骨细胞外基质结构出现异常在骨关节炎疾病模型的小鼠中，自噬相关的蛋白等表达水平会明显下调，并且抑制自噬会进步促进小鼠软骨的退化，。因此，引起的软骨细胞增殖活性下调微小对软骨细胞增殖和自噬活性的调节及其作用机制骨科平。结果发现，与转染阴性对照的细胞相比，转染模拟物的实验组细胞中蛋白表达水平显著下降，进步说明可以直接调控的表达水平。另外，结果还发现自噬相关蛋白的表达水平下调，而蛋白表达水平上调，这也进步证实过表达可以抑制软骨细胞的自噬活性。此外，还发现，尽管细胞内蛋白表达水平没有明显改变，但其磷酸化的水平显著下降，这提示过蛋白亚细胞定位细胞及蛋白的表达预测结合位点。微小对软骨细胞增殖和自噬活性的调节及其作用机制骨科。靶向般通过与靶基因的互补配对实现对下游靶基因表达的调控。为了验证是否能够直接靶向，使用工具预测了与的结合位点，结果表明与差异用检验分析，数据以表示，为差异有显著性意义。结果过表达抑制软骨细胞的增殖活性为了研究对体外培养的细胞系增殖活性的影响，在对照组细胞中转染阴性对照，实验组细胞转染模拟物。在培养及时收集细胞，用试剂盒检测细胞增殖活性。结果发现，培养细胞增殖率分别为对照组，实验组培养细胞增殖率分时间及地点实验于年月至年月在北京大学深圳医院实验室完成。材料软骨肉瘤细胞系细胞系，美国培养基胎牛血清，青霉素链霉素胰蛋白酶和转染试剂反转录试剂盒购买自美国公司，购自美国公司鼠源抗抗体鼠源抗抗体购自美国公司，鼠源抗核苷酸，常常与靶基因的结合介导基因沉默，调控下游靶基因的表达和功能。已有的研究表明，许多的表达水平与骨关节炎的发病呈现正相关，这些通常通过调控软骨细胞的活性及型胶原硫酸软骨素等细胞外基质的表达和分泌，影响软骨变性和骨关节炎的发病进程。其中，被发现在骨关节炎软骨组织中表达上调，而且在关节炎软骨细胞外基质的降解过程中发挥了重要的作用，但其参与骨关节，然而在骨关节炎疾病进展中，调控软骨细胞自噬的分子机制还不太清楚。此次研究利用体外培养的细胞系，探究了对软骨细胞增殖和自噬的调控作用，以及对软骨细胞信号通路的影响。材料和方法设计细胞学实验观察。微小对软骨细胞增殖和自噬活性的调节及其作用机制骨科。实时荧光定量检测细胞内基质金属蛋白酶，和的表达细胞接种于孔板中，培养国公司。牛血清白蛋白，多聚甲醛磷酸盐缓冲液，购自上海生工。细胞增殖检测试剂盒购自日本同仁化学。是真核生物细胞内类非编码，长度个核苷酸，常常与靶基因的结合介导基因沉默，调控下游靶基因的表达和功能。已有的研究表明殖活性。结果发现，培养细胞增殖率分别为对照组，实验组培养细胞增殖率分别为对照组实验组，。从结果中可以看出，转染的细胞增殖活性显著低于对照组，该结果提示在细胞中表达的上调会抑制软骨细胞的增殖图。时间及地点实验于年月至年月在北京大学深圳医院实验室完成。材料软骨肉瘤细胞系细胞系，美国培养基胎牛微小对软骨细胞增殖和自噬活性的调节及其作用机制骨科炎发病的深入机制还缺少研究。已有的研究发现软骨细胞的自噬在骨关节炎发病过程中发挥了重要的作用，然而在骨关节炎疾病进展中，调控软骨细胞自噬的分子机制还不太清楚。此次研究利用体外培养的细胞系，探究了对软骨细胞增殖和自噬的调控作用，以及对软骨细胞信号通路的影响。材料和方法设计细胞学实验观察。微小对软骨细胞增殖和自噬活性的调节及其作用机制骨科实验检测蛋白亚细胞定位细胞接种于预先铺有盖玻片的孔板中，培养待细胞完全贴壁后，分别转染阴性对照或模拟物。转染后，用多聚甲醛溶液固定细胞，随后用透化细胞膜，并用封闭。室温孵育鼠源抗抗体，孵育偶联的羊抗鼠荧光抗，最后用含有细胞核染料的封片剂封固。是真核生物细胞内类非编码，长度证。马泽涛，曾晖，王德利，翁鉴，冯松微小与软骨细胞增殖和自噬的关系中国组织工程研究，基金深圳市科技计划项目，项目负责人曾晖。结合位点预测使用在线工具，物种选项选择，选择以名进行分析比对，从预测靶基因序列中分析与配对位点。主要观察指标软骨细胞的增殖活性细胞内基质金属蛋白酶表达蛋白亚细胞定位细胞，分别转染对照或模拟物。随后收集细胞，使用总提取试剂盒裂解细胞并纯化细胞总。取总，用反转录试剂盒进行反转录扩增。最后使用进行荧光定量反应，扩增程序设臵为预变性扩增反应解离。使用作为内参，反应使用引物序列见表。表实时荧光定量实验引物免疫荧光许多的表达水平与骨关节炎的发病呈现正相关，这些通常通过调控软骨细胞的活性及型胶原硫酸软骨素等细胞外基质的表达和分泌，影响软骨变性和骨关节炎的发病进程。其中，被发现在骨关节炎软骨组织中表达上调，而且在关节炎软骨细胞外基质的降解过程中发挥了重要的作用，但其参与骨关节炎发病的深入机制还缺少研究。已有的研究发现软骨细胞的自噬在骨关节炎发病过程中发挥了重要的作用清，青霉素链霉素胰蛋白酶和转染试剂反转录试剂盒购买自美国公司，购自美国公司鼠源抗抗体鼠源抗抗体购自美国公司，鼠源抗抗体兔源抗抗体兔源抗抗体购自美国公司。模拟物阴性对照购自美及蛋白的表达预测结合位点。统计学分析数据均使用软件进行统计，组间差异用检验分析，数据以表示，为差异有显著性意义。结果过表达抑制软骨细胞的增殖活性为了研究对体外培养的细胞系增殖活性的影响，在对照组细胞中转染阴性对照，实验组细胞转染模拟物。在培养及时收集细胞，用试剂盒检测细胞增微小对软骨细胞增殖和自噬活性的调节及其作用机制骨科号通路，导致磷酸化水平下调。在调控细胞自噬活性的过程中发挥了重要的作用。的失活化会引起自噬关键蛋白的活性降低，进而抑制自噬小体的形成和自噬溶酶体的组装，。综上所述，研究发现了对软骨细胞增殖和自噬的重要调控作用，而其作用机制与信号通路有关。然而是否可以作为骨关节炎疾病诊断的分子标记或者治疗靶点还需要进步动物实验及临床试验的验展中发挥了重要的作用。已有的研究表明，在骨关节炎疾病中，些炎性因子如白细胞介素可以促进软骨细胞表达基质金属蛋白酶，然而是如何调控基质金属蛋白酶表达还需深入的研究。此次研究还发现，可以直接靶向蛋白的，抑制的表达。有报道在骨关节炎疾病进展中表达水平下调，并且在提高表达水平能够促进软骨细胞自噬活性，抑制细胞自噬，缓解关节炎疾病进程有可能是通过抑制软骨细胞自噬活性调控的。图过表达抑制细胞增殖活性图过表达促进和的表达图过表达减少细胞中的点状定位图与结合位点处的序列比对软骨细胞外基质的降解是软骨退化的主要原因。在骨关节炎疾病进展过程中，许多因素都会导致软骨细胞外基质的代谢失衡，。以往研究表明，基质金属蛋白酶可以直接参与型胶原蛋白及达影响了的激活图。讨论软骨退化是骨关节炎主要发病机制，但影响软骨细胞退化的遗传因素还不是特别清楚。在过去的研究中已经发现，在骨关节炎组织中表达水平上调，并能够通过促进软骨细胞外基质的降解影响关节炎的发病进程，此外，也有研究发现下调能够促进软骨细胞分泌型胶原，然而对软骨细胞增殖活性的影响还没有深入的研究。此次研究发现，过表达的软骨细胞的第核苷酸序列完全互补配对，形成个位点，其值为图，该分析提示很可能是的下游靶基因。影响信号通路为了研究是否可以通过直接靶向影响其表达，进而影响信号通路，利用蛋白质免疫印迹实验检测了各组细胞及蛋白的表达水为对照组实验组，。从结果中可以看出，转染的细胞增殖活性显著低于对照组，该结果提示在细胞中表达的上调会抑制软骨细胞的增殖图。结合位点预测使用在线工具，物种选项选择，选择以名进行分析比对，从预测靶基因序列中分析与配对位点。主要观察指标软骨细胞的增殖活性细胞内基质金属蛋白酶表达抗体兔源抗抗体兔源抗抗体购自美国公司。模拟物阴性对照购自美国公司。牛血清白蛋白，多聚甲醛磷酸盐缓冲液，购自上海生工。细胞增殖检测试剂盒购自日本同仁化学。统计学分析数据均使用软件进行统计，组间