术及工艺方案，与吉林农业大学合作，取得了基因重组纤维素酶第二代工程菌株及菌株构建技术的所有权详见附件技术合同。已完成的研究开发工作及中试情况和鉴定年限本项目已完成基因重组纤维素酶工程菌株构建，该菌株现保存于吉林农业大学食品科学与工程学院实验室深冻冰箱中。年初已经在吉林农业大学完成了中试，中试结果与实验室试验结果致详见吉林农业大学生化实验室检测报告。中试及小规模生产样品已交付用户使用，用户已出具使用报告详见宁夏夏盛果汁果酒酶有限公司传真函。科大公司技术专家已经针对基因重组纤维素酶生产工艺条件开发了连续发酵等生产工艺。此外，公司技术专家有十年以上纤维素酶生产经验，已经掌握了成熟的纤维素酶生产工艺，因此，可以实现产业化生产。公司专家已经设计了纤维素酶系列产品生产线，主体设备及内部构件和管路连接已经完成。配套设备及装饰工程完工后即可投入生产。必要的说明。纤维素酶工程菌株的构建采用的是国际前沿的生物工程技术及基因打靶技术，但是，酶制剂生产工艺是公知技术。此外，生产过程的发酵条件优于实验室条件，因此，只要中试设定条件与生产工艺条件致，那么，所生产出来的产品性能将优于中试。技术或工艺特点以及与现有技术或工艺比较所具有的优势技术原理纤维素酶自然界中纤维素的降解需要内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶共同作用。纤维素降解过程首先被外切纤维素酶的吸附到不溶性纤维素表面，使结晶结构的纤维素长分子链开裂，聚集结构解聚，长链分子末端部分发生游离从而为纤维素水解酶类的作用提高了可及性和反应性，从而使纤维素易于水化之后内切酶作用于经外切活化的纤维素，分解其，键，产生纤维二糖三糖等短链低聚糖。在内切葡聚糖酶外切葡聚糖酶和，葡萄糖苷酶的协同作用下，纤维素的，糖苷键逐步水解，形成纤维寡糖和葡萄糖。其催化机理与溶菌酶相似，糖苷配基的脱去涉及个保守羧基氨基酸分别作为质子供体和亲核试剂执行酸碱催化的双置换反应谷氨酸位于细菌台普通冰箱台全自动计台精密天平台分光光度计台水浴锅台恒温空调机套液相分析仪发酵车间不锈钢种子罐个不锈钢种子罐个不锈钢二级种子罐个不锈钢玉米浆罐个不锈钢液氨贮罐个不锈钢配料罐个不锈钢絮凝罐个不锈钢盐析罐个不锈钢中间罐个变频调速系统套不锈钢盐罐个全自动计台不锈钢发酵罐个不锈钢发酵罐个不锈钢发酵罐个操作系统套专家诊断系统套干燥车间气流干燥器套固体干燥塔套喷雾造粒干燥套提取精制车间不锈钢板框过滤机台不锈钢混液罐个不锈钢超滤循环罐个不锈钢全自动超滤机套不锈钢浓酶液配方罐个不锈钢精滤板框台不锈钢二滤板框台包装车间项目建设的意义和必要性国内外现状及技术发展趋势世纪年代以来，市场这只看不见的手使传统的工业文明达到了鼎盛时期。工业化在创造传统工业文明的同时，也对现代经济社会发展的生态基础造成了根本性的破坏，资源环境和生态危机日益严重，其直接原因是世纪以来造成人与自然尖锐对立的非持续的工业生产技术，其本质在于单纯的市场调节已无力减少技术发展的边际外部费用递增趋势。生物技术革命将促使有害生态环境的技术向无害化并能保护生态环境的方向发展，从而引起了社会生产技术体系的变化和飞跃。生物技术创新及其产业化，将为人类社会创造新的更高水平的文明开辟了广阔的空间。运用生物工程技术，将使经济发展投入的资源少，利用率高，产出的产品或服务多，废弃物少，因此，人类将对生物工程技术产品的需求也将不断增加，生物技术在产业结构调整中的作用也将不断提高，生物工程技术创新将日益被重视，生物技术产品的市场将越来越广阔。生物酶制剂作为现代工业不可或缺的催化剂，主要技术直为西方发达国家所垄断，尤其是高活力的纤维素酶，基因重组工程菌株直被丹麦诺维信和美国杰能科等少数西方发达国家的企业所垄断，我国迄今为止尚无使用基因重组工程菌株进行产业化生产的企业。构建具有自主知识产权的基因重组纤维素酶工程菌株，生产高活力热稳定性好的纤维素酶是目前我国酶制剂行业的发展方向，因此，国务院办公厅颁发生物产业发展十五规划国办发号明确强调支持纤维素酶和半纤维素酶基因工程菌株技术开发及产业化应用，也是国家科技部科技济价值。市场分析该项目产品的主要应用领域为饲料麻棉纺织制药生物发酵等行业，该项目产品是上述行业产品生产过程中不可或缺的添加剂。据不完全统计，国内市场纤维素酶年需求大约万吨以上，年至年该类产品年需求增幅为国际市场年需求大约万吨，主要集中在欧美地区，占国际市场总消耗量的，而且需求量正在以每年的速度增长。此外，除燃料酒精行业外，用户直接使用的是复合酶，纤维素酶在复合酶中添加比例般为左右，因此，纤维素酶市场需求量的统计般以复合酶用量为依据。复合酶年用量统计如下详见附件饲料行业我国年产饲料亿吨左右，按每吨饲料添加公斤复合酶计算，年复合酶用量约为万吨左右，其中纤维素酶添加量为万吨左右。麻棉纺织行业我国洗涤复合酶年用量万吨左右，其中纤维素酶添加量为万吨左右。啤酒行业我国年产啤酒万吨左右，需大麦或小麦万吨，按每吨添加公斤计算，啤酒复合酶年用量万吨左右，其中纤维素酶添加量为万吨左右。燃料酒精行业该行业为纤维素酶潜在的巨大市场。目前我国年产燃料酒精万吨，预计年年产量将达到万吨。纤维酶是生产非粮燃料酒精必须使用的催化剂，按每吨原料生产吨燃料酒精计算，预计年，秸秆等非粮原料年用量最少万吨，纤维素酶投料比按每吨原料计算，年需求量将达到万吨左右。产品销售酶制剂生产厂家般不直接面对终端用户，只面对销售代理商。因此，我公司现阶段只向相关代理商销售产品并已签订了意向协议，相关情况如下国内销售我公司已经和最大的销售商夏盛集团签订了意向销售合同，夏盛集团还出具了产品包销承诺书及该公司和用户签订的销售合同及供货计划。产品出口我公司正在和杰能科公司嘉吉公司进行接洽，公司经营副总曾任杰能科公司技术负责人，熟悉国外市场，产品出口前景广阔。与国家高技术产业化专项总体思路原则目标等关联情况该项目属于生物技术类，是国务院办公厅生物产业发展十五规划国办发号微生物技术专项重点支持项目是国家科技部科技支撑计划生物技术产品中试与规模化生产配套技术与工艺的研究与示范重点支持项目该项目年已经列入吉林省科技发展计划，分别被评为重大和重点项目并获得省长基金支持该项目是地方农业产业化龙头项目，是国债资金重点支持的项目。二项目支撑计划生物技术产品中试与规模化生产配套技术与工艺的研究与示范重点支持项目。基因重组纤维素酶项目对相关产业发展的作用与影响提升酶制剂行业整体水平由于该项目是我国酶制剂行业第个采用具有自主知识产权的工程菌株进行产业化生产的项目，因此，对提高我国酶制剂行业和国外企业的竞争能力，提升行业整体水平具有积极意义。提高用户产品质量降低生产成本采用该项目产品，对提高我国纺织行业饲料行业中药行业产品质量，降低生产成本，增强产品的市场竞争能力具有重要作用。该项目对关联产业的影响促进非粮燃料酒精尽快实现产业化，化解能源危机，保障粮食安全近年来，由于能源紧缺和技术手段的缺乏，我国不得不以粮食作为原料生产燃料酒精，但是由于保障粮食安全的需要，发展非粮燃料酒精是现阶段解决能源短缺的必由之路。秸秆燃料酒精的产业化生产，必须使用纤维素酶，因此，该项目的产业化是非粮燃料酒精产业化生产的关键因素之，非粮燃料酒精的产业化对缓解能源危机保障粮食安全具有重要的战略意义。推动农业产业结构的调整该项目生产的主要原材料是秸秆，由于原料在产地必须进行初发酵，因此，在农村将产生新的初发酵行业，同时，基因重组纤维素酶面市后，在农村还将产生以纤维素酶作为催化剂，生产秸秆糖化饲料的发酵企业。因此，该项目对地方农业产业结构调整，加快社会主义新农村建设，拉动农民致富，加快农村小康社会进程具有积极意义。推动地方经济的发展吉林市地处边疆近海省，自然环境优越，是我国最具魅力的城市之，是福布斯排行榜评价最适合发展工业的城市，是吉林省玉米，水稻的主要产区之。但是，吉林市经济发展不平衡，缺少生物工程高新技术项目。引进生物工程高新技术企业，扶持地方农业产业化龙头项目是吉林市经济发展的重大举措之，因此，该项目成为吉林市政府和吉林高新技术产业开发区重点招商引资项目。有利于资源再利用发展循环经济提高资源经济价值玉米及其它粮食秸秆多年以来直作为废弃物或燃料，其经济价值几乎趋于零。基因重组纤维素酶项目采用的主要原料是玉米秸秆。这资源是可再生资源，经过粗加工，每吨玉米秸秆价格可以达到元，而制成纤维素酶，以粗加工的秸秆为基数，每吨秸秆产生的价值可提升十倍左右，提高了资源利用率，提升了资源的经用先进的分子生物学技术，构建成功高活力纤维素酶工程菌体，超过国内目前使用的生产菌体的产酶能力，达到了国际先进水平。供试菌种绿色木霉中国科学技术大学生命科学学院基因工程实验室保藏。启动子选择。载体中国科学技术大学生命科学学院基因工程实验室构建，包含显性标记。培养基及培养条件麦芽汁液体培养基培养。试剂购自公司，购自上海生工公司，限制性内切酶购自公司。真菌总的提取离心收集菌体，加入提取液充分振荡后加入及氯化苄振荡混匀，保温，每隔振荡次加入醋酸钠，离心，收集上清，用异丙醇沉淀得到总。扩增序列根据已知绿色木霉序列，设计引物，由上海生工公司合成扩增用标准反应体系进行反应。循环条件预变性，变性，复性，延伸，个循环后再延伸。重组质粒载体的构建用试剂盒从胶中回收产物，得到约的片段，将其用酶补平后回收纯化。将质粒载体在多克隆位点用限制性内切酶消化，产生的粘性突出末端用酶补平并将其回收纯化，将上述两个片段以合适的比例建立反应体系，转化大肠杆菌，获得重组质粒载体。对筛选到的重组质粒用内切酶和进行鉴定分析，所扩增的片段含有完整的序列。重组质粒载体的构建将质粒载体在用限制性内切酶消化，产生的粘性突出末