1、,染色体步移将基因定位到染色体的个具体位置上后不断缩小筛选区域进而克隆该基因,研究该基因的功能或抗性的生化机制。可将与已知的标记连锁的基因在染色体上定位。用这种方法已分别克隆到拟南芥菜番茄水稻等植物中的有关抗病基因转座子标记法转座子是可从个基因位置转移到另位置的片段。通过转座子上的标记基因如抗药性等就可检测出突变基因的位置和克隆出突变基因来。利用转座子克隆植物基因的操作步骤主要应是以下几方面把已分离得到的转座子与选择标记构建成含转座子的质粒载体。把转座子导入目标植物。利用杂交等技术检测转座子是否从载体质粒中转座到目标植物基因组中。这是转座子定位和分离目标基因所不可缺少的。④转座子插入突变的鉴定及其分离。目前已在玉米烟草番茄亚麻等植物中克隆出抗。
2、评指正。参考文献现代分子生物学朱玉贤李毅郑晓风编著版北京高等教育出版社基因工程陆德如陈永青主编主编北京化学工业出版社细胞工程殷红主编北京化学工业出版社克隆技术李建凡编著北京化学工业出版社复制生命人类与克隆代天宇编著版北京科学普及出版社化学生物学与生物技术申泮文主编北京科学出版社基因克隆的分子基础与工程原理刘志国屈伸编著北京化学工业出版社基因克隆技术在制药中的应用杨汝德主编北京化学工业出版社分子生物学精要第版美,著魏群等译北京化学工业出版社分子生物技术重组的原理与应用第版美格利克，美帕斯捷尔纳克,编任大明等主译北京化学工业出版社因克隆的基本原理与技术方法大体相同。目前主要是动物转基因技术和动物克隆技术的有机结合，以培育转基因动物和基因打靶克隆动。
3、中可能导致内源基因失活，形成基因功能缺失的转基因动物的研究基因结构与功能的方法。将已引起人排异反应的猪细胞膜上的种糖，半乳糖用基因敲除方法培育基因敲除克隆猪，或将人的基因导入其受体用于器官移植。微生物基因克隆主要培养优良菌株，用于发酵工程生产抗生素干扰素胰岛素激素类生长因子粒细胞集落刺激因子肿瘤坏死因子各种疫苗单克隆抗体生物导弹等生物制品的开发与生产。总之，基因克隆技术潜力巨大，将为医学上展示无比的贡献。基因克隆和分析在法医学和考古学中的应用利用分析鉴定犯罪嫌疑人利用指纹图谱分析血缘关系通过分析进行性别鉴定古遗传学利用研究人类进化特殊动物基因资源的保护。珍稀动物保护如濒危物种大象犀牛野生虎大猩猩熊美国野黄牛大熊猫及鸟类，若能留下已灭绝的动物的。
4、渔畜牧业农作物方面主要克隆培养能改善光合作用充分固氮高产量高蛋白含量维生素延缓衰老且抗病害虫逆境旱寒酸碱盐等除草剂等抗性基因作物并改良品种，加速繁殖等，另外改善植物营养成分如氨基酸糖脂类维生素微量元素等，植物生物反应器等应用也付与实践。动物方面加速动物繁殖及物种优化，如近交动物无特定病原动物基因敲除动物等。另外，打破种间隔离，如加速鱼类骡等优良畜种的培育。利用基因的克隆技术，可满足人们对畜产品的皮毛肉等和实验研究动物的需求，即利于开展对生长发育衰老和健康的机理及疾病预防治疗等方面的研究。转基因动植物的培育指在基因组中稳定地整合了人工导入的外源基因的动植物。外源目的基因包括各种动物的生长激素基因人生长素基因人胰岛素基因抗冻蛋白基因珠蛋白基因白血。
5、杆菌高水平表达时，常常在细胞质内聚集而形成包涵体。在于提高外源蛋白的表达水平和对产物的纯化。融合蛋白的表达所谓融合蛋白是由条短的原核多肽和真核蛋白结合在起的杂合蛋白。融合蛋白的表达载体为了获得正确编码的外源蛋白，外源基因编码区在插入表达载体中原核基因编码区时，阅读框架应保持致，翻译时才不会产生移码突变。表达融合蛋白的优点融合蛋白较易获得高效表达。融合蛋白的端总选择天然的高效表达的宿主蛋白质，其具有较强的翻译能力。融合蛋白在细胞内比较稳定。融合蛋白中目的蛋白的分离纯化酶法。化学法微生物的基因克隆主要应用于优良菌种的保存和发酵工程生产抗生素等生物制品。将在下文介绍。植物的基因克隆由于植物发育，生理生化，分子遗传等学科的迅速发展,使人们掌握了大量有。
6、物为主。转基因动物指将确定的外源基因如人的各种基因通过生殖细胞或早期胚胎导入动物个体的染色体上并能稳定遗传给后代的动物。在其上进行基因操作即为动物转基因技术。基因打靶技术。指建立在同源重组转基因技术胚胎干细胞培养技术和体细胞培养技术基础上的种综合技术。即用人们所设计的段对准靶基因，对目的基因进行剔除修饰，改变生物体遗传信息，产生新代转基因动物。其中涉及动物的克隆主要有胚胎分割人工受精与胚胎移植胚胎干细胞核移植动物胎儿成纤维细胞核移植体细胞核移植雌核生殖。其具体应用在下文介绍三基因克隆技术的具体应用及发展方向基因克隆的广阔应用前景大致可分为两大类繁殖性克隆以获得克隆动物为目的的研究方向。基因克隆技术与遗传育种主要表现在农作物和动物方面。服务农林。
7、性基因人工合成并克隆基因蜘蛛毒素是种小肽，它只有个氨基酸，体外实验表明它能杀死多种对农作物有害的昆虫基因。可根据蜘蛛毒素的氨基酸序列，采用植物偏爱密码子人工合成并克隆此肽的基因。表型克隆有些植物目前并不了解它的基因产物，也没有对它们进行基因定位，但已知植物在表型上存在差异，利用表型差异或组织器官特异表达产生的差异来克隆植物基因就是表型克隆。表型克隆在策略上试图将表型与基因结构或基因表达的特征联系起来，从而分离特定表型相关基因，力求不必事先知道基因的生化功能或图谱定位，根据基因的表达效应就直接分离该基因。已从拟南芥中克隆出赤霉素合成酶基因。差异显示研究基因表达差异,研究两基因组差异表达基因的分离，为克隆复杂性状相关基因开辟重要的途径。目前已被成。
8、功地用来分离小麦热激蛋白基因和水稻蔗糖调节基因。减法杂交植物在生长发育过程中不同组织或同组织的不同发育阶段，由于基因特异性的表达，其表现不同，这样从表达特异基因的组织中提取，反转录为，从无特异基因表达的组织中提取，两者杂交，在表达特异基因的组织和无特异基因表达的组织中均表达的基因产物形成杂交分子，而特异转录的仍保持单链状态，把这种单链分离出来即为差异表达的基因。用此技术已克隆了小麦春化相关基因。扩增克隆目前已在玉米水稻向日葵巴西豆等植物中分离出富含甲硫氨酸的蛋白及其编码基因。依据序列同源性克隆基因生物的种属之间编码基因序列的同源性高于非编码区的序列。此方法的基本作法是在其它种属的同源基因被克隆的前提下，构建文库或基因组文库，然后以已知的基因序。
9、转录功能的特定序列。密码子的偏爱性由于密码子的简并性，个氨基酸可有多个密码子。表达载体中调节开关的作用在原核基因表达调控中，阻遏蛋白操纵基因系统起着重要调节开关的作用。当阻遏蛋白与操纵基因相结合时，能够阻止基因的转录。加入诱导物，使其与阻遏蛋白结合，解除阻遏，从而启动基因转录。非融合蛋白的表达所谓非融合蛋白是指外源蛋白不与宿主蛋白融合，使其自身单独表达。非融合蛋白表达载体为了在原核细胞中表达这非融合蛋白，可将带有起始密码子的真核基因插入到合适的原核启动子和序列下游。经转录和翻译，就可在原核细胞中，表达出非融合蛋白。外源蛋白的分泌表达如果合成的外源蛋白能不断从细胞内分泌出来，不仅可免受宿主细胞中蛋白酶的降解，而且有利分泌。包涵体当外源蛋白在大肠。
10、关植物优良性状基因的生物学和遗传学知识，运用先进的酶学和生物学技术及植物基因工程中的基因添加基因消减等方发，已经克隆出了与植物抗病抗虫抗除草剂抗逆境不育性高蛋白质及与植物发育有关的许多基因。其基本原理和微生物基因克隆大体相同。其策略与方法有功能克隆就是根据性状的基本生化特性这功能信息,在鉴定和已知基因的功能后克隆。特点是用基因表达的产物蛋白质来克隆基因虽然性状的编码基因是未知的。如果对其生理生化及代谢途径研究的比较清楚,就可以分离和纯化控制该性状的蛋白质。因此功能克隆的关键是分离出个纯度很高的蛋白质。目前已构建了天麻文库,制备抗体探针成功地分离了编码天麻抗真菌蛋白基因的克隆,为抗真菌基因在农业医药等方面的应用打下了基础定位克隆根据遗传连锁分析。
11、病病毒等多种基因。利用转基因动植物，我们可以加快家畜及作物品种的改良速度，提高肉奶蛋等食物品质，生产珍贵药用蛋白等。目前，利用动物生物反应器生产的药用蛋白已逐渐增多，其中有在血液中表达人血红蛋白的转基因猪在乳汁中表达抗胰蛋白酶的转基因绵羊和表达人抗凝血酶Ⅲ人组织纤溶酶原激溶剂的转基因山羊和表达人乳鉄蛋白的转基因牛等等。另外，现已培育出能生产携带胰岛素干扰素人血蛋白等基因的转基因植物，转基因植物在前文已述。医学上的应用主要是同种或异种器官移植进行生物制品和蛋白中药化学药物的生产以及生物遗传疾病的预防治疗和研究等。同种发面利用克隆技术培植人体皮肤进行植皮手术，尤其适用于皮肤大面积受损的患者异种方面先介绍基因敲除，转基因过程中，外源基因插入到染色体。
12、为探针来筛选目的克隆。动物的基因克隆动物基因克隆技术与微生物和植物基，可发现基因克隆技术虽处在理论前沿阶段，但其技术却是在不断成熟完善之中。从其操作工具方法与技术步骤微生物和动植物的基因克隆过程要点应用与发展方向及其展望方面开看，她都是个既活跃又有吸引力科学研究领域。本课题已展示了最基本的技术方法及应用，而科学的探索是永无止境的，我们应有孜孜不倦的求知精神，在生物学科学领域研究上敢于创新，永不止步六谢辞本论文在撰写过程前后参阅了些书籍和文献，摘引了些文字及数据，其本意尽可能忠于原作者。同时得到了指导者余潮老师的悉心指引和帮助，谨在此对原作者及指导教师表示衷心感谢,由于本人尚处于本科学识阶段，水平有限，论文肯定存在缺点和，诚恳希望导师或答辩组批。
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论基因克隆的前景与应用本科毕业设计论文