。但对细菌的值的大小与细菌形成生物膜的能力并没有相关性，即并不是生物膜的值越高，就越高。含亚抑菌浓度的培养基下培养的生物膜，编码菌毛的毒力基因缺失的菌株形成生物膜的能力并没有降低型别菌株生成生物膜的能力与其他型别相比无明显差异。对试验菌株的值范围为，都表现为敏感，而值的范围为形成能力与第部分试验中各类标本的总体水平无差异，中痰液标本生物膜形成能力与第部分试验获得的痰液标本之间也无差异具有超粘特性的菌株产纤维素的菌株形成生物膜的能力并不比表型试验阴性的菌株强菌株对碳青霉烯类药物亚胺培南美罗培南厄他培南中的种甚至是三种药物表现出不同程度的敏感性下降或者耐药。同时发现在近几年中呈现明显的上升趋势，且主要集中在痰液标本。而总体的生物膜氨基糖苷类药物的总体耐药水平较接近，处于之间仅对碳青霉烯类药物亚胺培南的敏感性最好，总体耐药率仅为。体外生物膜形成能力的初步分析发现痰液标本来源的菌株形成生物膜的能力高于其他标本来源。株试验药率接近，对呋喃妥因的耐药率已高达，对包括头孢曲松头孢他啶在内的三代头孢菌素类甚至是酶抑制剂复合药物氨苄西林舒巴坦的耐药率也都在以上，仅对四代头孢菌素的头孢吡肟的敏感性较好对喹诺酮来药物和尿液占，创面占，其他标本如脓液引流液等共占病区分布主要以科室为主，占，其次为神经外科和脑外科，共占药物敏感性结果显示我院肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐量测定采用实时荧光定量的方法检测在细菌含不含浮游状态下含不含生物膜状态下的表达差异情况。结果株肺炎克雷伯菌主要分离自痰液，分离率为，其次为血液占，在中加入不同浓度梯度的，分析外排泵抑制剂对生物膜形成是否有抑制或者诱导促进的作用的方法检测外排泵基因的分布。温州医科大学硕士学位论文细菌不同状态下外排泵基因表达量在中加入不同浓度梯度的，分析外排泵抑制剂对生物膜形成是否有抑制或者诱导促进的作用的方法检测外排泵基因的分布。温州医科大学硕士学位论文细菌不同状态下外排泵基因表达量测定采用实时荧光定量的方法检测在细菌含不含浮游状态下含不含生物膜状态下的表达差异情况。结果株肺炎克雷伯菌主要分离自痰液，在中加入不同浓度梯度的，分析外排泵抑制剂对生物膜形成是否有抑制或者诱导促进的作用的方法检测外排泵基因的分布。温州医科大学硕士学位论文细菌不同状态下外排泵基因表达量在中加入不同浓度梯度的，分析外排泵抑制剂对生物膜形成是否有抑制或者诱导促进的作用的方法检测外排泵基因的分布。温州医科大学硕士学位论文细菌不同状态下外排泵基因表达量测定采用实时荧光定量的方法检测在细菌含不含浮游状态下含不含生物膜状态下的表达差异情况。结果株肺炎克雷伯菌主要分离自痰液，分离率为，其次为血液占，尿液占，创面占，其他标本如脓液引流液等共占病区分布主要以科室为主，占，其次为神经外科和脑外科，共占药物敏感性结果显示我院肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药率接近，对呋喃妥因的耐药率已高达，对包括头孢曲松头孢他啶在内的三代头孢菌素类甚至是酶抑制剂复合药物氨苄西林舒巴坦的耐药率也都在以上，仅对四代头孢菌素的头孢吡肟的敏感性较好对喹诺酮来药物和氨基糖苷类药物的总体耐药水平较接近，处于之间仅对碳青霉烯类药物亚胺培南的敏感性最好，总体耐药率仅为。体外生物膜形成能力的初步分析发现痰液标本来源的菌株形成生物膜的能力高于其他标本来源。株试验菌株对碳青霉烯类药物亚胺培南美罗培南厄他培南中的种甚至是三种药物表现出不同程度的敏感性下降或者耐药。同时发现在近几年中呈现明显的上升趋势，且主要集中在痰液标本。而总体的生物膜形成能力与第部分试验中各类标本的总体水平无差异，中痰液标本生物膜形成能力与第部分试验获得的痰液标本之间也无差异具有超粘特性的菌株产纤维素的菌株形成生物膜的能力并不比表型试验阴性的菌株强，编码菌毛的毒力基因缺失的菌株形成生物膜的能力并没有降低型别菌株生成生物膜的能力与其他型别相比无明显差异。对试验菌株的值范围为，都表现为敏感，而值的范围为，都表现为耐药。但对细菌的值的大小与细菌形成生物膜的能力并没有相关性，即并不是生物膜的值越高，就越高。含亚抑菌浓度的培养基下培养的生物膜的值比不含培养基培养的生物膜值都有不同幅度的提高，即亚抑菌浓度的对每株菌生物膜的形成能力都表现出不同程度的促进作用。另外，外排泵缺失的试验菌株比外排泵基因完整的试验菌株形成生物膜的值的水平低。细菌试验状态生物膜状态含浮游状态含生物膜状态下外排泵基因的表达量都比校准状态不含培养基的细菌浮游态温州医科大学硕士学位论文下高。结论本院临床分离的肺炎克雷伯菌标本来源主要来自于痰液，主要分离的科室是，对多种药物耐药情况严重，仅对碳青霉烯类药物保持较好的敏感性。痰液标本分离的肺炎克雷伯菌体外形成生物膜的能力最强，同时我院大部分分离自痰液，且此类耐药菌株逐年增多。菌株形成生物膜的能力与碳临床实验室标准化研究所耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌碳青霉烯敏感型肺炎克雷伯菌焦碳酸二乙酯脱氧核糖核苷三磷酸超广谱内酰胺酶厄他培南小时中介亚胺培南肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶鲁利亚培养基生物膜最低消除浓度美罗培南最低抑菌浓度分水解酪蛋白多位点序列分型多粘菌素聚合酶链反应实时荧光定量敏感秒敏感序列类型冰醋酸电泳缓冲液三羟甲基氨基甲烷温州医科大学硕士学位论文耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌体外生物膜形成特性和相关机制研究中文摘要目的研究近几年我院肺炎克雷伯菌在临床上的分布情况和耐药状况，分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌在体外形成生物膜的能力和特点，并探讨其生物膜形成的相关机制，为有效防治耐药菌生物膜相关性感染提供理论依据。方法回顾性调查年年间温州医科大学附属第医院临床分离的肺炎克雷伯菌的临床分布特征，分析其对临床常见药物的耐药状况，初步测定不同来源的菌株体外生物膜形成能力。耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药性检测采用琼脂稀释法检测碳青霉烯类药物亚胺培南美罗培南和厄他培南对菌株具体的最低抑菌浓度结果根据年的标准判读。菌株生物膜测定采用孔板结晶紫染色法测定菌株体外生物膜形成能力。菌株生物膜形成相关表型和基因型检测采用超粘表型试验和刚果红试验分析生物膜形成相关的细菌生长表型采用方法扩增菌株中的毒力基因，包括扩增并测序分析肺炎克雷伯菌的个管家基因，比对数据库获得菌株具体的型别。分析生物膜形成能力与上述各种表型基因型别的相关性。测定多粘菌素对菌株的值和生物膜最低消除浓度，值采用琼脂稀释法检测多粘菌素对菌株的值孔板培养生物膜，用不同浓度的多粘菌素处理预生成的生物膜，从而获得具体的。