。试验方法巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选技术路线采样富集培养初筛复筛培养条件优化菌种分离培养基配方富集培养基果胶，硝酸铵，硫酸钠。选择培养基果胶，蔗糖，硫酸镁，氯化钾，硫酸铁，磷酸氢二钾，硝酸钠。菌种保藏培养基培养基液体培养基橘皮粉，硫酸铵，三水磷酸氢二钾，氯化钾，七水硫酸镁。筛选参考张浩森方法，进行产果胶酶菌株的筛选增殖培养取采集的果园土及果蔬的腐烂部分少量，放入装有增殖培养基的三角瓶中，于条件下摇床培养天，得增殖培养液。菌株的初筛取增殖培养液，采用稀释涂布法涂布于选择培养基平板上，培养天，加质量分数为十六烷基三甲基溴化铵多糖沉淀剂，静止，菌落周围出现透明圈的为产果胶酶的菌株。菌株的复筛挑取较大的几个菌落，划线接种于选择培养基上于条件下培养，测定粗酶液酶活。酶活测定参考孙越陈静方法进行酶活测定酶液制备将发酵液于，离心后取上清液作为粗酶液。果胶溶液配制取果胶粉，加热溶解，煮沸，冷却后过滤，调节值至，定容至。酶活测定取两个三角瓶，个为酶液瓶瓶，个为空白瓶瓶，并分别在瓶瓶中各加入的果胶溶液，瓶加重蒸馏水和酶液后调整值至，瓶中加重蒸馏水，水浴，准确计时，立即加热煮沸使酶失活，冷却至室温。取上述瓶瓶中溶液各，分别加入另外两个三角瓶瓶中，然后各加浓度为巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选的碳酸钠溶液摇匀，再各加浓度为碘碘化钾溶液于两个三角瓶中，摇匀，加塞，放置，再分别吸取浓度为硫酸加入上述两个三角瓶，用硫代硫酸钠滴定至淡黄色时停止滴定，加入浓度为的淀粉指示剂，此时溶液呈兰色，继续滴定至兰色消失为止，记下消耗的硫代硫酸钠体积瓶为，瓶为。数据处理在上述条件下，将每小时酶促催化果胶分解成游离的半乳糖醛酸所需的酶量定义为个酶活性单位，具体计算公式如下活性单位数毫升酶液式中空白消耗硫代硫酸钠溶液体积试样消耗硫代硫酸钠溶液体积硫代硫酸钠摩尔浓度摩尔硫代硫酸钠相当于游离半乳糖醛酸反应液体积吸取反应液体积反应时间菌株培养条件的研究单因素试验葡萄糖对菌株产果胶酶的影响分别以葡萄糖添加量作为发酵培养基中的碳源进行产酶试验,同时测定酶活，以确定发酵碳源最适添加量。蛋白胨对菌株产果胶酶的影响分别以蛋白胨添加量作为发酵培养基中的氮源进行产酶试验,同时测定酶活，以确定发酵氮源最适添加量。发酵培养基中表面活性剂对菌株产果胶酶的影响分别向发酵培养基中加入表面活性剂，进行产酶试验，以确定发酵培养基中添加表面活性剂最适添加量。发酵培养基初始值对菌株产果胶酶的影响调节发酵培养基的初始值分别为，进行产酶试验。测定各个值下的菌株产酶能力。发酵温度对菌株产果胶酶的影响分别在对产酶菌株进行产酶试验，测定各个温度下的菌株产酶能力。正交试验根据单因素试验结果，对碳源葡萄糖，氮源蛋白胨，表面活性剂巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选吐温，发酵培养基初始和发酵温度五个因素进行正交试验，因素水平编码值如表。以果胶酶活力为评价指标，确定菌株最佳的发酵培养条件，并进行验证试验。表因素水平编码表码值因素数据处理试验数据采的产酶能力变化幅度不大，当表面活性剂的浓度为时，菌株的产酶能力出现峰值，达到，因此选择菌株发酵的最佳表面活性剂添加量为。发酵培养基初始值对菌株产果胶酶的影响图值对菌株产酶能力的影响由图可知，随着值的逐渐升高，菌株的产酶能力表现为先升高再降低趋势。当值为时，菌株的产酶能力达到最大值为，随着值的进步升高，菌株的产酶能力逐渐下降。这主要是因为值的改变首先导致培养基的成分发生变化，不利于菌株的利用，另外是由于值升高超出了产物酶的最适值范围，致使测定结果偏低。发酵温度对菌株产果胶酶的影响酶活酶活温度酶活酶活添加量酶活巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选图不同温度对菌株产酶的影响由图可知，随着温度的逐渐升高，菌株的产酶能力表现为先升高再降低的变化。当温度为时，产酶能力达到最大值为，随着温度的继续升高，菌株的产酶能力表现为下降。正交试验结果由表可知影响菌株产酶性能的主次因子依次为，即发酵培养基初始表面活性剂吐温发酵温度碳源葡萄糖氮源蛋白胨。选取最佳组合为，即葡萄糖添加量，蛋白胨，吐温添加量，发酵培养基初始值，发酵温度。在此条件下菌株的产酶能力可以达到。表正交试验结果处理因素试验结果巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选结论由腐烂的大枣中筛选出的菌株初步鉴定为革兰氏阴性短杆菌。由单因素试验得出菌株的最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为蛋白胨，最佳表面活性剂为吐温，发酵培养基初始，发酵温度。由正交试验得出菌株的最适发酵条件为葡萄糖添加量，蛋白胨，吐温添加量，发酵培养基初始值，发酵温度。在此条件下菌株的产酶能力可以达到。参考文献巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选王璋,食品酶学北京轻工业出版社周人纲,白玉山,果胶裂解酶的分离提纯及特征,微生物学通报赵丽莉,微生物果胶酶研究及其在果蔬加工中的应用进展钦传光,丹娃伦亭娜,丁诺狄安娜果胶酶高产菌种的筛选,中国酿造赵允麟,赵莉黑曲霉复合酶的调节与控制工业微生物,田英华,刘晓兰,邓永平果胶酶高产菌的选育齐齐哈尔大学学报,全桂静果胶酶高产霉菌的筛选及固体发酵条件的优化沈阳化工学院学报张浩森,缪静,余晓斌果胶酶高产菌株的筛选及产酶条件的研究,生物学杂志,孙越果胶酶活性的测定方法,食品科技,陈静,王淑军,杨从发,等果胶酶产生菌的选育,淮海工学院学报,巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选致谢本论文是在韩舜愈老师祝霞老师王媛师姐的悉心指导下完成的。他们从论文的选题到论文的审阅和定稿都付出了大量的心血。导师在科学探索中所表现出的敏锐洞察力和严谨的治学态度以及丝不苟的敬业精神，给我留下深刻印象，在此特向导师致以深深的敬意和诚挚的感谢。试验过程中还得到了刁望强等同学的亲切指导和热心帮助，在这里并向四年来所有帮助与关心支持过我的老师和同学们表示衷心的感谢。本科毕业论文论文题目高产果胶酶菌株的筛选学院食品科学与工程学院专业食品科学与工程毕业届别届姓名巩亚莉指导教师韩舜愈职称教授甘肃农业大学教务处制二〇〇九年六月巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选目录前言材料与方法材料试剂仪器设备试验方法技术路线菌种分离菌株培养条件的研究结果与分析初筛结果复筛结果菌种形态观察单因素试验结果碳源对菌株产酶能力的影响氮源对菌株产酶能力的影响表面活性剂对菌株产酶活性的影响发酵培养基初始值对菌株产果胶酶的影响发酵温度对菌株产果胶酶的影响正交试验结果结论参考文献致谢巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选高产果胶酶菌株的筛选巩亚莉甘肃农业大学食品科学与工程学院级食科班摘要本试验采用平板分离法，从腐烂的水果苹果梨枣甜瓜籽瓜中进行高产果胶酶菌株的筛选。同时，通过单因素试验和正交试验对菌株的培养条件进行了优化。试验结果表明菌种的最适碳源为葡萄糖，浓度为最适氮源为蛋白胨，浓度为最佳表面活性剂为吐温，浓度为最适值为最适发酵温度为。在此条件下菌株的产酶能力可以达到。关键词果胶酶，筛选，培养条件优化前言果胶酶是指能分解果胶质的多种酶的总称，不同来源的果胶酶其特点也不同，微生物来源的果胶酶主要有聚半乳糖醛酸酶，聚半乳糖醛酸裂解酶聚甲基半乳糖醛酸裂解酶和果胶酯酶。在果胶酶系中发现较早，它可以水解半乳糖醛酸,糖苷键，产物为单半乳糖醛酸和二半乳糖醛酸通过切断果胶分子,糖苷键，生成具有不饱和键的半乳糖醛酸酯可以切断果胶分子,糖苷键，产物为个糖醛酸单位的不饱和的甲基半乳糖酸低聚物能够使果胶中的甲酯水解，生成果胶酸和甲醇。产果胶酶的菌种般可以从腐烂的果蔬以及果园泥土中的微生物中利用果胶为唯碳源的分离培养基中筛选出来。野生菌株的酶活力往往很低，必须对其进行诱变及发酵条件的优化等以改善菌株的产酶性能。果胶酶的工业化生产均采用微生物发酵方法进行。产生果胶酶的微生物如表所示。表常用产果胶酶菌种微生物产果胶酶菌属霉菌细菌酵母巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选商品酶制剂的生产菌主要是些真菌。包括等。概括了曲霉属中产果胶酶的些菌种，主要有，等。其中黑曲霉是国际公认的安全菌株，它的代谢产物可以直接应用于食品。果胶酶在工业中的应用十分广泛，主要集中在果汁果酒的澄清果蔬汁的提取对水果和蔬菜进行浸解液化以生产单细胞果汁和菜汁果实脱皮木材防腐棉织物精炼加工等方面。国内对果胶酶的研究始于世纪年代。八十年代以来我国学者对果胶酶菌种选育进行了广泛的研究。田英华等选育了株高产果胶酶的黑曲霉突变株，在优化的发酵条件下酶活力达。全桂静等利用平板菌落法，从腐烂的南果梨样品中分离筛选得到果胶酶高产菌株，果胶酶活性达到干曲。等人利用不同真菌之间的协同效应将和进行混合培养，产生的果胶酶的活性可以达到是单独培养的倍。试验采用平板分离法，从腐烂的水果苹果梨枣甜瓜籽瓜中进行高产果胶酶菌株的筛选。同时，通过单因素试验和正交试验对菌株的培养条件进行了优化，旨在为降低企业生产成本，实现果胶酶的国产化提供定的技术支撑。材料与方法材料苹果梨枣甜瓜籽瓜市售。试剂果胶美国公司，硝酸铵，硫酸钠，硫酸镁，氯化钾，硫酸铁，磷酸氢二钾，硝酸钠，牛肉膏，蛋白胨，琼脂，可溶性淀粉，硫代硫酸钠，碘，碘化钾，可溶性淀粉，硫酸铵，马铃薯，蔗糖，葡萄糖等。仪器设备微量移液器，上海雷勃分析仪器有限公司，摇床，金坛市恒丰仪器厂，高压灭菌锅型，上海绿宇精密仪器制造有限公司，电磁炉，水浴锅，烧杯，试管，培养皿，接种针，碘量瓶，酸式滴定管等。试验方法巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选技术路线采样富集培养初筛复筛培养条件优化菌种分离培养基配方富集培养基果胶，硝酸铵，硫酸钠。选择培养基果胶，蔗糖，硫酸镁，氯化钾，硫酸铁，磷酸氢二钾，硝酸钠。菌种保藏培养基培养基液体培养基橘皮粉，硫酸铵，三水磷酸氢二钾，氯化钾，七水硫酸镁。筛选参考张浩森方法，进行产果胶酶菌株的筛选增殖培养取采集的果园土及果蔬的腐烂部分少量，放入装有增殖培养基的三角瓶中，于条件下摇床培养天，得增殖培养液。菌株的初筛取增殖培养液，采用稀释涂布法涂布于选择培养基平板上，培养天，加质量分数为十六烷基三甲基溴化铵多糖沉淀剂，静止，菌落周围出现透明圈的为产果胶酶的菌株。菌株的复筛挑取较大的几