单位，比酶活是单位重量蛋白质所具有的酶活力单位数。试验中所有种类的木聚糖底物浓度均为。以燕麦木聚糖为底物，测定木聚糖酶最适值稳定性最适。

4、著差异，木聚糖酶对罗望子木葡聚糖的降解效率显著低于其他底物。图种木聚华，秦爱建，许金俊，等鸡干扰素基因的克隆及其在原核和真核系统中的表达中国预防兽医学报，马玉萍，薛天涵，成艳芬，朱伟云瘤胃厌氧真菌木聚糖酶基因的表达与酶学特性研究畜牧与兽医，基金国家自然科学基金江苏省带路技术合作项目。主要试剂和培养基聚合酶与核酸外切酶购自公司卡那霉素胶回收试剂盒质粒抽提试剂盒和试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司和蛋白质分子量标准购自公司苯甲基磺酰氟购自索莱宝公司燕麦木聚糖购自公司低黏度小麦阿拉伯木聚糖中黏度小麦阿拉伯木聚拉伯木聚糖的降解能力低于山毛榉木聚糖。底物结构中木糖所占比例侧链糖基类型决定了种木聚糖酶对底物的降解能力。目前纤维素酶基因花生条纹外壳。

5、聚糖酶活力测定采用年等建立的法。使用法蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。在最适反应和温度下，每分钟降解木聚糖生成木糖所需的酶量定义为个酶活力单位，比酶活是单位重量蛋白质所具有的酶活力单位数。试验中所有种类的木聚糖底物浓度均为。以燕麦木聚糖为底物，测定木聚糖酶最适值稳定性最适温度温度稳定性及金属离子稳定性。最适值测定条件为反应温度，值梯度从至，反应时间。稳定性测定条件为选择最适值及最适值左右两个点，孵育，隔定时间取样测定剩余酶活。最适温度测定条件为中。结果与分析木聚糖酶序列分析与克隆表达种木聚糖酶基因和片段长度分别为和，其理论蛋白分子量分别为和理论等电点分别为理论不稳定系数分别为，都为稳定类蛋白。种厌氧真菌木聚糖酶的表达见图，显示，种木聚糖酶。

6、核表达过程中，没有经过完整修饰导致酶活下降。等把来源于人纤溶酶原的结构域与链激酶的末端融合，分别进行真核表达和原核表达，结果表明原核表达的融合蛋白没有生物活性，而毕赤酵母表达的融合蛋白由于端发生糖基化而具有生物功能。戴建华等发现鸡干扰素基因在原核表达产物以包涵体形式存在并无抗病毒活性，而在真核细胞表达产物抗病毒效价却很高。结论本研究在大肠杆菌中成功表达了种来自瘤胃厌氧真菌的木聚糖酶基因，这种酶具有良好的值和温度稳定性，对山毛榉木聚糖的亲和力最高，瘤胃厌氧真菌木聚糖酶基因的表达与酶学特性研究畜牧养殖论文导结束后以的速度离心弃上清收集菌体，菌体用裂解缓冲液洗遍。将菌体重悬至左右，加入体积的重悬液，冰上超声裂解细菌，超声结束后加入体积的重悬液。。

7、真菌，相较于其他途径制得的木聚糖酶活性会更高，因而其更具有开发潜能。本研究发现，木聚糖酶和都具有良好的值和温度稳定性，这特性在酶工艺生产中占据很大的优势，还可以通过分析基因序列对定向改造酶的稳定性提供参考。能提高种木聚糖酶的酶活并且效果显著，可能是由于作为辅因子增加了金属离子结合位点的亲和力使蛋白更加稳定，等以枯草杆菌丝氨酸蛋白酶为模能够促进环境友好的能源转化。金属离子对种木聚糖酶活性的影响金属离子对种木聚糖酶活性的影响见图。对木聚糖酶的酶活具有明显促进作用的金属离子有图，具有明显抑制作用的金属离子有对木聚糖酶的酶活具有明显促进作用的金属离子有，具有明显抑制作用的金属离子有对木聚糖酶的酶活具有明显促进作用的金属离子有，具有明显抑制作用的金。

8、定性检测条件为在酶促反应体系中分别加入终浓度为的金属离子，在值为温度为下反应。对照组为不含任何金属离子的酶促反应体系。按照体积的接种量把种子液转接进入大体系的液体培力显著高于其他底物。本研究成功表达了种来源于厌氧真菌的木聚糖酶，其良好的温度和稳定性具有潜在的工业应用价值。关键词动物营养厌氧真菌大肠杆菌异源表达木聚糖酶半纤维素是自然界中除纤维素外含量最为丰富的可再生植物多糖，木聚糖是半纤维素主要组成成分，增加对植物木聚糖的降解效率能有效提高木质纤维素的利用效率。木聚糖由木糖分子以，木糖苷键连结构成主链。异质多糖的木聚糖侧链含有种类各异的糖基，如阿拉伯呋喃糖苷基葡糖醛酸基或乙酰基等。木聚糖酶是类可以将木聚糖降解成低聚木糖或木糖的复合酶系，主要。

9、属离子有对木聚糖酶的酶活具有明显促进作用的金属离子有，具有明显抑制作用的金属离子有。对种木聚糖酶的酶活促进作用最强，最高达到倍促进作用大肠杆菌中表达的木聚糖酶基因序列，然后采用同源重组的方法将各序列分别插入载体中，在大肠杆菌宿主菌中异源表达，并研究其酶学特性，结果成功表达出来源于厌氧真菌的个木聚糖酶基因。测定其酶学性质发现，种木聚糖酶的反应最适值均为木聚糖酶的反应最适温度为，其余种木聚糖酶的反应最适温度均为种木聚糖酶具有广泛的温度稳定性和稳定性金属离子显著促进木聚糖酶活性，而则有明显的抑制作用种木聚糖酶降解山毛榉木聚糖的能力显著高于其他底物。本研究成功表达了种来源于厌氧真菌的木聚糖酶，其良好的温度和稳定性具有潜在的工业应用价酶活性质的测定。

10、的稳定性提供参考。能提高种木聚糖酶的酶活并且效果显著，可能是由于作为辅因子增加了金属离子结合位点的亲和力使蛋白更加稳定，等以枯草杆菌丝氨酸蛋白酶为模型发现定浓度的能有效提高酶的动力学稳定性。曾霖霖等发现对菠萝蛋白酶的酶活和热稳定性都具有促进作用。本研究中的种木聚糖酶对除山毛榉木聚糖外其他底物降解效率低，可能是由于这种木聚糖酶作用的糖苷键单或者没有经过更完整的表观遗传修饰导致功能不，反应时间。稳定性测定条件为选择最适值及最适值左右两个点，孵育，隔定时间取样测定剩余酶活。最适温度测定条件为，反应温度为，反应时间。温度稳定性测定条件为选择最适温度及最适温度左右两个点，即木聚糖酶在温度下孵育，木聚糖酶在温度下孵育，隔定时间测定剩余酶活。金属离子稳。

11、包括内切，木聚糖酶木糖苷酶呋喃阿拉伯糖苷酶葡糖苷酸酶具有明显的酶活促进作用。本研究获得的种木聚糖酶具有潜在的工业应用价值，为探索瘤胃中粗纤维降解资源提供参考。参考文献石军，陈安国木聚糖酶的应用研究进展中国饲料，温博婷，孙丽超，王凤忠，等微生物木聚糖酶的研究进展及其在食品领域的应用生物产业技术，曾霖霖，黄惠华不同金属离子对菠萝蛋白酶活性及热稳定性的影响食品工业，戴建华，秦爱建，许金俊，等鸡干扰素基因的克隆及其在原核和真核系统中的表达中国预防兽医学报，马玉萍，薛天涵，成艳芬，朱伟云瘤胃厌氧真菌木聚糖酶基因的表达与酶学特性研究畜牧与兽医，基金国家自然科学基金江苏省带路技术合作项目。摘要旨在表达全。由于种木聚糖酶都来自于糖苷水解酶第家族，而该家族。

12、解后的菌液以的速度离心，收集上清与镍珠在下结合后，用含咪唑的裂解缓冲液梯度洗脱。收集各个梯度的洗脱液用检测目的蛋白，选择不具有杂蛋白的洗脱液用的超滤管浓缩换液至储存养基，培养菌液时，加入终浓度为，再诱导表达。诱导结束后以的速度离心弃上清收集菌体，菌体用裂解缓冲液洗遍。将菌体重悬至左右，加入体积的重悬液，冰上超声裂解细菌，超声结束后加入体积的重悬液。裂解后的菌液以的速度离心，收集上清与镍珠在下结合后，用含咪唑的裂解缓冲液梯度洗脱。收集各个梯度的洗脱液用检测目的蛋白，选择不具有杂蛋白的洗脱液用的超滤管浓缩换液至储存开发潜能。本研究发现，木聚糖酶和都具有良好的值和温度稳定性，这特性在酶工艺生产中占据很大的优势，还可以通过分析基因序列对定向改造酶。

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