1、“.....实验步骤目的基因的合成蓝色荧光蛋白基因片段是由金斯特生物公司合成。载体的构建从金思特公司合成带有基因的质粒，片段两端分别带和酶切位点通过双酶切将的片段连接进入载体形成载体通过单酶切将中间载体中的片段连接进入质粒，形成载体。目的片段与载体的连接取目的基因相应的载体于连接。感受态细胞的制备从新倒的没有加入任何抗生素的平板上挑取新活化的大肠杆菌菌株，接种于液体培养基中，下振荡培养左右，直至对数生长后期。将该菌悬液以的比例接种于液体培养基中，振荡培养至对数前期左右。冰上放置，然后分装至个的离心管中，离心，弃上清......”。

2、“.....置冰，离心，弃上清。用体积的致敏缓冲液冰预冷悬浮细胞，置冰加入冷冻保护剂终浓度为，置冰。分装成管速置液氮中冷冻，然后于冰箱贮存。重组质粒转化大肠杆菌从液氮中取出大肠杆菌感受态细胞，放在冰块上数分钟，等待其融解将连接产物与感受态细菌∶的比例混合，轻轻摇晃，混匀后冰上放置半小时左右。在的水浴中热冲击，置冰块间。加入液体培养基含葡萄糖，不含氨苄青霉素，摇荡预培养。离心。倒掉部分上清，剩余左右菌液，均匀涂布于含有氨苄青霉素使用浓度为的平板，正放待菌液被培养基吸收完全后导致培养基，培养。阳性克隆的筛选和验证挑取单菌落于加有氨节青霉素的液体培养基中培养......”。

3、“.....按照公司的般质粒提取试剂盒说明书所示步骤提取质粒。具体步骤略电泳检测所提取的质粒，用原始质粒和做对照，出现滞后条带的即为阳性重组质粒，可进步通过或者酶切进行验证。将筛选出的阳性质粒送公司测序。转基因家蚕系的建立注射质粒的提取按照公司超纯质粒提取试剂盒说明书提取注射质粒。具体步骤略利用型紫外分光光度计检测提取的注射质粒的浓度与纯度。载体导，此处不再重复。测序经过指定公司的测定，发现代家蚕中确实存在基因序列，由此可以确定，代中也含有基因序列，只是性状没有表现出来。结论与讨论目的基因可能已表达如果目的基因已经表达但只是微量的表达......”。

4、“.....也就是没有获得我们想要的蓝色茧。目的基因可能未表达如果目的基因未表达，那么我们将探究其未表达的原因。对其可能的原因，我们也进行了初步的推测可能表达质粒和表达宿主菌的选择的影响，表达质粒不是万能的，每种质粒表达的基因是有限的，而且宿主菌的不同也影响表达水平，可以尝试不同的质粒宿主菌组合。序列本身的问题如读框突变引起的提前终止等。实验总结家蚕基因组的构架已经问世也有些年许，运用家蚕转基因技术的最终目的无非就是增强蚕茧的经济性状。通过本实验，我们可以看到转基因彩色茧的宽广潜力，国内目前已经有了绿色荧光茧丝，我们相信会有更多色彩的茧丝会应运而生。实验中......”。

5、“.....载体的构建扩增检测筛选等等，每步都至关重要。虽然对每个过程我们都很仔细认真，实验结果却并不是我们所预料的那样完美，没有获得具有蓝色荧光效应的蚕茧。然而，值得庆兴的是通过后面系列检测，我们在家蚕代中找到了目的基因片段，这说明对转基因技术的运用还是比较正确的。塞翁失马，焉知非福，吸取了本次实验的经验，我们坚信下次实验定会完成的更好。参考文献刘建忠，熊远著，蒋思文，等转基因动物研究新进展生物技术通报,代方银，鲁成，夏庆友，等家蚕新突变型斑油基因的连锁定位研究蚕业科学,生物反应器庞有志，李银聚，邓雯......”。

6、“.....安志兴绿色荧光蛋白融合基因在小鼠早期胚胎表达的研究西北农林科技大学,吴爱忠，唐克轩，潘俊松，等转基因培育抗除草剂水稻遗传学报,赵昀，张峰，陈秀，等用绿色荧光蛋白进行转基因蚕研究高技术通讯,高正琴，邢华，李厚达基因打靶技术及其研究进展上海实验动物科学,种彩色平面茧的生产方法及其所生产的彩色平面茧桂慕燕，叶向群，羿红，等不同种类绢丝昆虫总直接导入改变家蚕遗传性的研究摘要许松发蚕桑业天然彩色丝蚕品种选育过关方志出版社,致谢本实验在众多人的帮助下终于得以顺利完成，有种如释重负的感觉。感谢老师给予的悉心指导和帮助。恩师开朗豁达的胸襟，高尚正直的作风......”。

7、“.....无不深刻影响着我的人生观和价值观，不仅是我学习上的导师，更是我心灵上的导师，让我受益终生。在此，谨向恩师致以最崇高的敬意和最诚挚的感谢,感谢师兄，师姐，在我实验最困难的时刻，引领我走出困境远离迷茫。感谢同学在实验技术上给予大力支持。感谢师弟师妹们，在我懒惰的时候，你们敢于拼搏的精神鞭策着我不断前行。感谢学院的各位老师，你们播散的知识让我在次次挫折中寻找到希望。谢谢每位帮助过自己的人，因为你们，我才能得以顺利登上彼岸。入家蚕受精卵把已交配的雌蛾碧波放置于上了浆的蚕连纸上,让它在黑暗的环境下产卵。大约每分钟收集次蚕卵......”。

8、“.....用的甲醛蒸气消毒，接着再用显微注射仪进行注射注射操作应该在蚕卵产下后期间完成。注射质粒按供体质粒∶辅助质粒∶物质的量之比混合至终浓度为,每粒蚕卵注射。注射后立即用无毒胶水封闭注射孔,经甲醛再次消毒后,置于相对湿度以上的条件下催青直至蚕卵孵化,蚕卵孵化后按注射载体种类分区饲养。荧光筛选将代的蚕蛾采用自交或回交制种,获得的代蚕卵幼虫蛹或蛾在宏观体视荧光显微镜下检测,筛选出发荧光的转基因阳性个体,并以蛾圈为单位进行单独饲育。结果与分析构建成功的质粒重组克隆获取的最终注射质粒，如下图图载体阳性质粒的验证通过跑胶实验......”。

9、“.....荧光筛选结果图白光图荧光通过荧光筛选，获得了转基因家蚕系。代饲养结果图碧波正常茧图转基因茧经过代饲养后，转基因家蚕所结的茧和正常碧波茧在外观颜色上没有多大区别，目的基因的性状没有表现。再验证由于本次实验的原本目的是想获得转基因有色茧，通过系列实验过后，所得的实验结果与原目的获取蓝色荧光茧相不符，为了探讨问题的根源，特又做了系列检验工作。家蚕代基因组的提取取碧波蚕蛹加液氮捣碎，研磨成粉末加抽提缓冲液和蛋白酶终浓度为，移入离心管于温度下培育小时。加平衡酚，轻轻晃动左右，使其混合均匀，然后离心，取上清液。加等体积的平衡酚和氯仿的混合液......”。