1、饲料中可添加抗菌药物免疫增强类药物或饲料添加剂等。规模化猪场猪圆环病毒病防控技术规范。江苏省地方标准规模化猪场猪圆环病毒病防控技术规范发布实施江苏省市场监督管理局发周可以再免疫次。孔细胞板微量离心管和移液器配套的吸头等。细胞单克隆抗体病毒液和荧光标记抗羊抗鼠或抗猪。操作方细胞制备用含小牛血清的营养液培养细胞,长满单层后,弃营养液,用液洗涤单层次次后,用胰酶消化,铺在孔板上,培养,细胞长满单层。接种样品将细胞培养物接种孔细胞单层板上,孔,吸附,弃培养液,加入维持液含血清的营养液,孔,同时,设病毒液和缓冲液的接种,分别作为阳性对照和阴性对照,培养。弃培养液,每孔加入浓度为的氨基葡萄糖液,培养,弃去氨基葡萄糖液换细胞维持液,继续培养。固定弃维持液,用缓冲液参见附录洗涤细胞次,充分晾干后,加入预冷的无水乙醇,固定,用缓冲苏省市场监督管理局发布目 次前言范围规范性引用文件术语和定义诊断疫情报告与处置预防与控制附录规范性附录附录规范性附录前 言本标准按照给出的规则起草。本标准由南京农业大学提出并归口。本标准起草单位南京农业大学。本标准起草人姜平白娟王先炜李玉峰陈闻曹瑞兵周斌许家荣规模化猪场猪圆环病毒病防控技术规范范围本标准规定了猪圆环病毒病的诊断疫情报告疫情处置预防与控制等技术规范。本标准适用于规模化猪。
2、离子水定容至。封闭液称取,溶解于中。载玻片及盖玻片的处理将新的载玻片浸泡酸中过夜,用自来水充分冲洗后,去离子水清洗干净,并在温箱中烘干。如有必要,可用的多聚甲醛浸泡后烘干。切片贴片与烤片将蜡块修整到比组织块略大,在切片机上厚度连续切片。将切好的组织在水浴中充分展平后,贴于载玻片上。贴片后平放段时间,防止组织滑落,然后置于染色架上烤片过夜。处理好的组织切片可置于保存。脱蜡和水化将组织片置于甲苯中浸泡,更换甲苯后再浸泡无水乙醇中浸泡,重复次乙醇中浸泡,重复次乙醇中浸泡,重复次乙醇中浸泡,重复次清洗,复洗次。抗原修复在微波炉中将柠檬酸盐缓冲液附录加热至沸腾后,将组织切片置于缓冲液,继续在微波炉中维持,取出后自然冷却至室温,然后用清洗,复洗次。封闭内源性过氧化物酶将清洗好的组织切片擦干或自然干燥后,滴猪圆环病毒型检测方法实时定量病死及病害动物无害化处理技术规范农医发号术语和定义下列术语和定义适用于本文件。猪圆环病毒病,又称猪圆环病毒相关性疾病,是由猪圆环病毒型感染引起的具有多种临床表现的疾病,主要包括断奶仔猪多系统衰竭综合征猪皮炎肾病综合征猪呼吸道疾病综合征母猪繁殖障碍和肉芽肿性肠炎。猪圆环病毒型感染侵染猪体,并在定部位定居生长繁殖,引起猪体系列病理反应和免疫反应的过程,包括亚临床感染和隐性感染。诊流行。
3、福尔马林取甲醛溶液,加蒸馏水定容至,混匀,保存。多聚甲醛取多聚甲醛粉末,加蒸馏水定容至,混匀,瓶,保存。甲醇溶液取,加甲醇溶液定容至,混匀,保存。的牛血清白蛋白取新生牛血清,加缓冲液定容至,混匀,保存猪繁殖障碍流产胎儿可能出现心肌肥大和肝脏充血。芽肿性肠炎肠黏膜增厚,肠系膜淋巴结肿大,小肠壁剪开后自动外翻。组织病变不同临床表现的猪圆环病毒病,患猪的组织学病变有定共性,主要包括淋巴结淋巴细胞减少,淋巴滤泡消失,出现多核巨噬细胞侵润及包涵体。脾脏和扁桃体细胞滤泡消失,出现包涵体。肺脏坏死性和溃疡性细支气管炎,肺泡隔膜的肉芽肿性炎症和细支气管周边的肉芽肿性增生和混合性炎症。实验室诊断样品采集保存与运基本要求按照兽医诊断样品采集保存与运输技术规范标准的要求进行。组织样品采集与运送采取发病猪色荧光的细胞。结果判定细胞形态规则,且对照孔内细胞核内含有大量特异性绿色荧光,阴性血清对照孔内无特异绿色荧光时,则试验成立。样品孔细胞核内有荧光着染,则判检测为阳性。以荧光着染阳性细胞孔的最高血清稀释倍数作为血清抗体的检测效价。附录规范性附录试剂配缓冲液取和,溶于灭菌去离子水中,定容至,分装瓶。保存。抗原包被液,称取,加去离子水,用的调值至,加去离子水定容至。封闭液称取,溶解于洗涤液中,滤膜过滤,分装后保存。血清样品稀。
4、病学可以感染各种年龄不同性别的猪,多呈亚临床感染。传播途径有水平传播和垂直传播。临床疾病多伴存在其他病原混合感染或继发感染。免疫组化法检测抗主要仪器材料和试剂石蜡组织切片机显微镜微量移液器规格甲醇溶液,于室温中孵育,以封闭内源性过氧化物酶,防止非特异性染色。然后用清洗次,每次。封闭用浓度为的牛血清白蛋白作为封闭液,滴加在组织上,每块组织滴加,于室温封闭,用清洗次,每次。加抗体孵育将单克隆抗体或阳性猪血清作适当稀释后,滴加在组织切片上,每片组织滴加,置于湿盒内,孵育。孵育后,用清洗,重复次。加抗孵育将标记羊抗鼠或标记羊抗猪用作稀释后,每组织片滴加,孵育。用清洗,重复次。显色将组织片擦干,滴加显色液,于室温显色可在显微镜下掌握染色程度,清洗,重复次。苏木精复染脱水透明和封片苏木精染色,水洗蓝化在显微镜下掌握染色程度,过度可用盐饲养管理完善日常饲养管理制度,严格实施全进全出和分群饲养制度,保持合适的饲养密度。尽量减少对猪群的应激。注意环境清洁,改善空气质量,控制猪舍温度。改善饲料的质量,提高猪群的营养水平。保育舍内设立独立的饮水加药设施。产房保育舍配种怀孕舍育肥舍和公猪舍应定期做好带猪消毒。生产区内,出入猪舍的各种器具推车和饲喂工具应每天刷洗干净,定期消毒。母猪产前周和产后周保育仔猪断奶后第周和第周,。
5、存。终止液取去离子水,缓慢加入,瓶,酒精分化。梯度酒精脱水次次次次。甲苯透明,次。取出,待甲苯尚未挥发完全时,中性树胶封片。观察将染色处理后的切片置显微镜下,观察组织细胞形态结构淋巴细胞数量,尤其是有无细胞着染情况。结果判定在高倍显微镜下观察,切片组织中出现棕黄色着染细胞,判为抗原检出阳性。免疫荧光试验检测抗主要仪器材料和试剂荧光倒置显微镜操净工作台高速台式冷冻离心机和微量移液器规格。孔细胞板微量离心管和移液器配套的吸头等。细胞病毒液阳性对照血清和阴性对照血清荧光标记抗羊抗鼠或抗猪。操作方细胞制备用含小牛血清的营养液培养细胞,长满单层后,弃营养液,用液洗涤单层次次后,用胰酶消化,铺阴性对照血清,各加个孔,每孔加入,孵育。漂洗用洗涤次,每次。加荧光抗孵育加入用缓冲液作稀释的荧光抗,如羊抗猪或,每孔,孵育。漂洗同。观察于荧光显微镜下,仔细观察细胞形态及有无绿色荧光的细胞。结果判定细胞形态规则,且对照孔内细胞核内含有大量特异性绿色荧光,阴性血清对照孔内无特异绿色荧光时,则试验成立。样品孔细胞核内有荧光着染,则判检测为阳性。以荧光着染阳性细胞孔的最高血清稀释倍数作为血清抗体的检测效价。附录规范性附录试剂配缓冲液取和,溶于灭菌去离子水中,定容至,分装瓶。保存。抗原包被液,称取,加去离子水,用的调值至,加去。
6、抗体检测方法采用商品化的间接抗体检测试剂盒进行检测。规模化猪场猪圆环病毒病防控技术规范。免疫组化法检测抗主要仪器材料和试剂石蜡组织切片机显微镜微量移液器规格。病理组织染色缸载玻片盖玻片和移液器配套的吸头等。中性福尔马林多聚甲醛甲醇溶液的牛血清白蛋白甲苯乙醇石蜡单克隆抗体阳性对照血清和阴性对照血清标记羊抗鼠或标记羊抗猪和苏木精染色液等。操作方组织固定与修块采集待检猪淋巴结肺脏肾脏脾脏肝脏肠道心脏等组织,大小,置缓冲福尔马林中固定后,将组织修成的小块,再置多聚甲醛中固定。脱水透明与包埋将固定好的组织取出,可稍作修整后,置于脱水筐中,用梯度酒精脱保存。缓冲福尔马林取甲醛溶液,加蒸馏水定容至,混匀,保存。多聚甲醛取多聚甲醛粉末,加蒸馏水定容至,混匀,瓶,保存。甲醇溶液取,加甲醇溶液定容至,混匀,保存。的牛血清白蛋白取新生牛血清,加缓冲液定容至,混匀,保存猪繁殖障碍流产胎儿可能出现心肌肥大和肝脏充血。芽肿性肠炎肠黏膜增厚,肠系膜淋巴结肿大,小肠壁剪开后自动外翻。组织病变不同临床表现的猪圆环病毒病,患猪的组织学病变有定共性,主要包括淋巴结淋巴细胞减少,淋巴滤泡消失,出现多核巨噬细胞侵润及包涵体。脾脏和扁桃体细胞滤泡消失,出现包涵体。肺脏坏死性和溃疡性细支气管炎,肺泡隔膜的肉芽肿性炎症和细支气管周边的肉芽肿性。
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DB32T 3777-2020 规模化猪场猪圆环病毒病防控技术规范