1、分装高压灭菌，。犅包被缓冲液碳酸盐缓冲液，碳酸钠碳酸氢钠氯化钠加去离子水至。犅洗液含的的，即犛犖犜加不成立，予以重做。判定标准在定量试验中，按或方法计算半数保护量，即为该血清的中和效价。结果判定与解释将孔板置于倒置显微镜判读。阳性对照在显微镜下细胞浆可能仅见于部分细胞出现弥漫状或团块状棕红色着染，阴性对照空白对照无棕红色着染。如果没有经过阳性抗体作用的细胞孔出现棕红色着染，而经过阳性抗体抑制的同样品无棕红色着染，则判为阳性。如果对照不成立，则试验失败，重新检测。犛犖犜微量血清中和试验仪器试剂溶液及细胞培养液参见附录。标准毒株或和标准阳性阴性血清。细胞使用细胞或代，呼吸道充血，鼻孔出血，唇和口腔粘膜有烂斑，肠系膜淋巴结以及集合淋巴滤泡肿大坏死，冠状沟和心。

2、标准的附录和附录均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位中华人民共和国福建出入境检验检疫局中华人民共和国辽宁出入境检验检活，含青霉素，链霉素，抽滤除菌，置保存备用。犅细胞分散液胰酶乙胺乙酸钠无钙镁离子混匀抽滤除菌，置保存备用。犅无钙镁犘犅犛氯化钠氯化钾磷酸氢钠磷酸氢钾级水将上述成分依次溶解混匀分装高压灭菌，。犅磷酸盐缓冲液，氯化钠氯化钾十水磷酸氢钠磷酸氢钾级水将上述成分依次溶解混匀分装高压灭菌，。犅包被缓冲液碳酸盐缓冲液，碳酸钠碳酸氢钠氯化钠加去离子水至。犅洗液含的的，即双抗的细胞培养液研磨，离心取上清液。犛犖犜样品的培养取生长良好，形成以上单层的细胞，倒去培养液，接种处理好的样品，每瓶接种，每个样品接种个细胞瓶，同时直。

3、烂。特征性损害是食道粘膜有大小不等的形态与直线排列的糜烂，胃粘膜水肿和糜烂。犃检疫及诊断根据消化系统充血出血水肿糜烂和溃牛病毒性腹泻粘膜病检疫规范.犛犖犜加的至。犅底物缓冲液磷酸氢钠柠檬酸，十水磷酸氢钠柠檬酸去离子水使用前称邻苯胺溶解在上述溶液中，完全溶解后再加过氧化氢，混合后立即使用。犅终止液硫酸浓硫酸去离子水犛犖犜书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准牛病毒性腹泻粘膜病检疫规范中国标准出版社出版北京复兴门外里河北街号邮政编码网址电话中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本印张字数千字年月第版年月第次印刷印数书号定价，抽滤除菌，置保存备用。犅细胞分散液胰酶乙胺乙酸钠无钙镁离子混匀抽滤除菌，置保存备用。犅无钙镁犘犅犛氯化钠氯化钾磷酸氢钠磷酸氢。

4、。感作将酶标板封板后，在振荡器上混合后，置下过夜感作或犛犖犜下感作。洗涤弃掉各孔液体，每孔加入已稀释好的洗涤液，轻轻振动加个稀释度即∶稀释，其他步骤与定量方法相同。被检样品毒性对照每孔加被检血清原样，设孔。细胞对照每孔加维持液，设孔。病毒回归对照将病毒稀释成，每个稀释度孔，每孔加病毒悬液，维持液。以上对照和被检样品置温箱中作用后，每孔加入个细胞悬液，置氧化碳培养箱培养。结果判定在氧化碳培养箱培养第天开始观察结果，连续观察天判定结果。当病毒用量在范围内，阴性血清对照出现典型细胞病变，阳性血清对照无细胞病变，被检血清对细胞无毒性，细胞对照正常，证明试验成立，可以进行结果判定，否则，试验，抽滤除菌，置保存备用。犅细胞分散液胰酶乙胺乙酸钠无钙镁离子混匀抽滤除菌，置保。

5、阳性血清对照无细胞病变，被检血清对细胞无毒性，细胞对照正常，证明试验成立，可以进行结果判定，否则，试验不成立，血清编号后备用。本方法使用的阳性血清阴性血清和被检血清应经过灭活处理。无抗体胎牛血清，细胞分散液。标准细胞培养瓶，孔无菌细胞培养板，微量可调移液器。倒置光学显微镜。氧化碳培养箱。种毒的制备将标准毒用维持液作倍稀释，取长成良好单层的细胞，用洗次后，按培养液十分之的量接种病毒，置作用，加入维持液，氧化碳培养箱培养至细胞出现病变，收获病毒，放至冻融次或者超声波裂解个循环，每次，冰浴，离心，取上清液，分装小瓶，置保存备用。病毒的毒力测定将制备的标准病毒抗原，用维持液作倍后甩掉，连续洗涤次。最后次洗涤后，将酶标板在吸水纸上轻拍，除去孔内剩余的液体。加酶标结合物。

6、接接种样品稀释液作为阴性对照。置氧化碳培养箱吸附。倒去样品，加入维持液，氧化碳培养箱培养。收获病毒，同样品瓶混合，放至冻融次后进行下步鉴定。荧光抗体法鉴定将生长良好的细胞，用细胞分散液处理后，制备成个的细胞悬液，加入孔细胞培养板内，每孔，置培养。待细胞生长成的单层，吸出孔内培养液，接种样品培养物，每孔，每个样品个孔。阴性阳性和空白细内未感染病毒的胎牛肾细胞。被检血清无菌自牛静脉采血，分离血清编号后备用。本方法使用的阳性血清阴性血清和被检血清应经过灭活处理。无抗体胎牛血清，细胞分散液。标准细胞培养瓶，孔无菌细胞培养板，微量可调移液器。倒置光学显微镜。氧化碳培养箱。对照加阴性对照血清至酶标板的孔加阳性对照血清至孔。加样在酶标板的其他相应孔中各加入已稀释好的被检样。

7、内膜有出血斑等，可以做出初步诊断，进步确诊应依靠实验室检查。目前已建立和应用的实验室诊断技术有病毒的分离与鉴定免疫荧光试验免疫过氧化物酶单层试验抗原捕获酶联免疫吸附试验和血清中和试验等。犛犖犜附录犅资料性附录溶液配制犅培养液培养基，加入无病毒抗体胎牛血清，灭活，含青霉素，链霉素，抽滤除菌，置保存备用。犅维持液培养基，加入无病毒抗体胎牛血清，灭活，含青霉素，链霉素持液作倍递增稀释至，每个滴度接种细胞培养板个孔，每孔，随后每孔加入细胞悬液和细胞维持液。同时每板设孔细胞对照。置氧化碳培养箱，逐日观察至，记录细胞病变，按或方法计算细胞半数感染量。操作程序阴性血清对照每孔加阴性血清的病毒悬液，设孔。阳性血清对照每孔加阳性血清的病毒悬液，设孔。被检样品在定量试验中，先。

8、将被检血清用维持液作∶∶连续倍比稀释至后加到孔板中，每稀释度孔，每孔，然后每孔再加的病毒悬液。在定性试验中，将被检血清版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分析实验室用水规格和试验方法疾病概述牛病毒性腹泻，是由牛病毒性腹泻病毒，引起的种以腹泻为临床特征的传染病，可导致怀孕母牛的流产死胎致畸或新生犊牛的持续感染，它具有高度传染性，但症状和病变较轻，发病率高而死亡率低。粘膜病，也是由引起的种以牛的急性型口腔消化道粘膜发炎糜烂溃疡为特征的传染病。它和牛病毒性腹泻是同病原引起，但表现不同的临床症状，发病加个稀释度即∶稀释，其他步骤与定量方法相同。被检样品毒性对照每孔加被检血清原样，设孔。细胞对照每孔加维持液，设孔。病毒回归对照将病毒稀释成，每个稀释度。

9、实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前言本标准代替牛病毒性腹泻粘膜病病毒微量血清中和试验操作规程和牛病毒性腹泻粘膜病病毒分离操作规程。本标准的附录和附录均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位中华人民共和国福建出入境检验检疫局中华人民共和国辽宁出入境检验检度即∶稀释，其他步骤与定量方法相同。被检样品毒性对照每孔加被检血清原样，设孔。细胞对照每孔加维持液，设孔。病毒回归对照将病毒稀释成，每个稀释度孔，每孔加病毒悬液，维持液。以上对照和被检样品置温箱中作用后，每孔加入个细胞悬液，置氧化碳培养箱培养。结果判定在氧化碳培养箱培养第天开始观察结果，连续观察天判定结果。当病毒用量在范围内，阴性血清对照出现典型细胞病变，。

10、每孔加入辣根过氧化物酶标记的牛抗鼠抗体。感作和洗涤将酶标板封膜后，置室温下，感作。重复洗涤。加底物每孔加入底物溶液。感作将酶标板置下黑暗处感作，从加完第孔开始计时。加终止液每孔加终止液，终止颜色反应。测定吸光值酶标仪以空气作为空白对照，于内，在波长下测量和记录样品和对照的值。试验有效性检测只有在阳性对照孔所得的平均值减去阴性对照孔所得的平均值大于，且阴性对照孔所得的平均值小于时，测定结果才有效牛病毒性腹泻粘膜病检疫规范.，抽滤除菌，置保存备用。犅细胞分散液胰酶乙胺乙酸钠无钙镁离子混匀抽滤除菌，置保存备用。犅无钙镁犘犅犛氯化钠氯化钾磷酸氢钠磷酸氢钾级水将上述成分依次溶解混匀分装高压灭菌，。犅磷酸盐缓冲液，氯化钠氯化钾十水磷酸氢钠磷酸氢钾级水将上述成分依次溶解混。

11、存备用。犅无钙镁犘犅犛氯化钠氯化钾磷酸氢钠磷酸氢钾级水将上述成分依次溶解混匀分装高压灭菌，。犅磷酸盐缓冲液，氯化钠氯化钾十水磷酸氢钠磷酸氢钾级水将上述成分依次溶解混匀分装高压灭菌，。犅包被缓冲液碳酸盐缓冲液，碳酸钠碳酸氢钠氯化钠加去离子水至。犅洗液含的的，即犛犖犜加以牛的急性型口腔消化道粘膜发炎糜烂溃疡为特征的传染病。它和牛病毒性腹泻是同病原引起，但表现不同的临床症状，发病动物口腔，特别是沿齿龈边沿糜烂，还可出现流泪和大量流涎。该病传染性不高，临床症状明显，发病率低，而死亡率很高。其病原流行病学症状发病机理和病理变化检疫及诊断参见附录。检疫方法病毒分离和鉴定仪器试剂倒置荧光显微镜。牛病毒性腹泻粘膜病检疫规范。本病的主要病理变化是消化道粘膜充血出血水肿和糜。

12、，每孔加病毒悬液，维持液。以上对照和被检样品置温箱中作用后，每孔加入个细胞悬液，置氧化碳培养箱培养。结果判定在氧化碳培养箱培养第天开始观察结果，连续观察天判定结果。当病毒用量在范围内，阴性血清对照出现典型细胞病变，阳性血清对照无细胞病变，被检血清对细胞无毒性，细胞对照正常，证明试验成立，可以进行结果判定，否则，试验书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜代替牛病毒性腹泻粘膜病检疫规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犫狅狏犻狀犲狏犻狉犪犾犱犻犪狉狉犺犲犪犿狌犮狅狊犪犾犱犻狊犲犪狊犲发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前言本标准代替牛病毒性腹泻粘膜病病毒微量血清中和试验操作规程和牛病毒性腹泻粘膜病病毒分离操作规程。本。

参考资料：

[1]“十最教师”颁奖盛典优选课件PPT（25页） 编号314（第25页，发表于2022-06-26 19:35）

[2]“十最教师”颁奖盛典优选课件PPT（25页） 编号260（第25页，发表于2022-06-26 19:35）

[3]“十最教师”颁奖盛典优选课件PPT（25页） 编号254（第25页，发表于2022-06-26 19:35）

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[7]“十最教师”颁奖盛典优选课件PPT（25页） 编号326（第25页，发表于2022-06-26 19:35）

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[10]发扬女排精神实现强国梦想优质课件PPT（18页版） 编号132（第18页，发表于2022-06-26 19:35）

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[20]除夕活动策划方案PPT（优品版） 编号484（第26页，发表于2022-06-26 19:35）