，许多学者已经发现了内生真菌代谢滤液经旋转蒸发仪浓缩，用，以盐酸水苏碱为对照品，采用雷氏盐剩余比色法测定总酚含量测定取样品粉末适量，加蒸馏水回流提取，滤液经旋转蒸发仪浓缩，用蒸馏水定容至，以没食子酸为对照品，采用法测定总黄酮含量测定取样品粉末适量，按料液比∶加入乙醇，超声提取，滤过，加乙醇定容至，以芦丁为对照品，采用亚硝酸钠硝酸铝比色法测定。内生真菌分子生物学鉴定取内生真菌发酵后离心，取菌丝冷冻干燥。取菌丝于管内按照提取试剂盒说明书的步骤叶底珠内生真菌提取物的抗炎镇痛和抗氧化活性研究论文全文从夹竹桃内生真菌中分离得到，该生物碱对乙酰胆碱酯酶活性有明显抑制作用。内生真菌广泛分布于许多植物物种中，许多菌株可以生产多种活性天然产物。据统计，新发现的真菌天然产物中，约有半来自内生真菌，包括大量具有生物活性的天然化合物。目前有关叶底珠内生真菌的研究，主要集中在内生真菌的分离鉴定以及其抑菌活性的研究，尚未见有关内生真菌在抗氧化以及抗炎镇痛方面的报道。本课题组采集特殊的生态环境黄河角洲贝壳堤的叶底珠，分离其中的内生真菌，筛选出具有抗氧化抗炎镇痛作用的活性菌株，为开发黄河角洲具有水冲洗次，升汞消毒，无菌水冲洗次，用灭菌滤纸吸干多余水分，无菌刀片将叶底珠切成的小块段。将上述组织块分别臵于加青霉素的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，每皿块，恒温培养，同时将上述经表面消毒的材料不做任何处理，直接种植于培养基中，培养，检查表面消毒是否彻底。培养后及时采用尖端菌丝挑取法，挑取形态不同的菌丝或菌落移种到新鲜培养基上进行纯化，从野生叶底珠的根茎和叶中分别分离得到株内生真菌菌株，纯化后转接到斜面上保存备用。植物内生真菌是指在植物体内定植，但不引检测。目的条带进行纯化并测序，将所有序列在数据库中进行比对。维生素，天津百伦斯生物技术有限公司，批号，规格阿司匹林肠溶片大同市利群药业有限责任公司，批号，规格片盐酸水苏碱江苏永健医药科技有限公司，批号，规格瓶没食子酸合肥博美生物科技有限责任公司，规格瓶，标准级芦丁合肥博美生物科技有限责任公司，规格瓶，标准级甲苯批号冰醋酸批号，均购自国药集团化学试剂有限公司。真菌基因组提取试剂盒，购自成都兰博生物活性内生真菌的化学成分含量的测定选择生物活性较高的株内生真菌菌株和的代谢产物醋酸乙酯提取物进行检测。所测试菌株的结果见表，内生真菌菌株代谢产物提取物的总黄酮与总酚含量最高，达到代谢产物提取物总生物碱含量最高，达到。活性实验发现，内生真菌菌株提取物的抗氧化效果最好，推测菌株能有效富集抗氧化成分，它的提取物中总黄酮和总酚含量最高，说明这者的含量可能与抗氧化活性有关。其中抗炎效果最好的内生真菌菌株的提取物，其生物碱含量显著高于其他真菌的提取物，推测生物生真菌的筛选药物评价研究，张海龙产黄酮银杏内生菌的分离，鉴定与发酵条件优化研究南京南京农业大学，。抗氧化实验结果通过法对株内生真菌发酵产物的抗氧化活性进行筛选，只有株表现出不同的抗氧化活性。菌株和代谢产物醋酸乙酯提取物对自由基均有较强的清除活性，其中和的活性最强，对的清除率分别为。见表。表叶底珠内生真菌的抗氧化活性测试对甲苯致小鼠耳肿胀的影响甲苯能明显诱导小鼠耳肿胀，在所测试的株菌株中，有株对小鼠耳肿胀有不同程明，处于生物多样性丰富生长竞争激烈的环境下的内生真菌产生活性次生代谢产物的可能性较大。由于叶底珠内生真菌生长在黄河角洲贝壳堤岛，同时具有特殊生境和内生菌的特点，其代谢产物支持特殊生态系统中真菌的适应和生存，已成为寻找新活性药源的重要资源库。从真菌系统进化的角度来看，植物与其内生真菌是协同进化的，特定的内生真菌可能在与宿主植物长期协同进化中由于遗传信息的传递获得了宿主植物的特定代谢途径，从而使内生真菌产生与宿主相同或相似的生理活性成分，。叶底珠根部入药，其生物碱类化合物含量较高种除活性，其中和的活性最强，对的清除率分别为。见表。表叶底珠内生真菌的抗氧化活性测试对甲苯致小鼠耳肿胀的影响甲苯能明显诱导小鼠耳肿胀，在所测试的株菌株中，有株对小鼠耳肿胀有不同程度的抑制作用。结果如表所示，阿司匹林片代谢产物醋酸乙酯提取物对甲苯诱导的小鼠耳肿胀有显著的抑制作用，菌株和的作用强度最显著，接近阳性对照药。表叶底珠内生真菌的抗炎活性测试对醋酸致小鼠扭体反应的影响醋酸能明显诱导小鼠疼痛，在所测试的株菌株中，有株对醋酸诱活性实验发现，内生真菌菌株提取物的抗氧化效果最好，推测菌株能有效富集抗氧化成分，它的提取物中总黄酮和总酚含量最高，说明这者的含量可能与抗氧化活性有关。其中抗炎效果最好的内生真菌菌株的提取物，其生物碱含量显著高于其他真菌的提取物，推测生物碱可能是内生真菌代谢产物提取物发挥抗炎作用的有效物质成分。表叶底珠内生真菌对小鼠扭体反应的抑制作用相关性分析见表，总生物碱含量和抗炎活性总酚含量和抗氧化活性间达到了显著相关。同时，种活性物质含量与镇痛活性的相关系数为，总黄酮含量与抗氧化叶底珠内生真菌提取物的抗炎镇痛和抗氧化活性研究论文全文的抑制作用。结果如表所示，阿司匹林片代谢产物醋酸乙酯提取物对甲苯诱导的小鼠耳肿胀有显著的抑制作用，菌株和的作用强度最显著，接近阳性对照药。表叶底珠内生真菌的抗炎活性测试对醋酸致小鼠扭体反应的影响醋酸能明显诱导小鼠疼痛，在所测试的株菌株中，有株对醋酸诱导的疼痛有不同程度的抑制作用。结果如表所示，阿司匹林片代谢产物醋酸乙酯提取物对醋酸诱导的小鼠扭体反应有显著抑制作用。菌株作用最强，接近阳性对照药。叶底珠内生真菌提取物的抗炎镇痛和抗氧化活性研究论文全文存在利益冲突参考文献赵名君，李俊南，曹森，等叶底珠抑菌活性内生真菌的筛选及鉴定山东化工，范延辉，王君，王进宾黄河角洲贝壳堤放线菌多样性及抑菌活性土壤通报王晓敏，万景瑞，史冠莹，等株具糖苷酶抑制活性抗氧化和抗细菌活性的香椿内生真菌的筛选与鉴定食品与发酵工业，张启浩，雷雨露，朱晓兰，等中药竹黄不同提取部位抗炎镇痛活性的研究山东化工倪力军，赵需需，马骏，等基于腰痛宁胶蜜的中药有效部位组方抗炎镇痛活性评价与筛选中草药，王艳红，朱艳萍，杨信东，等温郁金抗炎抗氧化活性动物生产许可证号为鲁。在温度，光照下条件下正常饲养后开始实验。方法内生真菌的分离纯化采取新鲜健康无病症的叶底珠完整植株，用自来水冲洗干净，臵于滤纸上自然风干。分别将叶底珠的根茎叶等切成约的小段，臵于干净的培养皿中。按下列程序进行表面消毒乙醇漂浸洗，无菌水冲洗次，升汞消毒，无菌水冲洗次，用灭菌滤纸吸干多余水分，无菌刀片将叶底珠切成的小块段。将上述组织块分别臵于加青霉素的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，每皿块，恒温培养，同时将上述经表面消毒的较多，主要含有以叶萩型生物碱为代表的多种抗炎镇痛抗氧化活性物质，研究发现其内生真菌也具有相应的生物活性。从植物内生真菌中获得具有抗菌活性的天然产物不仅可以突破植物资源缺乏再生周期长等缺陷，而且利用工业化发酵可以实现天然活性化合物大规模低成本无污染的生产。内生真菌被认为是天然抗菌化合物的种新资源，具有高效环保的特点。目前，本课题组正在对本研究筛选到的抗炎镇痛抗氧化活性菌株进行次生代谢产物的研究，上述活性菌株是否能够产生叶萩型生物碱化合物，还有待进步研究确证。利益冲突所有作者均声明导的疼痛有不同程度的抑制作用。结果如表所示，阿司匹林片代谢产物醋酸乙酯提取物对醋酸诱导的小鼠扭体反应有显著抑制作用。菌株作用最强，接近阳性对照药。本课题组已有的研究表明从药用植物叶底珠不同的部位分离得到的内生真菌具有定的组织专性，其中根部和茎片的内生真菌在数量和种群组成上均较丰富，与叶中的内生真菌存在明显差异。本研究发现活性菌株的分布也具有定的组织专性，实验筛选得到的具有显著抗炎抗氧化活性的内生真菌均分离自根和叶片中，而从茎中分离得到的菌株只有筛选出活性。有研究性的相关系数为。由此可见提取物的抗氧化活性主要来自总酚，提取物的抗炎活性主要来自总生物碱。表叶底珠内生真菌提取物的含量测定生物活性内生真菌的鉴定选取具有显著生物活性的株内生真菌菌株进行鉴定，对内生真菌进行提取和扩增，产物进行电泳检测。目的条带进行纯化并测序，将所有序列在数据库中进行比对。抗氧化实验结果通过法对株内生真菌发酵产物的抗氧化活性进行筛选，只有株表现出不同的抗氧化活性。菌株和代谢产物醋酸乙酯提取物对自由基均有较强的料不做任何处理，直接种植于培养基中，培养，检查表面消毒是否彻底。培养后及时采用尖端菌丝挑取法，挑取形态不同的菌丝或菌落移种到新鲜培养基上进行纯化，从野生叶底珠的根茎和叶中分别分离得到株内生真菌菌株，纯化后转接到斜面上保存备用。生物活性内生真菌的化学成分含量的测定选择生物活性较高的株内生真菌菌株和的代谢产物醋酸乙酯提取物进行检测。所测试菌株的结果见表，内生真菌菌株代谢产物提取物的总黄酮与总酚含量最高，达到代谢产物提取物总生物碱含量最高，达到叶底珠内生真菌提取物的抗炎镇痛和抗氧化活性研究论文全文酸水苏碱江苏永健医药科技有限公