内无售。常规工作可以用墨汁或墨水代替，但应注意颗粒不能太粗，否则影响观察结果。有人用黑色素水溶液做染料，效果较好。试剂印度墨汁或黑色素水溶液。染色方法将标本与滴染色液在载玻片上混合，加上盖玻片，轻轻压下，使标本混合液变薄。在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞。找到后，转换高倍镜确认。葡萄球菌属常规鉴定葡萄球菌的鉴定首先须与其他的革兰阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定。与其他革兰阳性球菌鉴别临床标本中常见到的革兰阳性球菌，除葡萄球菌属外，还有微球菌属和气球菌属等。所以，在菌属内菌种鉴定之前，首先与这几属细菌鉴别见表。表葡萄球菌属与其他革兰阳性球菌的鉴别菌名特征严格需氧四联状排列紧粘琼脂动力琼脂触酶氧化酶改良法厌氧下葡萄糖产酸耐药杆菌肽片呋喃唑酮片葡萄球菌属气球菌属动性球菌属口腔球菌属土微球菌属注葡萄球菌属动性球菌属口腔球菌属微球菌属皆隶于微球菌科。符号，以上阳性土，以上弱阳性，以上阴性，阳性，未试验迟缓反应。在些菌种中出现触酶弱阳性或假阳性反应，是由于在培养中补充血红素，活化些菌株触酶活性。和改良氧化酶试验为检出细胞色素。标准的氧化发酵试验。，耐药或无抑菌环，微球菌口腔球菌气球菌敏感，抑菌环。十，耐药或抑菌环，敏感，抑菌环。表皮葡萄球菌有些菌株生长时紧固地粘附于琼脂表面，此种特性与细菌产生浓的粘液相关。与链球菌鉴别葡萄球菌与链球菌的区别如下在镜下，葡萄球菌以单双葡萄状排列，菌体呈圆形。链球菌以成单双链状排列，菌体形态为圆形或椭圆形。葡萄球菌触酶试验阳性，链球菌则阴性。与微球菌的鉴别实验室常用的鉴别依据是形态和发酵葡萄糖产酸。在镜下，葡萄球菌以葡萄状排列为主，菌体较小微球菌以四联排列为主，且菌体较大。葡萄球菌发酵葡萄糖产酸试验阳性，微球菌阴性。此外杆菌肽呋喃唑酮敏感试验有利区别两属菌种。二临床种常见葡萄球菌的鉴别目前葡萄球菌已被命名有个种。临床标本中最常见有意义菌种是金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌溶血葡萄球菌里昂葡萄球菌施氏葡萄球菌中间葡萄球菌和猪葡萄球菌。首先用凝固酶试验将其分为凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌包括中间和猪葡萄球菌和凝固酶阴性的其他葡萄球菌，然后用新生霉素敏感试验。推断新生霉素耐药为腐生葡萄球菌。下表列出了关键鉴定试验来区别上述个菌。二试验方法触酶试验过氧化氢酶试验试剂溶液，置棕色瓶内于阴暗处保存。方法先挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上，然后滴加过氧化氢溶液滴。静置之，内产生大量气泡的为阳性，不产生气泡的为阴性。表有临床意义的种葡萄球菌关键性鉴定菌种试验菌落色素葡萄球菌凝固酶凝聚因子耐热酶碱性磷酸酶吡咯烷酮酶鸟氨酸脱羧酶脲酶半乳糖苷酶产生新生霉素耐药多粘菌素耐药需氧下产气蕈糖甘露醇甘露糖松二糖木糖纤维二糖麦芽糖蔗糖金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌溶血葡萄球菌里昂葡萄球菌施氏葡萄球菌腐生葡萄球菌中间型葡萄球猪葡萄球菌菌注意点注意过氧化氢为，应用浓的，用时稀释倍。不应在培养基上做试验。每次试验时，应以阳性和阴性菌株做对照。二葡萄球菌凝固酶和凝聚因子试验葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。试管法凝固酶试验称为葡萄球菌凝固酶，玻片法为检测凝聚因子。凝聚因子试验取滴蒸馏水于洁净的玻片上，用接种环挑取待检菌环置于蒸馏水中，制成浓的菌悬液，无自凝现象。然后加环家兔血浆混合，内观察结果，出现明显细菌凝块为阳性，否则为阴性。如超过可出现假阳性，有金黄色葡萄球菌呈假阴性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。操作过程中的注意点内观察结果。必须制备浓厚的均匀菌悬液。用抗凝的兔血浆为最好。加血浆后不要再混搅，以免细菌凝块分散变小。生长在高盐培养基上的菌落可出现自凝或假阳性。葡萄球菌凝固酶试验用生理盐水将血浆倍稀释，取。然后挑取个菌落于稀释血浆中，成浓菌悬液。置水浴，后读取结果，凝固者为阳性。若阴性，继续观察到，不凝固者为阴性。试验应同时作阳性阴性对照。试管法葡萄球菌凝固酶试验阳性者，应见到明显的纤维蛋白凝胶块，出现羊毛状或纤维状沉淀物并非真正凝固，应判为阴性。中间型葡萄球菌猪葡萄球菌需要较长时间孵育，才可出现阳性。凝固酶试验应考虑下述情况些金黄色葡萄球菌产生溶纤维蛋白酶，溶解纤维蛋白凝块。所用血浆缺乏纤维蛋白原。试验菌株不纯。三碳水化合物氧化发酵试验试验葡萄球菌的试验应使用专用配方，不可与非发酵菌用的管混用。培养基菌药敏试验纸片扩散法培养基加羊血的巧克力琼脂，但只能用于检测已标准化的种抗生素青霉素四环素壮观霉素和头孢曲松。推荐用培养基加生长补充剂，因为该补充剂含有极少量胱氨酸，能灭活各种内酰胺抗生素，诸如亚胺硫霉素克拉维酸等。生长补充剂由下列试剂配成每升水含有胱氨酸，盐酸鸟嘌呤，硫胺，对氨基苯甲酸，维生素，羧化辅酶腺嘌呤，谷氨酰胺，葡萄糖，硝酸铁，该处方类似于。菌种准备直接从过夜培养的巧克力琼脂上挑选菌落，混悬于肉汤中，调整浓度至号麦氏标准比浊管，用棉拭直接涂布于含生长补充剂的平板上，贴好纸片后，置环境下，孵育。质控菌株是淋病奈瑟菌。结果解释参照表标准。二琼脂稀释法首选培养基是加有生长补充剂的脂。具体操作方法，参照第二节琼脂稀释法敏感试验。菌种准备，同纸片扩散法，接种菌液数量每个斑点是，应做空白对照，计数活菌数。平板置二氧化碳环境下孵育，观察并报告结果。淋病奈瑟菌抑菌环直径及相关值解释见表所示。表介绍淋病奈瑟菌的纸片扩散法和琼脂稀释法敏感试验解释标准抗生素纸片含量片抑菌环直径敏感中介耐药青霉素四环素壮观霉素头孢氨噻肟头孢西丁头孢他啶头孢曲松头孢呋辛注括号内是相关。青霉素片淋病奈瑟菌抑菌环直径可能产生内酰胺酶，应用其他快速准确敏感试验方法，认证由质粒介导的青霉素耐药菌株。四环素片抑菌环直径，提示被检菌带有质粒介导的四环素耐药菌株，应采用合适的稀释法做试验进步证实。附耐甲氧西林葡萄球菌的检测纸片扩散法纸片扩散法检出耐甲氧西林的葡萄球菌株是可靠方法之。挑选来自过夜琼脂平板的培养物，制备被检菌株的悬液，调整至适当浓度，具体操作如常规纸片法药敏试验样，贴苯唑青霉素片孵育，整不可延长，小心挑选模糊生长的培养物，或在抑菌环内的菌落，这类微生物提示耐甲氧西林菌株。若检测凝固酶阴性葡萄球菌时，则孵育时间延长至。二微量肉汤稀释法为检测抗葡萄球菌的抗生素，最近推荐使用加有阳离子和补充的培养基肉汤，接种被检菌株悬液，孵育用苯唑西林检测金黄色葡萄球菌，凝固酶阴性葡萄球菌也可选用甲氧西林检出异质性耐药菌株。三琼脂筛选法琼脂筛选是用琼脂，补充和苯唑青霉素或甲氧西林倾注成平板，调整被检菌悬液为号麦氏管浓度，用棉拭子浸沾菌悬液，涂于平板上，整，检查平板中生长的菌落，甚至只有个菌落，提示耐苯唑西林菌株。用于检出凝固酶阴性葡萄球菌时，孵育，增加敏感性。二内酰胺酶的检测临床标本中分离金黄色葡萄球菌流感嗜血杆菌淋病奈瑟菌以及最近发现的肠球菌属少数菌株对青霉素氨苄青霉素出现耐药。由于上述菌株产生内酰胺酶水解前述抗生素。检测该酶有下列方法微生物活性消失法此法是以株对青霉素高度敏感的枯草芽胞杆菌的指示菌，如待检菌株产生内酰胺酶，破坏了青霉素，则在划线两边有枯草芽胞菌生长，否则指示菌仍呈很大抑菌环。具体操作结果解释参照微生物学和微生物学检验第页，刘恭植主编，人民卫生出版社，年。二淀粉碘测定法内酰胺酶破坏内酰胺环，碘与被打开内酰胺环结合，使蓝色的淀粉碘复合物转变成无色。方法用磷酸缓冲液配制青霉素悬液，取该液置于微量稀释板凹孔中，挑选检测菌株数个菌落混悬于其中，摇动，静置室温中，加淀粉液滴，再加碘液滴，混合，立即观察颜色变化，阳性者当加入碘液后，首先立即出现蓝色如在内消失蓝色，提示该菌产生内酰胺酶。三酸测量法青霉素被内酶胺酶水解后成青霉素酸，值下降以下，用酚红指示剂，由红紫色原液枸橼酸缓冲液黄色以下。四头孢硝基噻吩显色反应头孢硝基噻吩的内酰胺环被内酰胺酶打开，基质由黄色变成红色。液体方法头孢硝基噻吩溶解于的二甲基亚砜中，然后用再稀释，最后浓度为，溶液呈黄或淡橙色，保存，可用几个星期。取该溶液置放于微量稀释板凹孔中或小试管中，挑取被试菌落，制成浓厚悬液，与凹孔中基质液混和，室温，头孢硝基噻吩由黄变成红色为阳性，若显色不明显，观察可延长。有报道纸片法用于流感嗜血杆菌和淋病奈瑟菌检测内酰胺酶的结果是准确的，但对于些菌株产生少量而与菌细胞紧密结合的内酰胺酶，如腐生葡萄球菌等，用液体法检测更好。上述任何种检测方法都应用质量控制。临床细菌检验工作的基本要求和技术对临床细菌检验人员的要求负责鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓诊断细菌学的全面知识。般细菌室工作人员均应具备细菌传染消毒灭菌的知识。通晓细菌室守则，并严格遵守。负责人应不断更新知识，了解细菌学检验的新进展。定期或随时与临床医师联系，主动参与临床病例讨论，了解病情及治疗情况，达到细菌检验与临床的密切联系。工作人员应定期进行健康体检及必要的预防接种，增强自身抵抗能力。二工作人员守则在细菌室工作人员应注意，既不要给室内带来污染，也不要被室内的微生物感染。工作人员必须遵守以下规则穿专用的工作衣帽入室必要时应戴口罩。不允许无关人员进入实验室。室内禁止饮食吸烟闲谈等非专业活动。养成在室内手不触及口脸头发及躯体的习惯。操作中不可说话，以免口中飞沫污染标本。每次完成工作和离开实验室前，应用肥皂洗手，接触了致病菌类，须用消毒剂消毒手。个人物品不许带入室内。当工作环境被细菌培养物污染，必须用适当的强消毒液泼撒覆盖污染物，并报告主管人员采取必要的措施。工作人员被细菌培养物污染，应用弱或中等消毒剂清洗，必要时应给予药物治疗，并向主管负责人报告，进步采用特殊措施。基本染色方法染色的第步是制作涂片。菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布。菌落涂片时，先取生理盐水滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。涂片时必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。将固定后的涂片进行染色。革兰染色本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳性