1、镜下观察随时终止反应，般为之间。﹝﹞苏木素轻度复染分钟脱水透明中性树脂封片。﹝﹞光学显微镜高倍镜下观察随机取个不重叠的视野进行拍照，采用图像分析软件分析的平均光密度，并计算其均数。法检测细胞凋亡﹝﹞石蜡切片常规脱蜡二甲苯浸洗次，每次分钟。﹝﹞梯度乙醇各浸洗次，每次，每次分钟。﹝﹞漂洗次，每次。﹝﹞加入蛋白酶工作液处理组织蛋白酶，于作用。﹝﹞漂洗次，每次。﹝﹞浸入中，封闭，以阻断内源性过氧化物酶活性﹝﹞漂洗次，每次，擦干样本周围的水。﹝﹞滴加反应混合液于样本上，加盖玻片在暗湿盒中反应阴性对照片不加酶。﹝﹞漂洗次，每次万方数据。

2、的表达较模型组明显减少。大鼠脑缺血侧皮质区，假手术组少量表达，模型组的表达在再灌注小时即有大量表达，于小时达高峰，之后逐渐下降，均高于假手术组干预组各时间点的表达均较模型组明显减少。结论大鼠脑缺血再灌注损伤过程中溶酶体可能通过上调的磷酸化而介导神经细胞凋亡。可能通过抑制而下调的磷酸化活性表达，从而减少细胞凋亡，减少脑梗死体积，起到神经保护作用。关键词脑缺血再灌注溶酶体凋亡万方数据,万方数据,部保持体温在，同时检查其生命体征变化，直至麻醉苏醒，线栓成功插入后行首次神经功能评分，然后轻轻提拉所置鱼线，恢复再灌注。假手术组仅线栓。

3、枸橼酸盐缓冲液，微波炉加热至沸腾，分钟，自然冷却分钟以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温。﹝﹞漂洗次，每次分钟。﹝﹞每张切片滴加滴或正常山羊血清封闭液，孵育分钟，万方数据不洗，吸去多余液体。﹝﹞滴加稀释的兔抗鼠单克隆抗体及的兔抗鼠单克隆抗体，冰箱孵育过夜。此外用取代抗作空白对照浸泡次，每次分钟。﹝﹞滴加生物素化第二抗体兔抗山羊抗体稀释，分钟﹝﹞浸泡分钟，次。﹝﹞滴加辣根过氧化酶标记亲和素溶液倍稀释，孵育小时。﹝﹞浸泡次，每次。﹝﹞显色使用显色试剂盒，取蒸馏水，加入试剂盒中试剂各滴，均匀混合后滴至玻片。室温下观察显色，显微。

4、脑缺血再灌注溶酶体凋亡万方数据减少。结论大鼠脑缺血再灌注损伤过程中溶酶体可能通过上调的磷酸化而介导神经细胞凋亡。可能通过抑制而下调的磷酸化活性表达，从而减少细胞凋亡，减少脑梗死体积，起到神经保护作用。关键词脑缺血再灌注溶酶体凋亡万方数据而下调的磷酸化活性表达，从而减少细胞凋亡，减少脑梗死体积，起到神经保护作用。关键词可能通过上调的磷酸化而介导神经细胞凋亡。的表达均较模型组明显减少。结论大鼠脑缺血再灌注损伤过程中溶酶体的表达在再灌注小时小时小时呈上升趋势，小时达高峰，组较组有所下降，但仍居高水平，均比假手术组高干预组各时间点。

5、速灌洗，然后用多聚甲醛灌注，内灌完断头取脑，于多聚甲醛中固定后，于梯度乙醇溶液中脱水并在二甲苯中透明，浸蜡。包蜡后的脑组织蜡块进行切片偏厚约，收集含缺血区的完整脑组织切片。免疫组织化学染色利用试剂盒行免疫组织化学染色。免疫组化步骤如下﹝﹞石蜡切片捞片烤片载玻片用多聚赖氨酸处理过的防脱片，捞片后放置烤箱中约分钟。﹝﹞常规脱蜡二甲苯脱蜡次，每次分钟左右。﹝﹞梯度酒精脱水将脱蜡后的切片依次放入乙醇，乙醇乙醇乙醇乙醇各分钟后，再在蒸馏水中浸泡分钟。﹝﹞用孵育分钟以消除内源性过氧化物酶活性。﹝﹞浸泡次，每次。﹝﹞热修复抗原将切片浸入。

6、﹞擦干样本周围的水，再滴加转化剂，加盖玻片暗湿盒中反应。﹝﹞漂洗次，每次。﹝在组织处加显色液，室温孵育分钟或根据显色情况孵育适当时间。﹝滴加双蒸水终止显色，可直接光学显微镜下观察拍照。将切片置于苏木素染液中，染色分钟，蒸馏水冲洗，梯度乙醇脱水二甲苯透明中性树脂封片。光学显微镜下观察，随机取个不重叠视野拍照，运用图像分析软件分析平均光密度值，并计算均数。统计学处理所有数据均用均数标准差表示，随机成组设计多个样本均数比较用方差分析组间比较采用检验。值小于认为有统计学意义。所有数据使用统计软件包进行处理。万方数据第三章结果大鼠。

7、入深度为，其余操作同模型组。模型的入组标准采用的级标准评分法评价神经功能缺损来判断模型制作成功与否。分正常，无任何神经功能损伤症状分垂直提起时不能伸展病灶对侧前肢分行走时身体向病灶对侧倾斜或旋转分行走时身体向病灶对侧跌倒分不能自发行走或出现意识障碍。其中首次评分为分或分生命体征不稳定如发热癫痫发作呼吸困难等不明原因或明确原因的提前死亡术中出血过多及蛛网膜下腔出血的大鼠均弃之不用随机补充。染色万方数据于缺血再灌注小时，以水合氯醛麻醉大鼠，然后迅速断头取脑，将新鲜脑组织迅速置于冰箱中速冻分钟，分钟后取出于视交叉后行冠状位连续切。

8、体积缩小，胞核固缩，染色质凝集，呈棕褐色。假手术组大脑皮层仅有少量凋亡细胞，模型组与假手术组相比凋亡细胞明显增多，小时可以观察到凋亡细胞，小时小时小时呈上升趋势，于小时达高峰干预组小时凋亡细胞较模型组小时无显著改变，干预组小时小时小时观察到的凋亡细胞较模型组明显减少，但较假手术组多。提示可明显减少缺血再灌注损伤的细胞凋亡，具有神经细胞保护作用。如表，图万方数据表各组大鼠脑缺血侧皮层缺血半暗带区凋亡表达量的变化，分组缺血再灌注时间点假手术组模型组干预组注与假手术组比较与模型组比较图各组大鼠脑缺血侧皮层缺血半暗带区凋亡表达量的。

9、片，厚度为，取中间片立即浸泡于现配的溶液中，避光，置于恒温箱孵育分钟其中每隔分钟要翻转面，正常脑组织为红色，梗死组织为白色。最后用多聚甲醛溶液固定小时后取出，按切片顺序排列，用数码照相机拍照，运用图像分析软件计算脑梗死面积，由公式计算脑梗死体积，公式相对脑梗死体积梗死体积全脑体积﹝梗死面积厚度﹞﹝全脑片面积厚度﹞。其中全脑体积为片脑组织切片总体积。样本制备假手术组模型组及干预组中的大鼠于脑缺血再灌注后规定的时间点以水合氯醛麻醉大鼠，打开左胸暴露心脏及主动脉弓，将制备好的输液针针尖被切平自心尖穿过左心室插入主动脉，先用生理盐。

10、较，图各组大鼠脑缺血再灌注不同时间点神经功能评分比较注与模型组比较万方数据对大鼠脑缺血再灌注后脑梗死体积的影响染色结果可见假手术组无明显梗死灶，脑组织染色呈红色模型组和干预组缺血侧出现梗死灶，梗死脑组织染色呈白色，而干预组白色体积较模型组明显减少。提示可减少脑梗死体积，具有神经保护作用。如表，图表各组大鼠脑缺血再灌注脑梗死体积的变化，分组相对梗死体积模型组干预组注与模型组比较图各组大鼠脑缺血再灌注脑梗死体积的变化注与模型组比较万方数据假手术组模型组干预组图大鼠脑组织染色对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响神经细胞凋亡细胞。

11、化万方数据图各组大鼠脑缺血侧皮层缺血半暗带区凋亡检测假手术组模型组干预组万方数据大鼠脑缺血再灌注后不同时间点的表达变化假手术组可见少量表达细胞胞浆成棕黄色，而胞核未见染色模型组蛋白的表达在大鼠脑缺血再灌注呈上升趋势，于达高峰，组较组有所下降，但仍居高水平，均比假手术组高干预组各时间点的表达较模型组明显减少。如表，图示表大鼠脑缺血再灌注缺血半暗带区的表达变化，分组缺血再灌注时间点假手术组模型组干预组注与假手术组比较与模型组比较图大鼠脑缺血再灌注缺血半暗带区的表达变化万方数据分类号密级编号硕士学位论文大鼠脑缺血再灌注损伤介导的。

12、脑缺血再灌注模型成功率本实验共造模大鼠只，其中只造模成功，有只造模失败被剔除，造模成功率。只大鼠失败原因如下只死于蛛网膜下腔出血，只插线成功后神经功能评分为分而剔除，只因鱼线全部拔出失血过多而死亡，只因神经功能评分为分而剔除，只不明原因死亡，只麻醉过量死亡。对大鼠脑缺血再灌注的保护作用对大鼠脑缺血再灌注后神经功能评分的影响脑缺血再灌注后首次神经功能评分显示干预组神经功能评分较模型组改善，提示可改善神经功能，具有神经保护作用。如表，图表各组大鼠脑缺血再灌注不同时间点神经功能评分比较，分组缺血再灌注时间点模型组干预组注与模型组。

参考资料：

[1]红色党政党建党课杜绝餐饮浪费践行节约风尚课件PPT 编号55（第28页，发表于2022-06-25）

[2]红色党政党课党建如何做好一名基层党支部书记PPT 编号40（第21页，发表于2022-06-25）

[3]红色党政党课党建如何做好一名基层党支部书记PPT 编号31（第21页，发表于2022-06-25）

[4]红色党政党课党建如何做好一名基层党支部书记PPT 编号35（第21页，发表于2022-06-25）

[5]红色党政党课党建如何做好一名基层党支部书记PPT 编号23（第21页，发表于2022-06-25）

[6]红色党政党课党建如何做好一名基层党支部书记PPT 编号37（第21页，发表于2022-06-25）

[7]红色党政党课党建如何做好一名基层党支部书记PPT 编号28（第21页，发表于2022-06-25）

[8]红色党政党课党建如何做好一名基层党支部书记PPT 编号37（第21页，发表于2022-06-25）

[9]红色党政党课党建如何做好一名基层党支部书记PPT 编号37（第21页，发表于2022-06-25）

[10]红色党政党课党建如何做好一名基层党支部书记PPT 编号47（第21页，发表于2022-06-25）

[11]红色党政党课党建如何做好一名基层党支部书记PPT 编号76（第21页，发表于2022-06-25）

[12]红色启航新时代党的组织路线党政党建PPT 编号38（第23页，发表于2022-06-25）

[13]红色启航新时代党的组织路线党政党建PPT 编号39（第23页，发表于2022-06-25）

[14]红色启航新时代党的组织路线党政党建PPT 编号38（第23页，发表于2022-06-25）

[15]红色启航新时代党的组织路线党政党建PPT 编号44（第23页，发表于2022-06-25）

[16]红色启航新时代党的组织路线党政党建PPT 编号56（第23页，发表于2022-06-25）

[17]红色启航新时代党的组织路线党政党建PPT 编号42（第23页，发表于2022-06-25）

[18]红色启航新时代党的组织路线党政党建PPT 编号39（第23页，发表于2022-06-25）

[19]红色启航新时代党的组织路线党政党建PPT 编号37（第23页，发表于2022-06-25）

[20]红色启航新时代党的组织路线党政党建PPT 编号42（第23页，发表于2022-06-25）