TOP16【毕业设计】高产果胶酶菌株的筛选.doc文档免费在线阅读

以果胶酶活力为评价指标，确定菌株最佳的发酵培养条件，并进行验证试验。

表因素水平编码表码值因素数据处理试验数据采的产酶能力变化幅度不大，当表面活性剂的浓度为时，菌株的产酶能力出现峰值，达到，因此选择菌株发酵的最佳表面活性剂添加量为。

发酵培养基初始值对菌株产果胶酶的影响图值对菌株产酶能力的影响由图可知，随着值的逐渐升高，菌株的产酶能力表现为先升高再降低趋势。

当值为时，菌株的产酶能力达到最大值为，随着值的进步升高，菌株的产酶能力逐渐下降。

这主要是因为值的改变首先导致培养基的成分发生变化，不利于菌株的利用，另外是由于值升高超出了产物酶的最适值范围，致使测定结果偏低。

发酵温度对菌株产果胶酶的影响酶活酶活温度对产酶菌株进行产酶试验，测定各个温度下的菌株产酶能力。

正交试验根据单因素试验结果，对碳源葡萄糖，氮源蛋白胨，表面活性剂巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选吐温，发酵培养基添加表面活性剂最适添加量。

发酵培养基初始值对菌株产果胶酶的影响调节发酵培养基的初始值分别为，进行产酶试验。

测定各个值下的菌株产酶能力。

发酵温度对菌株产果胶酶的影响分别在氮源进行产酶试验，同时测定酶活，以确定发酵氮源最适添加量。

发酵培养基中表面活性剂对菌株产果胶酶的影响分别向发酵培养基中加入表面活性剂，进行产酶试验，以确定发酵培养基中影响分别以葡萄糖添加量作为发酵培养基中的碳源进行产酶试验，同时测定酶活，以确定发酵碳源最适添加量。

蛋白胨对菌株产果胶酶的影响分别以蛋白胨添加量作为发酵培养基中的硫代硫酸钠溶液体积硫代硫酸钠摩尔浓度摩尔硫代硫酸钠相当于游离半乳糖醛酸反应液体积吸取反应液体积反应时间菌株培养条件的研究单因素试验葡萄糖对菌株产果胶酶的时酶促催化果胶分解成游离的半乳糖醛酸所需的酶量定义为个酶活性单位，具体计算公式如下活性单位数毫升酶液式中空白消耗硫代硫酸钠溶液体积试样消耗硫代硫酸钠滴定至淡黄色时停止滴定，加入浓度为的淀粉指示剂，此时溶液呈兰色，继续滴定至兰色消失为止，记下消耗的硫代硫酸钠体积瓶为，瓶为。

数据处理在上述条件下，将每小为巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选的碳酸钠溶液摇匀，再各加浓度为碘碘化钾溶液于两个三角瓶中，摇匀，加塞，放置，再分别吸取浓度为硫酸加入上述两个三角瓶，用瓶加重蒸馏水和酶液后调整值至，瓶中加重蒸馏水，水浴，准确计时，立即加热煮沸使酶失活，冷却至室温。

取上述瓶瓶中溶液各，分别加入另外两个三角瓶瓶中，然后各加浓度果胶溶液配制取果胶粉，加热溶解，煮沸，冷却后过滤，调节值至，定容至。

酶活测定取两个三角瓶，个为酶液瓶瓶，个为空白瓶瓶，并分别在瓶瓶中各加入的果胶溶液，的几个菌落，划线接种于选择培养基上于条件下培养，测定粗酶液酶活。

酶活测定参考孙越陈静方法进行酶活测定酶液制备将发酵液于，离心后取上清液作为粗酶液。

筛取增殖培养液，采用稀释涂布法涂布于选择培养基平板上，培养天，加质量分数为十六烷基三甲基溴化铵多糖沉淀剂，静止，菌落周围出现透明圈的为产果胶酶的菌株。

菌株的复筛挑取较大酸镁。

筛选参考张浩森方法，进行产果胶酶菌株的筛选增殖培养取采集的果园土及果蔬的腐烂部分少量，放入装有增殖培养基的三角瓶中，于条件下摇床培养天，得增殖培养液。

菌株的初，硝酸铵，硫酸钠。

选择培养基果胶，蔗糖，硫酸镁，氯化钾，硫酸铁，磷酸氢二钾，硝酸钠。

菌种保藏培养基培养基液体培养基橘皮粉，硫酸铵，三水磷酸氢二钾，氯化钾，七水硫有限公司，电磁炉，水浴锅，烧杯，试管，培养皿，接种针，碘量瓶，酸式滴定管等。

试验方法巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选技术路线采样富集培养初筛复筛培养条件优化菌种分离培养基配方富集培养基果胶，可溶性淀粉，硫酸铵，马铃薯，蔗糖，葡萄糖等。

仪器设备微量移液器，上海雷勃分析仪器有限公司，摇床，金坛市恒丰仪器厂，高压灭菌锅型，上海绿宇精密仪器制造撑。

材料与方法材料苹果梨枣甜瓜籽瓜市售。

试剂果胶美国公司，硝酸铵，硫酸钠，硫酸镁，氯化钾，硫酸铁，磷酸氢二钾，硝酸钠，牛肉膏，蛋白胨，琼脂，可溶性淀粉，硫代硫酸钠，碘，碘化钾，撑。

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试验方法巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选技术路线采样富集培养初筛复筛培养条件优化菌种分离培养基配方富集培养基果胶，硝酸铵，硫酸钠。

选择培养基果胶，蔗糖，硫酸镁，氯化钾，硫酸铁，磷酸氢二钾，硝酸钠。

菌种保藏培养基培养基液体培养基橘皮粉，硫酸铵，三水磷酸氢二钾，氯化钾，七水硫酸镁。

筛选参考张浩森方法，进行产果胶酶菌株的筛选增殖培养取采集的果园土及果蔬的腐烂部分少量，放入装有增殖培养基的三角瓶中，于条件下摇床培养天，得增殖培养液。

菌株的初筛取增殖培养液，采用稀释涂布法涂布于选择培养基平板上，培养天，加质量分数为十六烷基三甲基溴化铵多糖沉淀剂，静止，菌落周围出现透明圈的为产果胶酶的菌株。

菌株的复筛挑取较大的几个菌落，划线接种于选择培养基上于条件下培养，测定粗酶液酶活。

酶活测定参考孙越陈静方法进行酶活测定酶液制备将发酵液于，离心后取上清液作为粗酶液。

果胶溶液配制取果胶粉，加热溶解，煮沸，冷却后过滤，调节值至，定容至。

酶活测定取两个三角瓶，个为酶液瓶瓶，个为空白瓶瓶，并分别在瓶瓶中各加入的果胶溶液，瓶加重蒸馏水和酶液后调整值至，瓶中加重蒸馏水，水浴，准确计时，立即加热煮沸使酶失活，冷却至室温。

取上述瓶瓶中溶液各，分别加入另外两个三角瓶瓶中，然后各加浓度为巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选的碳酸钠溶液摇匀，再各加浓度为碘碘化钾溶液于两个三角瓶中，摇匀，加塞，放置，再分别吸取浓度为硫酸加入上述两个三角瓶，用硫代硫酸钠滴定至淡黄色时停止滴定，加入浓度为的淀粉指示剂，此时溶液呈兰色，继续滴定至兰色消失为止，记下消耗的硫代硫酸钠体积瓶为，瓶为。

数据处理在上述条件下，将每小时酶促催化果胶分解成游离的半乳糖醛酸所需的酶量定义为个酶活性单位，具体计算公式如下活性单位数毫升酶液式中空白消耗硫代硫酸钠溶液体积试样消耗硫代硫酸钠溶液体积硫代硫酸钠摩尔浓度摩尔硫代硫酸钠相当于游离半乳糖醛酸反应液体积吸取反应液体积反应时间菌株培养条件的研究单因素试验葡萄糖对菌株产果胶酶的影响分别以葡萄糖添加量作为发酵培养基中的碳源进行产酶试验，同时测定酶活，以确定发酵碳源最适添加量。

蛋白胨对菌株产果胶酶的影响分别以蛋白胨添加量作为发酵培养基中的氮源进行产酶试验，同时测定酶活，以确定发酵氮源最适添加量。

发酵培养基中表面活性剂对菌株产果胶酶的影响分别向发酵培养基中加入表面活性剂，进行产酶试验，以确定发酵培养基中添加表面活性剂最适添加量。

发酵培养基初始值对菌株产果胶酶的影响调节发酵培养基的初始值分别为，进行产酶试验。

测定各个值下的菌株产酶能力。

发酵温度对菌株产果胶酶的影响分别在对产酶菌株进行产酶试验，测定各个温度下的菌株产酶能力。

正交试验根据单因素试验结果，对碳源葡萄糖，氮源蛋白胨，表面活性剂巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选吐温，发酵培养基初始和发酵温度五个因素进行正交试验，因素水平编码值如表。

以果胶酶活力为评价指标，确定菌株最佳的发酵培养条件，并进行验证试验。

表因素水平编码表码值因素数据处理试验数据采的产酶能力变化幅度不大，当表面活性剂的浓度为时，菌株的产酶能力出现峰值，达到，因此选择菌株发酵的最佳表面活性剂添加量为。

发酵培养基初始值对菌株产果胶酶的影响图值对菌株产酶能力的影响由图可知，随着值的逐渐升高，菌株的产酶能力表现为先升高再降低趋势。

当值为时，菌株的产酶能力达到最大值为，随着值的进步升高，菌株的产酶能力逐渐下降。

这主要是因为值的改变首先导致培养基的成分发生变化，不利于菌株的利用，另外是由于值升高超出了产物酶的最适值范围，致使测定结果偏低。

发酵温度对菌株产果胶酶的影响酶活酶活温度酶活酶活添加量酶活巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选图不同温度对菌株产酶的影响由图可知，随着温度的逐渐升高，菌株的产酶能力表现为先升高再降低的变化。

当温度为时，产酶能力达到最大值为，随着温度的继续升高，菌株的产酶能力表现为下降。

正交试验结果由表可知影响菌株产酶性能的主次因子依次为，即发酵培养基初始表面活性剂吐温发酵温度碳源葡萄糖氮源蛋白胨。

选取最佳组合为，即葡萄糖添加量，蛋白胨，吐温添加量，发酵培养基初始值，发酵温度。

在此条件下菌株的产酶能力可以达到。

表正交试验结果处理因素试验结果巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选结论由腐烂的大枣中筛选出的菌株初步鉴定为革兰氏阴性短杆菌。

由单因素试验得出菌株的最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为蛋白胨，最佳表面活性剂为吐温，发酵培养基初始，发酵温度。

由正交试验得出菌株的最适发酵条件为葡萄糖添加量，蛋白胨，吐温添加量，发酵培养基初始值，发酵温度。

在此条件下菌株的产酶能力可以达到。

参考文献巩亚莉高产果胶酶菌株的筛选王璋，食品酶学北京轻工业出版社周人纲，白玉山，果胶裂解酶的分离提纯及特征，微生物学通报赵丽莉，微生物果胶酶研究及其在果蔬加工中的应用进展钦传光，丹娃伦亭娜，丁诺狄安娜果胶酶高产菌种的筛选，中国酿造赵允麟，赵莉黑曲霉复合酶的调节与控制工业微生物，田英华，刘晓兰，邓永平果胶酶高产菌的选育齐齐哈尔大学学报，全桂静果胶酶高产霉菌的筛选及固体发酵条件的优化沈阳化工学院学报张浩森，缪静，余晓斌果胶酶高产菌株的筛选及产酶条件的研究，生物学杂志，孙越果胶酶活性的