第十章 亲和色谱-精品PPT课件

基质的选择理想的基质应符合下面的要求极低的非特异性吸附。

高度的亲水性。

较好的理化稳定性。

大量的化学基团能被有效地活化，而且容易和配体结合。

适当的多孔性。

般亲和吸附剂采用的基质有纤维素聚丙烯酰胺凝胶交联葡聚糖琼脂糖交联琼脂糖多孔玻璃珠等。

亲和色谱介质的制备配基的选择根据配体对待分离物质的亲和性的不同，可以将其分为两类特异性配体和通用性配体。

特异性配体般是指只与单或很少种类的蛋白质等生物大分子结合的配体。

如生物素和亲和素抗原和抗体酶和它的抑制剂激素受体等，它们结合都具有很高的特异性，用这些物质作为配体都属于特异性配体。

配体的特异性是保证亲和层析高分辨率的重要因素，但寻找特异性配体般是比较困难的，尤其对于些性质不很了解的生物大分子，要找到合适的特异性配体通常需要大量的实验。

通用性配体般是指特异性不是很强，能和类的蛋白质等生物大分子结合的配体，如各种凝集素可以结合各种糖蛋白，核酸可以结合结合的蛋白质等。

通用性配体对生物大分子的专性虽然不如特异性配体，但通过选择合适的洗脱条件也可以得到很高的分辨率。

而且这些配体还具有结构稳定偶联率高吸附容量高易于洗脱价格便宜等优点，所以在实验中得到了广泛的应用。

配基的浓度对亲和势比较低的时候，增加配基浓度有利于吸附。

增加亲和柱的长度来提高吸附率。

配基浓度太高使吸附力太强，洗脱困难。

理想的配基浓度为。

配基偶联的位置配基固定化时，其不参与亲和结合的部位与载体进行偶联。

腺嘌呤氨基接到载体上，对脱氢酶和甘油激酶有吸附力。

磷酸基接到载体上，对甘油醛磷酸脱氢酶有吸附力。

第十章亲和色谱在众多亲和分离技术中，亲和色谱是应用最多，分离效果最好的技术。

概述生物分子能够区分结构和性质非常接近的其他分子，选择性地与其中种分子相结合，生物分子间的这种特异性相互作用称为亲和作用。

静电作用氢键等多种作用力对亲和作用具有影响。

生物分子间的亲和识别包括抗体抗原酶底物激素受体等亲和作用。

常见亲合作用体系特异性亲和体系高特异性抗原单克隆抗体荷尔蒙受体蛋白核酸互补碱基链段核酸结合蛋白酶底物产物抑制剂群特异性免疫球蛋白蛋白蛋白酶辅酶凝集素糖糖蛋白细胞细胞表面受体酶蛋白质肝素酶蛋白质活性色素染料酶蛋白质过渡金属离子铜锌等酶蛋白质氨基酸组氨酸等离子强度般来说，提高离子强度，亲和作用减弱或完成破坏。

在适当的下，亲和结合作用较高，在其它下，亲和作用减弱或完成破坏。

抑制氢键形成的物质脲和盐酸胍的存在可减弱亲和作用温度提高温度，静电作用氢键配位键减弱但是，疏水性相互作用增强液体离子的存在，疏水性相互作用减弱螯合剂影响配位键，使亲和作用消失影响亲和作用的因素利用生物分子之间的专性识别或特定的相互作用进行分离的技术为亲和分离技术亲和配基是对生物分子具有专性识别或特定的相互作用的物质找与底物专可逆结合的配基将配基通过共价键偶联到基质配基与底物吸附洗脱目标物。

亲和纯化技术亲和层析亲和过滤膜分离亲和分配双水相萃取亲和反胶团萃取反胶团萃取亲和沉淀沉淀亲和电泳电泳配基生物特异性配基拟生物亲和配基亲和配基必须具备的条件专性识别或特异性作用必须是可逆的结合常数要适当稳定性好，可进行化学改性专性和特异性决定着分离纯化的产品纯度相互作用的强弱决定着