年月陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果并由本人所承担的法律责任。学位论文作者签名日期年月日关于学位论文使用授权的声明陕西中医学院有权保留使用本人学位论文，同意学院按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布包括刊登论文的全部或部分内容。保密论文在解密后应遵守此规定论文作者签名日期年月日论文导师签名日期年月日中文摘要目的探讨疏筋解毒汤对帕金森病模型大鼠脑内黑质多巴胺能神经元内质网应激信号传导蛋白基因表达的调节作用。方法采用向大鼠黑质内定位注射法制备大鼠模型。用正常大鼠作为空白对照组，并将造模成功的大鼠分为模型组西药治疗组疏筋解毒汤小剂量治疗组疏筋解毒汤中剂量治疗组疏筋解毒汤大剂量治疗组，共个组。利用逆转录聚合酶链反应法对各实验组大鼠黑质的表达进行分析，检测各个指标在各组中的表达情况。结果表达中药组的表达从到的用药过程中，随时间的延长，的表达呈渐降趋势。且在个时间点均低于西药治疗组和模型对照组，有统计学意义。各组的表达在各个时间点均高于空白组。表达中药组表达从到的用药过程中，随时间的延长，表达呈渐升趋势。且在个时间点均高于西药治疗组模型对照组，有统计学意义。结论疏筋解毒汤能明显抑制内质网过度应激时促凋亡因子的表达，从而对多巴胺能神经元凋亡有阻抑作用。疏筋解毒汤能明显促进未折叠蛋白反应信号传导通路的分子伴侣的表达，从而保护多巴胺能神经元。疏筋解毒汤可以通过干预内质网应激保护帕金森大鼠黑质多巴胺能神经元。关键词疏筋解毒汤内质网应激引言研究背景西医对帕金森病的认识的临床表现的病理变化的病因及发病机制遗传因素环境因素神经系统老化氧化应激及自由及损伤兴奋性毒性作用细胞凋亡免疫功能变化内质网应激的现代治疗方法药物治疗细胞移植治疗外科手术治疗中医对帕金森病的认识历代医家对颤证的描述颤证的病因病机颤证的辨证治疗用针刺灸法调理经络治疗中药辨证施治疏筋解毒汤药理研究实验研究实验材料实验试剂实验仪器实验设计和技术路线模型大鼠的制备实验动物分组实验原理模型制备灌胃取组织分析的表达主要试剂配制引物序列设计实验步骤总的提取总逆转录为扩增电泳实验结果分析方法疏筋解毒方对大鼠黑质表达的影响疏筋解毒方对大鼠黑质表达的影响结论讨论参考文献致谢疏筋解毒汤干预大鼠黑质内质网应激的实验研究引言帕金森病是种常见于中老年的神经系统变性疾病，临床上以静止性震颤运动迟缓肌强直和姿势步态障碍为主要特征。此外病人还可出现慌张步态面具脸小字征吞咽因难自主神经功能障碍和痴呆等表现。年英国医生首先描述了的系列特殊症候群。本病目前尚无彻底治愈的方法，是目前医学还未能攻克的顽疾。据流行病学调查发现，其发病率有逐年增高并向高龄移动的趋势，我国帕金森病患病率约为万，在岁以上的人群中患病率达到，由此推算我国的患病人数约为万。最新调查显示我国岁以上人群中患病率达到，接近美国的患病率。由此可见，对帕金森病的防治具有重要的现实意义。近年来现代医学对帕金森病的研究取得了显著的进展。在发病机制上公认的学说有自由基学说线粒体功能异常兴奋性神经毒性作用细胞凋亡神经胶质细胞的免疫调节机制内质网应激等。其中内质网应激是目前研究的热点。在治疗方面，临床上常用的药物有多巴胺补充剂抗胆碱能药抗组织胺药物多巴胺受体激动剂单胺氧化酶抑制剂儿茶酚氧位甲基转移酶抑制剂神经营养剂等。其中左旋多巴，为治疗的首选药物，是目前检验治疗效果的金标准，但该药无法阻止病程的进展，而且应用年后效果明显下降，同时部分病人会出现剂末和开关现象，以及运动障碍精神异常等多种严重副反应。除药物治疗外，临床上还采用立体苍白球切开术外科立体定向丘脑外侧核损毁术干细胞移植术等外科治疗方法。虽然部分手术病例疗效较好，但手术可能出现严重并发症，远期疗效不稳定且费用昂贵，胎儿黑质脑移植因需要多个胎脑在全球开展此方法较为困难。中医对本病的认识可以追溯到黄帝内经，并经后世医家的逐步完善已经形成较为系统的理论体系，疗效也得到了众多学者的认可。中医认为本病病位在筋或脑，基本病机为肝风内动，筋脉失养，总属本虚标实。本虚责之于肝肾不足气血阴精亏虚髓海空虚，标实见于风热痰瘀毒，可单独为患，或相兼致病，迁延日久，最终导致脑髓不充筋脉失养而发病。发病初期以邪实为主，多由痰热交阻，血瘀内停，风阳内动所致。中后期往往属于本虚标实，虚实夹杂，以虚为主。治疗依据辨证陕西中医学院届硕士学位论文论治的中医基本原则，常用的方法有益气养血培补肝肾清热化痰平肝熄风理气活血等法。专方治疗是目前较受关注的方法，并且已经取得定的进展。疏筋解毒汤以大多数患者常见的基本证候阴血亏虚虚风内动为依据，又结合现代中医所认识到的毒损脑络可导致帕金森病的病理机制，立法处方，经过课题组多年临床应用和前期的实验观察，证明该方可滋肾阴养肝血活血祛瘀息风止颤疏筋解毒，对轻中度帕金森患者有较好的疗效，并且能减轻患者服用西药的毒副作用。为进步揭示本方治疗帕金森病的机制，本实验通过研究疏筋解毒汤对细胞内质网应激的干预作用，从分子生物学水平揭示该中药处方治疗帕金森病的机理。本课题是在导师王亚丽教授精心指导下完成的，课题来源于国家自然科学基金项目课题编号，得到了该项目基金的资助，保障了实验的顺利完成。疏筋解毒汤干预大鼠黑质内质网应激的实验研究研究背景西医对帕金森病的认识年英国医生首先提出并系统描述本病，经过近两个世纪的研究，帕金森病的临床特征及部分病因发病机制已经被逐渐发现并阐明，治疗方法也有定的进展。的临床表现的临床表现较为复杂，是由于基底节病变而导致的锥体外系症状。常见的典型症状有静止性震颤典型表现呈搓丸样动作，常为多数患者的首发症状，静止时出现或更加明显，故名为静止性震颤。肌强直典型表现为铅管样强直和齿轮样强直。运动迟缓动作缓慢笨拙，并进行性加重。可呈现面具脸。姿势步态障碍典型表现为冻结现象及慌张步态。的病理改变病理改变主要在黑质纹状体尾核和壳核，主要病理学特征是脑黑质纹状体多巴胺能神经元变性坏死，以及残存的多巴胺神经元中出现路易小体，泛素突触核蛋白。多巴胺神经元变性坏死，导致黑质纹状体多巴胺分泌不足，多巴胺与乙酰胆两种神经递质平衡失调，当多巴胺能神经元少于正常数量的，多巴胺分泌量降低至正常量时，影响锥体外系的正常功能，患者开始出现临床症状。黑质纹状体多巴胺神经递质水平低下是发生的最主要机制之。的病因及发病机制的病因和发病机制尚未明确，目前医学领域较为有依据得到大多数学者认同的观点有如下几个方面遗传因素目前认为约的帕金森患者有家族史，且已经有个与家族性帕金森病相关的基因被克隆，分别命名为。已经证实基因突变呈常染色体显性遗传，基因突变后，其异常表达可导致多巴胺神经元变陕西中医学院届硕士学位论文性和凋亡，且其表达产物是路易小体的主要成分。环境因素世纪年代学者发现神经毒性物质甲基苯基四氢吡啶可诱发人类出现典型的帕金森病临床表现。无神经毒性，具有很高的亲脂性并极易通过血脑屏障，选择性地积聚在黑质周围，并被单胺氧化酶转变为强毒性的后被多巴胺转运体，摄入黑质多巴胺神经元内，抑制线粒体呼吸链复合物的活性，耗竭胞内储备，引起多巴胺胞质内再分布，增强多巴胺依赖性氧化应激，促进自由基过度生成，导致多巴胺能神经元变性坏死。环境中除草剂和些杀虫剂以及部分工业毒素有着与类似的结构，如百草枯联二苯杀虫剂鱼藤酮柴油机废气成分等，并通过类似的机制导致多巴胺神经元变性坏死而发病。神经系统老化主要发生于老年人，小于岁人群很少发病，岁以上人群中帕金森病的发病率为，岁以上人群中发病率为，平均发病年龄是岁。资料显示岁以后随年龄增长，黑质能神经元呈退行性变，递质逐年减少，酪氨酸羟化酶及多巴脱羧酶活力逐年降低，存留的神经元内出现特征性路易小体。提示衰老与帕金森的发病有关。氧化应激及自由基损害细胞在氧化代谢过程中会产生自由基和其他含有过氧化氢的活性氧物质，。在发病中发挥重要作用，它可以激活促分裂蛋白激酶和氨基端激酶，引起细胞色素从线粒体中释放，从而导致系列活性因子如等的裂解，并最终激活下游的