1、约个细胞，加入含培养基，放入，的温箱中培养。每三天换次液，直到细胞长满。当细胞长满后，移除旧的培养基，每个孔换上小鼠脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基液含小鼠脂肪间质干细胞成脂诱导分化基础培养基小鼠脂肪间质干细胞培养专用胎牛血清谷氨酰胺双抗胰岛素罗格列酮地塞米松。以下简称培养基液，三天后，把诱导培养基吸掉，每个孔加小鼠脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基液含小鼠脂肪间质干细胞成脂诱导分化基础培养基专用胎牛血清双抗谷氨酰胺胰岛素，以下简称培养基液，又过之后，再换培养基液，如此反复三次。到次的循环更换培养基液和培养基液之后，用培养基液继续培养细胞天，每三天换液次。油红染色试剂配制油红原液。油红稀释液的配制取油红饱和液毫升，加蒸馏水毫升，室温静置分钟，滤纸过滤后使用。油红染色步骤细胞涂片。中性甲醛。
2、，均加入培养液含，葡萄糖浓度，分别加入的，共同孵化小时。留取上清液，收集脂肪细胞。同时，取正常培养的脂肪细胞采用培养液含，葡萄糖浓度培养小时后留取上清液，收集脂肪细胞作为空白对照。葡萄糖测定葡萄糖氧化酶过氧化物酶法通过检测干预后细胞培养液葡萄糖浓度，计算脂肪细胞对葡萄糖的摄取率。葡萄糖氧化酶过氧化物酶法检验原理样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，将还原性氨基安替比林与酚偶联合成可被分光光度计测定的醌类化合物。主要试剂试剂苯酚试剂磷酸盐缓冲液氨基安替比林葡萄糖氧化酶过氧化物酶检验方法试剂工作液配制试剂与试剂等量混合均匀。万方数据实验条件温度样品用量波长工作液用量反应时间测定方法终点法操作工作液与标准液充分混匀，置于水浴分钟。显色后，颜色至少可。
3、糖诱导的细胞死亡，改善葡萄糖耐受性，但不影响胰岛素耐受性，即并不改善胰岛素抵抗，认为，反式金刚烷基脲基环己基苯甲酸控制高血糖效果，很大程度上归因于促进胰岛素分泌。等用抑制剂干预高脂饮食诱导的代谢综合征小鼠的研究，也发现对体重和脂肪组织重量增加及糖耐量受损没有影响，但缓解了高脂饮食诱导的脂肪肝，降低血浆和脂肪组织的促炎细胞因子水平。综上所述，肥胖状态下的脂肪因子对胰岛素抵抗的发生发展有着重要作用及抑制剂是否可改善胰岛素抵抗及其机制还有待进步研究。脂肪因子异常分泌与是胰岛素抵抗发生的关键环万方数据节。然而目前，尚无有关及抑制剂与脂肪因子之间的关系的研究。本研究通过建立高糖高胰岛素诱导的小鼠脂肪细胞胰岛素抵抗模型，旨在探索抑制剂干预是否改善脂肪因子异常分泌状态，及是否改善脂肪细胞胰岛素抵抗。。
4、固定分钟。万方数据蒸馏水洗。油红稀释液染分钟，染色时注意避光密封，显微镜下观察出现红色脂滴即终止染色。乙醇镜下分化至间质清晰，分化时间约秒即可。水洗遍。甘油封片。高糖高胰岛素法建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型及干预建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型诱导分化成熟的脂肪细胞分为两孔，每孔含个细胞，均以普通培养液含后，去除原培养液其中孔加高糖高胰岛素的培养液含，葡萄糖，胰岛素，另孔加普通培养液，培养，再次去除培养液每孔均加培养液含，葡萄糖浓度培养后，留取培养液采用葡萄糖氧化酶过氧化物酶法方法测定培养液中葡萄糖浓度，计算两孔细胞对葡萄糖摄取率。原液配制用电子天平称取用溶浓度为，常温下存放备用。万方数据干预将建立胰岛素抵抗模型后的脂肪细胞，去除培养液，分为孔，其中孔为对照组，其余孔为干预组，每孔均含细胞数约个。
5、，同时，取普通培养的脂肪细胞作为空白对照组。分别提取上清液，收集脂肪细胞采用葡萄糖氧化酶过氧化物酶法测定各组上清液中葡萄糖的浓度，计算葡萄糖摄取率采用法检测各组上清液脂联素水平万方数据采用法检测各组脂肪细胞表达，采用免疫印迹法检测各组脂肪细胞蛋白水平。结果前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞，经油红染色后，光镜下可见分化成熟的脂肪细胞内的脂滴被染成橘红色。高糖高胰岛素培养液诱导后的脂肪细胞葡萄糖摄取率与普通培养液培养的脂肪细胞葡萄糖摄取率相比有显著差异。采用，的干预后，脂肪细胞对葡萄糖摄取率分别为，均明显高于对照组，差异具有显著性意义均，且呈浓度依赖性增高均。空白对照组葡萄糖摄取率显著高于对照组。采用，的干预后，脂肪细胞上清液脂联素浓度水平分别为均明显高于对照组，差异具有显著性意义均，且呈。
6、权。作者签名导师签名年月日年月日万方数据目录英文缩略词中文摘要英文摘要论文正文前言材料和方法结果讨论结论参考文献综述参考文献已发表的文章致谢万方数据主要中英文缩略语表英文缩写英文全称中文名称可溶性环氧化物水解酶环氧二十碳三烯酸反式金烷基脲基环己基苯甲酸肿瘤坏死因子胰岛素抵抗葡萄糖转运体过氧化物酶体增殖物激活受体胰岛素受体底物细胞因子信号抑制蛋白游离脂肪酸胎牛血清磷酸盐缓冲液信使核糖核酸磷酸甘油醛脱氢酶万方数据可溶性环氧化物水解酶抑制剂对小鼠脂肪细胞胰岛素抵抗及分泌功能的影响摘要目的通过培养小鼠细胞，诱导分化为成熟脂肪细胞，用高糖高胰岛素诱导建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型，观察不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂对胰岛素抵抗脂肪细胞的葡萄糖摄取率和脂联素分泌及表达和蛋白合成的影响。方法小鼠细胞。
7、低分泌水平，改善胰岛素抵抗脂肪细胞分泌功能。关键词胰岛素抵抗脂肪细胞可溶性环氧化物水解酶抑制剂脂肪因子万方数据万方数据解酶，是使代谢和失活的主要酶类。环氧二十碳三烯酸，是类具有重要心血管保护作用的内生性脂质环氧化物，由细胞内花生四烯酸在细胞色素环氧化酶催化作用下产生。的化学性代谢性均不稳定，半衰期仅几秒到几分，在体内很快分解代谢。最主要的代谢途径是经水化降解生成二羟二十碳四烯酸，抑制可明显增加体内浓度。研究发现通过抑制剂抑制活性，增加内源性活性可发挥许多心脏保护作用，包括保护内皮功能抗抑制心梗后心肌纤维化降血压抗动脉粥样硬化，改善心肌梗死后心室及电重构，预防心律失常发生抗慢性心衰预防心肌缺血再灌注损伤等多种作用。可见抑制剂是治疗心血管疾病很有潜力的药物。近年来许多实验研究发现及抑制剂可。
8、意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读博硕士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留使用学位论文的规定，即学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印缩印或其它手段保留学位论文学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入中国优秀博硕士学位论文全文数据库，并按中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授。
9、浓度依赖性增高均。空白对照组脂联素浓度水平显著高于对照组。采用，的干预后，脂肪细胞上清液浓度水平分别为，万方数据，均明显低于对照组，差异具有显著性意义均，且呈浓度依赖性降低均。空白对照组浓度水平显著低于对照组采用，的干预后，脂肪细胞表达值分别为，均明显高于对照组，差异具有显著性意义均，且呈浓度依赖性增高均。空白对照组表达值显著高于对照组。采用，的干预后，脂肪细胞蛋白的光密度值分别为，均明显高于对照组，差异具有显著性意义均，且呈浓度依赖性增高均。空白对照组脂肪细胞蛋白的光密度值显著高于对照组。结论万方数据可溶性环氧化物水解酶抑制剂可促进胰岛素抵抗脂肪细胞蛋白表达，从而增加葡萄糖摄取，改善脂肪细胞胰岛素抵抗。可溶性环氧化物水解酶抑制剂可呈浓度依耐性促进胰岛素抵抗脂肪细胞脂联素分泌水平，而降。
10、万方数据材料与方法主要试剂材料与仪器设备见表表主要试剂材料与仪器设备仪器和试剂名称厂商和来源青霉素公司链霉素公司胎牛血清公司胰岛素公司细胞株湖南远泰生物公司加州大学戴维斯分校实验室培养液公司胰蛋白酶公司磷酸缓冲盐液公司葡萄糖检测试剂盒上海荣盛生物药业有限公司小鼠脂联素试剂盒博士德公司小鼠试剂盒博士德公司公司逆转录多聚酶链式反应试剂盒公司引物上海生工合成万方数据表续主要试剂材料与仪器设备仪器和试剂名称厂商和来源抗鼠抗体公司抗鼠抗体公司公司二抗羊抗鼠公司膜公司总蛋白提取试剂盒公司倒置显微镜公司超净工作台苏州净化设备公司培养箱公司高速离心机公司酶标仪美国伯乐公司仪公司电泳仪公司脂肪细胞诱导分化细胞放入温度，浓度的培养箱中培养，等细胞长到密度的时候，用胰酶消化。万方数据将细胞种于六孔板中，每个。
11、改善胰岛素抵抗，但观点尚不统。种观点认为增加内源性可通过改善胰岛素受体信号而发挥抗胰岛素抵抗作用。等发现通过基因过表达提高糖尿病小鼠体内的产生，可降低血压，万方数据逆转胰岛素抵抗通过血浆葡萄糖水平，稳态模型评估胰岛素抵抗指数和葡萄糖耐量试验评估。此外，在果糖诱发大鼠高血压和胰岛素抵抗模型中发现，基因治疗可改善肝脏肌肉心脏肾脏和主动脉等组织中胰岛素受体信号衰减。另有研究评估可溶性环氧化物水解酶抑制剂对喂食高脂肪高果糖饮食的小鼠摄食，体重和代谢参数的影响。结果表明，抑制剂可减低体重，降低食欲，提高代谢率，降低空腹血糖胰岛素瘦素水平，而且增加解偶联蛋白含量。另观点则认为抑制剂并不改善胰岛素抵抗。等的研究即发现，用抑制剂处理链脲佐菌素，诱导的糖尿病小鼠，研究发现降低高血糖，改善糖代谢，降低高血。
12、以稳定小时。在波长处，读取标准管和样本管的吸光度值。实验结果的计算方法样本管吸光度葡萄糖标准管浓度标准管吸光度干预前浓度干预后浓度葡萄糖摄取率干预前浓度酶联免疫吸附法，万方数据分类号密级编号硕士学位论文可溶性环氧化物水解酶抑制剂对小鼠脂肪细胞胰岛素抵抗及分泌功能的影响研究生姓名刘腾飞指导教师姓名职称邓平教授学科专业名称内科学心血管内科研究方向心血管临床年月万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全。
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绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060