骨髓间充质干细胞图各组骨髓间充质干细胞中脯氨酰寡肽酶相对表达量图脯氨酰寡肽酶过表达载体测序图骨髓间充质干细胞内脯氨酰寡肽酶慢病毒过表达图荧光显微镜观察骨髓间充质干细胞定位图苏木精伊红染色观察大鼠肝组织病理变化图各组大鼠肝组织转化生长因子蛋白表达该研究证实过表达之前的研究表明单独骨髓间充质干细胞移植改善损伤肝脏的效果有限。存在于肝细胞和肝内细胞内，而肝细胞与细胞均是肝损伤修复的关键细胞，其参与促进出生后肝脏成熟肝切除后肝再生等生理过程。还参与肝损伤时炎症反应，其水平可作为人类肝硬化严重程度的指标，同时它是抗肝纤维化内源性小分子肽乙酰基丝氨酰天冬氨酰赖氨酰脯氨酸生成的关键酶，。等研究发现水平不足在肝纤维化的发生和进展中起重要作用，而活性下降是内源性水平下降的重要原因。还有研究表明，通过抑制转化生长因子信号转导和诱导过氧化物酶体增殖剂激活受体过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞修复肝纤维化模型大鼠实验医学论文孔加入总蛋白上样，进行电泳，待溴酚蓝电泳达凝胶底部时将凝胶中的蛋白质湿转至硝酸纤维素膜上，再将硝酸纤维素膜臵于含脱脂奶粉的中，室温下摇床轻摇进行封闭，加入大鼠抗转化生长因子单抗，孵育过夜，再与偶联抗室温孵育，充分洗膜，显色，暗室曝光，软件对检测结果进行灰度分析，灰度值代表蛋白相对表达量。主要观察指标各组大鼠血清谷丙转氨酶白蛋白透明质酸酶型前胶原水平苏木精伊红染色观察各组大鼠肝组织病理变化和肝纤维化程度各组大鼠肝组织中转化生长因子蛋白的表达水平。统计学分析所有数据采用表示，用的作用，并阐明其在肝纤维化治疗中的部分机制。骨髓间充质干细胞的形态培养可见散在分布贴壁生长的细胞集落生长，换液后细胞生长迅速，后细胞多为双突起的长梭形或扁平形的成纤维样细胞，见图。传代后细胞增殖迅速，般两天可传代。过表达骨髓间充质干细胞体系的建立转染后荧光显微镜可观察到慢病毒组和空载体组骨髓间充质干细胞中有绿色荧光蛋白表达，后表达量最高，见图。检测转染后目的基因表达转染后，荧光显微镜下观察慢病毒转染情况，然后采用法检测各组骨髓间充质干细胞内表达，结果显示慢病毒组骨髓间充质干细胞中水平为正常骨髓间充质干细胞组和空病毒组果表明，过表达脯氨酰寡肽酶能够显著提高骨髓间充质干细胞对肝纤维化的修复能力。关键词干细胞肝纤维化脯氨酰寡肽酶过表达骨髓间充质干细胞引言肝纤维化是各种原因导致的肝损伤和炎症，在组织修复过程中肝脏细胞外基质代谢失衡，发生异常增多和过度沉积的病理过程，最终可导致更严重的后果肝硬化。近年来的证据表明，纤维化的发生是高度动态过程，同时具有进展和逆转潜能，因此采取有效的治疗手段可阻止甚至逆转肝纤维化进程。干细胞移植是目前治疗肝损伤的个新的研究方向，骨髓间充质干细胞具有自我更新和多系横向分化的潜能，在体外可诱导分化为肝细胞，在体内可归巢到损伤肝脏，但既往的研究表明其作用有摘要背景如何能使移植后的间充质干细胞更好地存活并发挥其功能是目前间充质干细胞研究的热点之。目的探索过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞对大鼠肝纤维化的修复作用，并探讨相关机制。方法只雄性大鼠随机选取只进入正常对照组，其余只大鼠采用皮下多点注射氯化碳花生油溶液方法制备大鼠肝纤维化模型，造模成功后被随机分为模型损伤组骨髓间充质干细胞组过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞组，经尾静脉分别注射生理盐水骨髓间充质干细胞过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞。周后将大鼠处死，收集各组大鼠下腔静脉血，检测肝功能肝纤维化指标摘取肝脏行苏木精伊红染色观察病理变化，荧光显微镜下观察细胞定位金及安徽省教育厅高校科学研究重点项目的资助。所有作者声明，经费支持没有影响文章观点和对研究数据客观结果的统计分析及其报道。利益冲突文章的全部作者声明，在课题研究和文章撰写过程中不存在利益冲突。机构伦理问题实验方案经蚌埠医学院动物实验伦理委员会批准，批准号为。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会关于动物伦理与福利的作者指南共识和本地及国家法规。写作指南该研究遵守国际医学期刊编辑委员会学术研究实验与报告和医学期刊编辑与发表的推荐规范。文章查重文章出版前已经过专业反剽窃文献检测系统进行次查重。文章外审文章经小同行外审专家双盲外审，同行评议认为文章符合期刊发稿宗旨。生物统计学声明体作者授权人签署了版权相关协议。开放获取声明这是篇开放获取文章，根据知识共享许可协议署名非商业性使用相同方式共享条款，在合理引用的情况下，允许他人以非商业性目的基于原文内容编辑调整和扩展，同时允许任何用户阅读下载拷贝传递打印检索超级链接该文献，并为之建立索引，用作软件的输入数据或其它任何合法用途。郝晓娜，张英杰，李玉云，许涛过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞修复肝纤维化模型大鼠中国组织工程研究，基金蚌埠医学院科技发展基金，项目负责人张英杰安徽省教育厅高校科学研究重点项目，项目负责人张英杰。实验方法慢病毒过表达载体的制备根据提供的大鼠基因序列在于肝细胞和肝内细胞内，研究证实通过间接或直接作用参与肝纤维化进程，例如可抑制肝星状细胞活化通过水解调节轴，调控肝内巨噬细胞和肝星状细胞功能等，但目前关于作用机制的研究较少。该研究建立转基因的骨髓间充质干细胞体系，并将转染成功后的骨髓间充质干细胞注入肝纤维化模型大鼠体内，观察其治疗氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的作用，并阐明其在肝纤维化治疗中的部分机制。过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞修复肝纤维化模型大鼠实验医学论文。经费支持该文章接受了蚌埠医学院科技发展基金及安徽省教育厅高校科学研究重点项目的资助。所有作者声明，经费下观察显示过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞组可见绿色荧光细胞，说明骨髓间充质干细胞成功在大鼠肝脏定植肝组织苏木精伊红染色显示，个细胞移植组肝纤维化程度明显改善，且过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞组肝脏病理更接近于正常个细胞移植组转化生长因子蛋白表达较模型损伤组均有明显降低，且过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞组降低更明显结果表明，过表达脯氨酰寡肽酶能够显著提高骨髓间充质干细胞对肝纤维化的修复能力。关键词干细胞肝纤维化脯氨酰寡肽酶过表达骨髓间充质干细胞引言肝纤维化是各种原因导致的肝损伤和炎症，在组织修复过程中肝脏细胞外基质代谢失衡过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞修复肝纤维化模型大鼠实验医学论文章统计学方法已经通过蚌埠医学院生物统计学专家审核。文章版权文章出版前杂志已与全体作者授权人签署了版权相关协议。开放获取声明这是篇开放获取文章，根据知识共享许可协议署名非商业性使用相同方式共享条款，在合理引用的情况下，允许他人以非商业性目的基于原文内容编辑调整和扩展，同时允许任何用户阅读下载拷贝传递打印检索超级链接该文献，并为之建立索引，用作软件的输入数据或其它任何合法用途。郝晓娜，张英杰，李玉云，许涛过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞修复肝纤维化模型大鼠中国组织工程研究，基金蚌埠医学院科技发展基金，项目负责人张英杰安徽省教育厅高校科学研究重点项目，项目负责人张英荧光显微镜下观察感染效率，最终选取感染复数值为。将定数量的状态良好的骨髓间充质干细胞接种于孔板，在培养箱中过夜，随后按照产品说明书进行感染操作，加入慢病毒或空病毒感染细胞，培养箱中培养后吸去病毒稀释液，换入新鲜培养基，培养箱中培养后检测过表达效率并通过荧光显微镜观察慢病毒感染情况。动物模型的制备与分组只雄性大鼠随机选取只入选正常对照组，其余只采用氯化碳花生油溶液皮下多点注射法制备慢性肝纤维化模型，剂量为，每周和周腹腔注射，共注射周。过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞修复肝纤维化模型大鼠实验医学论文。经费支持该文章接受了蚌埠医学院科技发展髓间充质干细胞组大鼠肝血管血窦及肝小叶区域可见绿色荧光细胞，见图，说明骨髓间充质干细胞成功在大鼠肝定植。苏木精伊红染色发现与模型损伤组比较，骨髓间充质干细胞组病理变化虽有所好转，但肝索仍紊乱，成纤维细胞增生不明显，肝细胞坏死脂肪变仍严重，见图而过表达骨髓间充质干细胞组肝小叶肝细胞排列整齐，小叶结构明显修复，肝细胞坏死脂肪变明显好转，见图。摘要背景如何能使移植后的间充质干细胞更好地存活并发挥其功能是目前间充质干细胞研究的热点之。目的探索过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞对大鼠肝纤维化的修复作用，并探讨相关机制。方法只雄性大鼠随机选取只进入正常对照组，其余只大鼠筛选和构建携带和绿色荧光蛋白基因的慢病毒及空载病毒，经酶切电泳及测序验证，证实慢病毒过表达载体构建成功后，进行慢病毒大规模包装与滴定。大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养在无菌条件下分离大鼠股骨与胫骨，剪去两端，使用注射器吸取培养基，轻轻将骨髓腔内容物吹入培养瓶，加入分离液分离单个核细胞，接种于含体积分数为胎牛血清的培养基中，当细胞融合时，用胰蛋白酶消化传代，细胞传至第代备用。过表达骨髓间充质干细胞体系的建立按照吉玛基因重组慢病毒操作手册，选取不同的病毒感染复数进行感染预实验，持没有影响文