某某医院检验科微生物与血库作业指导书

显微镜隔水式恒温培养箱超净工作台三洋牌二氧化碳培养箱台式离心机电子天平校准程序送市计量质量检测研究所校准操作步骤人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号版本修订号主题内容普通细菌培养鉴定操作规程生效日期第页共页血液骨髓脑脊液等标本按照培养目的增菌培养小时后盲目接种或待自动分析仪报警后接种。

接种以上增菌标本及其他临床标本用接种环取标本接种环划线血平板及其他选择性培养基上，培养过夜，观察结果。

涂片肉眼见细菌生长，取生长物涂片做革兰氏染色纯培养根据需要接种血平板巧克力中国蓝麦康凯或厌氧平板过夜培养以获得纯培养。

鉴定按照鉴定仪要求调配菌液浓度，细菌的鉴定见黑马微生物鉴定系统质量控制参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动生物参考区间血液，骨髓，脑脊液等无菌部位采取的标本未见细菌生长其他标本如大便，痰液为正常菌群或未见致病菌。

患者检验结果的可报告区间细菌鉴定到种或属菌群调查报告比例。

临床意义为医生提供病原学诊断，并为进步药敏实验提供依据。

人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号版本修订号主题内容尿液培养操作规程生效日期第页共页尿液培养操作规程检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。

患有泌尿系感染时，尿中的细菌数高于，以此作为诊断泌尿系感染依据。

原理使用黑马微生物鉴定系统，原理见鉴定系统操作规程。

标本要求标本类型中段尿液。

标本采集见标本采集手册标本储存和运输室温放置，室温运输并立即送检。

标本拒收状态非无菌方式采集的标本。

容器和添加剂类型使用灭菌器皿盛放标本，不加任何防腐剂。

试剂试剂名称革兰氏染液氧化酶试剂触酶血平板麦康凯平板相关生化试剂等试剂生产厂家珠海黑马生物技术有限公司包装规格试剂盒组成试剂龙胆紫液试剂碘溶液试剂脱色液试剂沙黄溶液仪器设备接种针接种环酒精灯黑马微生物鉴定系统显微镜隔水式恒温培养箱超净工作台三洋牌二氧化碳培养箱台式离心机电子天平校准程序送市计量质量检测研究所校准操作步骤人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号版本修订号主题内容尿液培养操作规程生效日期第页共页细菌的分离培养用接种环取标本接种于血平板及麦康凯琼脂培养基，培养过夜，观察结果。

菌落生长者做菌落计数，并挑取优势菌菌落做纯培养。

若初次分离菌落单且生长较多时可直接做鉴定涂片取菌落涂片做革兰氏染色，确认时或以及是球菌还是杆菌球杆菌。

细菌鉴定及药敏实验革兰氏阴性杆菌做氧化酶试验必要时做动力试验，氧化酶试验阳性或氧化酶试验阴性但不利用葡萄糖不产酸者使用非发酵鉴定测试板氧化酶试验阴性者则使用肠杆菌科细菌测试板革兰氏阳性球菌主要是成簇或四联排列，触酶试验阳性者接种葡萄球菌微球菌鉴定药敏测试板触酶试验阴性者则接种链球菌鉴定药敏测试板革兰氏阴性双球菌，氧化酶试验阳性者使用淋球菌鉴定药敏试剂盒测试。

鉴定按照鉴定仪要求调配菌液浓度，见黑马微生物鉴定系统全自动细菌鉴定药敏分析系统操作规程。

质量控制参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动生物参考区间正常人体膀胱中尿液无菌。

患者检验结果的可报告区间细菌鉴定到种或属，菌落计数高于。

临床意义为医生提供泌尿系感染的病原学诊断。

人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号版本修订号主题内容血液培养操作规程生效日期第页共页血液培养操作规程检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。

原理使用黑马微生物鉴定系统，原理见鉴定系统操作规程。

标本要求标本类型血液标本采集给患者用抗生素前抽取。

见标本采集手册标本储存和运原理和适用范围采用电热器加热精制双金属片热控温度原理。

具有钢板外壳和内箱，中填玻璃棉隔热等设计特点。

适用于中小实验室作干燥恒温培养等工作。

仪器工作条件电源功率接地良好桌面稳定环境条件防震通风。

技术参数温度调节范围室温加温度波动范围温度均匀性最大容量为操作步骤接通电源，调节温度旋钮至工作所需温度，观察温度计是否达到，多次微调后定位搁置工作物后关上箱盖，直到需取用时拿出放长假不工作前，应拔出电源插头，确保安全。

注意事项为确保培养目的实现，外插温度计应为合格品，并随时观察温度是否正确为确保仪器内钢制金属内壳与搁板不受腐蚀，酸碱试剂不得置于箱内箱壳必须有效接地，若有电感，应立即切断电源，检查排除故障仪器维护日常维护保持机外清洁，每月用消毒液清洗机内，经常注意温度变动定期期间核查按仪器设备管理程序进行，定期每年次其间次，主要了解温度恒定钢制内壳和搁板锈蚀状况等。

相关记录仪器使用登记表人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号版本修订号主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期第页共页结核分支杆菌培养仪操作维护规程技术参数物理参数高宽深周边应留空间左，后，右前重量没有测试管重量有测试管电气要求输入电压或输入电流最大输入频率散热功耗环境要求非操作状态温度湿度，操作状态人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号版本修订号主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期第页共页温度湿度，定位水平放置，避免阳光直射，避免发热装置海拔高度海拔，适用范围适用于该仪器操作手册所列的分支杆菌的培养鉴定和药敏。

工作原理若接种的培养管中有分支杆菌生长，管中的营养成分和氧气将不断被消耗，培养管中的荧光显示剂将随着管内氧气浓度的变化而发生反应。

旦培养管内氧气被利用，管内荧光指示剂将在特定光源的激活下释放荧光。

荧光强度记忆探测器将每隔连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。

试剂试剂名称培养肉汤，营养添加剂，抑菌剂。

试剂生产厂家美国生物技术有限公司包装规格试剂盒组成培养肉汤，营养添加剂，抑菌剂操作步骤标本的采集和处理吸的痰液加的的氢氧化钠消化分钟，取消化液离心分钟。

弃去上清液，加入的无菌液，温和混匀。

再离心，弃去上清液，加入无菌液充分混匀。

胃液脑脊液骨膜液胸膜液和膀胱穿刺尿等标本要先去污染处理。

在管标签上直接标记，在无菌条件下用滴管加入营养添加剂在无菌条件下加入抗菌素混合溶液。

加入处理好的标本注意标本量超过会增加污染机会。

旋紧管盖适当混匀。

将培养管置入全自动分支杆菌培养仪孵育培养。

荧光强度记忆探测器每隔连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。

阳性标本进行涂片，确认为分枝杆菌进行药敏试验后发出报告。

样品要求标本类型深部痰液。

人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号版本修订号主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期第页共页标本采集见标本采集手册标本储存和运输室温放置，室温运输并立即送检。

标本拒收状态非无菌方式采集的标本。

药敏试验试剂及试剂制备药敏试剂盒为冻干试剂，保存，溶解后可保存个月。

建议溶解后立即使用。

试剂制备方法分别在每抗菌素试剂瓶内加入灭菌蒸馏水或去离子水后混匀，得到以下各试剂浓度。

阳性管管的制备阳性管的阳性培养物。

如阳性管超过阳性的培养物，则需立即振荡管后，取均匀培养物用生理盐水稀释稀释转种。

阳性对照管的制备取未接种的培养管并除去管内肉汤。

将该空培养管标记为阳性对照管并标记配置日期。

配置亚硫酸钠亚硫酸钠溶于无菌蒸馏水或去离子水中。

④将亚硫酸钠溶液加入管内，将盖旋紧。

使用前至少应在室温放置。

阳性对照管能多次使用药敏操作步骤将管分别标记生长对照，等。

每管中分别加入营养添加剂。

每管中分别加入对应量的已稀释的，至终浓度为表所示。

表抗生素终浓度抗生素名称终浓度人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号版本修订号主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期第页共页④分别在管中加入稀释的阳性培养菌液。

全自动分支杆菌培养仪孵育。

取稀释的阳性培养菌液接种血平板，装入塑料袋中于孵育。

后检查该平血平板是否有其它杂菌生长。

如血平板未见有杂菌生长则可以读取结果。

如血平板有杂菌生长则需重复实验步骤。

判读管生长对照管和阳性对照管为阳性，阴性管为阴性。

当生长对照管为阳性时则开始判读药敏管，并且连续判读后续的结果。

耐药药敏管和管在同天被判读仪判读为结果阳性，或比管晚。

④敏感药敏管在出现阳性后内仍未见生长则为敏感。

与鉴定法凡制备作分支杆菌药敏实验的实验室均需进行分支杆菌菌种鉴定。

培养基用二甲基甲酰胺或丙二醇溶解稀释后加入分支杆菌生长指示管中，使最终浓度为，制备方法同药敏试验培养基配制法。

培养基溶于无菌蒸馏水，取加入分支杆菌生长指示培养管中，使最终浓度为，制备方法同药敏试验培养基配制法。

接种方法与药敏试验相同，且与药敏试验同步进行。

结果与报告见表表分支杆菌菌种初步鉴定牛分支杆菌人型结核分支杆菌人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号版本修订号主题内容结核分支菌培养仪操作维护规程生效日期第页共页注意事项环境要求全自动分支杆菌培养仪，应安放在稳固工作台上，保持通风，避免震动，避免阳光直射，避免灰尘，避免无线电波干扰，电源条件应满足。

检测室温范围为，相对湿度为。

仪器维护严格按照仪器的关机程序关机。

仪器不使用时请罩防尘罩。

注意检查仪器的运行情况，并填写仪器使用登记表。

期间核查由市计量质量检测研究所执行相关记录仪器使用登记表人民医院检验科微生物室作业指导书文件编号版本修订号主题内容生物安全柜操作维护规程生效日期第页共页Ⅱ型生物安全柜操作维护规程技术参数适用范围适用于微生物操作和实验分析。

操作步骤保持前窗不高于的操作高度，当声光报警时及时复位。

送风及排风风机开启前请先校整压差显示屏位。

开机程序开启电源排风与送风灭菌后关闭照明开始工作关机程序关闭送风照明开启灭菌后关