1、淋巴细胞发育。浆细胞。抗原接种培养液培养液培养液三细胞融合细胞融合剂分子量的是最常用和轻链与提供淋巴细胞的动物品系相同小鼠骨髓瘤细胞动物小鼠周龄体重二免疫脾细胞同源细胞性抗原只，不加佐剂，周重复次可溶性抗原首次第三代抗体基因工程抗体淋巴细胞寿命短,分泌特异系性抗体骨髓瘤细胞寿命长杂交瘤细胞寿命长，单克隆抗体流程杂交瘤技术不产生的重链而合成酶与酶次黄嘌呤磷酸核糖转化酶胸腺嘧啶核苷激酶抗体种类第代抗体多克隆抗体第二代抗体单克隆抗体而合成酶与酶次黄嘌呤磷酸核糖转化酶胸腺嘧啶核苷激酶抗体种类第代抗体多克隆抗体第二代抗体单克隆抗体第三代抗体基因工程抗体淋巴细胞寿命短,分泌特异系性抗体骨髓瘤细胞寿命长杂交瘤细胞寿命长，单克隆抗体流程杂交瘤技术不产生的重链和轻链与提供淋巴细胞的动物品系相同小鼠骨髓瘤细胞动物小鼠周龄体重二免疫脾细胞同源细胞性抗原。
2、与人恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人鼠嵌合抗体特点减少了鼠源性抗体的免疫原性保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力嵌合抗体第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备第节杂交瘤技术的基本原理杂交瘤技术二阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存第二节单克隆抗体的制备单克隆抗体的产生二单克隆抗体的纯化三单克隆抗体的性质鉴定四单克隆抗体的特性第三节基因工程抗体制备人源化抗体二小分子抗体三抗体融合蛋白四双特异性抗体五噬菌体抗体库技术第四节单克隆抗体的应用检验医学诊断试剂二蛋白质的提纯三小分子抗体的应用四抗体融合蛋白的应用五双特异抗体的应用六抗体库技术的应用和前景思考题小结第节杂交瘤技术的基本原理杂交瘤技术原理聚乙二醇细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合培养基的选择培养肿瘤细胞生物合成两条途径反复的免疫学检测筛选克隆化增殖的。
3、费工价格较高抗原要求可以不纯纯度高得量高低特异性高低稳定低高沉淀反免疫球蛋白基因进行切割拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括嵌合抗体单链抗体人源化抗体双价抗体和双特异性抗体。将小鼠基因敲除，转染人基因，在小鼠体内产生人，再经杂细胞寿命长，单克隆抗体流程杂交瘤技术不产生的重链和轻链与提供淋巴细胞的动物品系相同小鼠骨髓瘤细胞动物小鼠周龄体重二免疫脾细胞同源细胞性抗原只，不加佐剂，周重复次可溶性抗原首次，完全福氏佐剂微克抗原，周微克抗原，融合前天，加强免疫免疫小鼠。淋巴细胞。淋巴细胞发育。浆细胞。抗原接种培养液培养液培养液三细胞融合细胞融合剂分子量的是最常用的细胞融合剂作用机理诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合作用特点随机发生的，不同厂商批号分子量的，其纯度与毒性有所不同培养骨髓瘤细胞选择对。
4、导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合作用特点随机发生的，不同厂商批号分子量的，其纯度与毒性有所不同培养骨髓瘤细胞选择对数生长期的细胞进行传代培养细胞形态浑圆透亮均排列整齐避免细胞返祖定期用氮鸟嘌呤处理细胞细胞可利用合成毒性核苷酸而死亡注意事项切忌过多传代培养，可将细胞分装冻存于或液氮及干冰中免疫脾细胞的制备的淋巴细胞无菌手术饲养细胞细胞密度过低不利于细胞生长繁殖常用小鼠腹腔细胞作饲养细胞其中还有清除死亡细胞的作用饲养存活般不超过周，不影响杂交瘤细胞的纯化。饲养细胞骨髓瘤细胞与第三代抗体基因工程抗体淋巴细胞寿命短,分泌特异系性抗体骨髓瘤细胞寿命长杂交瘤细胞寿命长，单克隆抗体流程杂交瘤技术不产生的重链，完全福氏佐剂微克抗原，周微克抗原，融合前天，加强免疫免疫小鼠。淋巴细胞。淋巴细胞发育。浆细胞。抗原接种培养液培养。
5、得大量高度特异的均的抗体。适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗二单鼠细胞染色体条，细胞条，杂交瘤细胞般多条靶抗原分子量常用三单克隆抗体的性质鉴定四单克隆抗体的特性高度特异性高度的均性和可重复性弱凝集反应和不呈现沉淀反应定抗原类似物的交叉反应效价测定用腹水或培养液的稀释度表示表位测定几株单抗是否为不同表位特异的,用竞争抑制法，相加指数法及微机集群分析亲和性测定测定亲和常数杂交瘤细胞染色体秋水仙素裂解法，小抗原免疫荧光法用丙酮和甲醇按比例固定细胞二单克隆抗体的纯化多头加样枪。免疫荧光法盐析沉淀亲和层析离子交换层析的纯化类型亚类测定双扩法或法特异性测只体外培养法中空纤维培养系统单抗含量不高，牛血清难以去除腹腔注射法前天进行,预先腹腔注射细胞形成腹水高滴度腹水可溶性抗原抗体捕获法细胞亚细胞结构上的代。
6、交瘤细胞系单克隆抗体生成接种杂交瘤细胞于小鼠腹腔，腹水中即可得到高效价的单克隆抗体培养基次黄嘌呤氨基喋呤叶酸拮抗物，阻断合成主要途径胸腺嘧啶核苷“核苷酸前体”，供细胞通过替代途径合成酶利用核苷酸的前体合成核苷酸，进而合成酶与酶次黄嘌呤磷酸核糖转化酶胸腺嘧啶核苷激酶抗体种类第代抗体多克隆抗体第二代抗体单克隆抗体第三代抗体基因工程抗体淋巴细胞寿命短,分泌特异系性抗体骨髓瘤细胞寿命长杂交瘤细胞寿命长，单克隆抗体流程杂交瘤技术不产生的重链和轻链与提供淋巴细胞的动物品系相同小鼠骨髓瘤细胞动物小鼠周龄体重二免疫脾细胞同源细胞性抗原只，不加佐剂，周重复次可溶性抗原首次，完全福氏佐剂微克抗原，周微克抗原，融合前天，加强免疫免疫小鼠。淋巴细胞。淋巴细胞发育。浆细胞。抗原接种培养液培养液培养液三细胞融合细胞融合剂分子量的是最常用的细胞融合剂作用机理诱。
7、，不加佐剂，周重复次可溶性抗原首次，完全福氏佐剂微克抗原，周微克抗原，融合前天，加强免疫免疫小鼠。淋巴细胞。淋巴细胞发育。浆细胞。抗原接种培养液培养液培养液三细胞融合细胞融合剂分子量的是最常用的细胞融合剂作用机理诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合作用特点随机发生的，不同厂商批号分子量的，其纯度与毒性有所不同培养骨髓瘤细胞选择对数生长期的细胞进行传代培养细胞形态浑圆透细胞冻存液牛血清，培养液，“慢冻”分步冷冻，液氮“快融”取出立即浸入水浴中，使其迅速融化复苏杂交瘤细胞的冻存与复苏防止污染避免染色体丢失防止非分泌细胞的过度生长防止细胞密度过高而死亡细胞冷冻的意义第二节单克隆抗体的制备经过反复克隆化获得的抗体阳性杂交瘤细胞株应立即扩大培养除及时冻存的细胞外。因多次传代易引起染色体逐渐丢失而使细胞产生抗体能力逐渐。
8、减弱甚至消失，还应尽早使用获得的抗体阳性杂交瘤细胞株制备单克隆抗体。单克隆抗体的产生动物体内诱生方法腹腔注射每次用或代小鼠只体外培养法中空纤维培养系统单抗含量不高，牛血清难以去除腹腔注射法前天进行,预先腹腔注射细胞形成腹水高滴度腹水可溶性抗原抗体捕获法细胞亚细胞结构上的抗原免疫荧光法用丙酮和甲醇按比例固定细胞二单克隆抗体的纯化多头加样枪。免疫荧光法盐析沉淀亲和层析离子交换层析的纯化类型亚类测定双扩法或法特异性测定抗原类似物的交叉反应效价测定用腹水或培养液的稀释度表示表位测定几株单抗是否为不同表位特异的,用竞争抑制法，相加指数法及微机集群分析亲和性测定测定亲和常数杂交瘤细胞染色体秋水仙素裂解法，小鼠细胞染色体条，细胞条，杂交瘤细胞般多条靶抗原分子量常用三单克隆抗体的性质鉴定四单克隆抗体的特性高度特异性高度的均性和可重复性弱凝集反应和。
9、胞的作用饲养交瘤技术，产生大量完全人源化抗体人源化抗体方法从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人鼠嵌合抗体特点减少了鼠源性抗体的免疫原性保留了免疫球蛋白基因进行切割拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括嵌合抗体单链抗体人源化抗体双价抗体和双特异性抗体。将小鼠基因敲除，转染人基因，在小鼠体内产生人，再经杂应无有成本高低与的比较第三节基因工程抗体制备基因工程抗体根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对克隆抗体的优点与局限性局限性固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围反应强度不如多克隆抗体制备技术复杂费时费工价格较高抗原要求可以不纯纯度高得量高低特异性高低稳定低高沉淀反对环境敏感性单克隆抗体的特性优点在体外“永久”地存活并传代用相对不纯的抗原，获。
10、引起染色体逐渐丢失而使细胞产生抗体能力逐渐减弱甚至消失，还应尽早使用获得的抗体阳性杂交瘤细胞株制备单克隆抗体。单克隆抗体的产生动物体内诱生方法腹腔注射每次用或代小鼠，冻存与复苏防止污染避免染色体丢失防止非分泌细胞的过度生长防止细胞密度过高而死亡细胞冷冻的意义第二节单克隆抗体的制备经过反复克隆化获得的抗体阳性杂交瘤细胞株应立即扩大培养除及时冻存的细胞外。因多次传培养细胞形态浑圆透细胞冻存液牛血清，培养液，“慢冻”分步冷冻，液氮“快融”取出立即浸入水浴中，使其迅速融化复苏杂交瘤细胞的的细胞融合剂作用机理诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合作用特点随机发生的，不同厂商批号分子量的，其纯度与毒性有所不同培养骨髓瘤细胞选择对数生长期的细胞进行传代，完全福氏佐剂微克抗原，周微克抗原，融合前天，加强免疫免疫小鼠。淋巴细胞。
11、培养液三细胞融合细胞融合剂分子量的是最常用培养细胞形态浑圆透细胞冻存液牛血清，培养液，“慢冻”分步冷冻，液氮“快融”取出立即浸入水浴中，使其迅速融化复苏杂交瘤细胞的代易引起染色体逐渐丢失而使细胞产生抗体能力逐渐减弱甚至消失，还应尽早使用获得的抗体阳性杂交瘤细胞株制备单克隆抗体。单克隆抗体的产生动物体内诱生方法腹腔注射每次用或代小鼠，抗原免疫荧光法用丙酮和甲醇按比例固定细胞二单克隆抗体的纯化多头加样枪。免疫荧光法盐析沉淀亲和层析离子交换层析的纯化类型亚类测定双扩法或法特异性测鼠细胞染色体条，细胞条，杂交瘤细胞般多条靶抗原分子量常用三单克隆抗体的性质鉴定四单克隆抗体的特性高度特异性高度的均性和可重复性弱凝集反应和不呈现沉淀反应克隆抗体的优点与局限性局限性固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围反应强度不如多克隆抗体制备技术复杂费。
12、呈现沉淀反应对环境敏感性单克隆抗体的特性优点在体外“永久”地存活并传代用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的均的抗体。适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗二单克隆抗体的优点与局限性局限性固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围反应强度不如多克隆抗体制备技术复杂费时费工价格较高抗原要求可以不纯纯度高得量高低特异性高低稳定低高沉淀反应无有成本高低与的比较第三节基因工程抗体制备基因工程抗体根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括嵌合抗体单链抗体人源化抗体双价抗体和双特异性抗体。将小鼠基因敲除，转染人基因，在小鼠体内产生人，再经杂交瘤技术，产生大量完全人源化抗体人源化抗体方法从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因。
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24抗体与基因工程抗体的制备【83页医学PPT课件】文档